新鮮羊膜對(duì)兔宮腔黏連的預(yù)防作用及對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的改善作用

范艷艷,王 娜,徐 文,葛亞杰,王麗娜

（吉林大學(xué)第一醫(yī)院普通婦一科，吉林 長春130021）

宮腔黏連（intrauterine adhesions，IUA）又稱Asherman綜合征，由子宮內(nèi)膜基底層損傷和子宮內(nèi)膜表面纖維化［1］組織的部分黏連所致。IUA與宮腔操作導(dǎo)致子宮內(nèi)膜機(jī)械性損傷［2］和感染［3］有關(guān)。此外，還有一些因素可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底層的破壞，影響細(xì)胞之間的連接［4］，使受損傷的內(nèi)膜無法正常修復(fù)，導(dǎo)致子宮腔內(nèi)纖維黏連，進(jìn)而子宮腔變形、狹窄和形成纖維瘢痕［5］，臨床上常表現(xiàn)為閉經(jīng)、痛經(jīng)、不孕、流產(chǎn)、慢性盆腔疼痛和胎盤植入［6］。研究［7-8］顯示：全世界每年有3 600～5 300萬婦女終止妊娠，其中90%發(fā)生在孕早期，孕早期流產(chǎn)后IUA發(fā)生率約為6.3%，因此IUA成為生育期女性一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。

宮腔鏡黏連分離術(shù)是治療IUA的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式，但術(shù)后復(fù)發(fā)率高，激素和球囊等臨床常用方法也無法達(dá)到滿意的效果。羊膜是一種應(yīng)用前景廣泛的生物材料，其不僅可以作為分離損傷表面的機(jī)械屏障，還可以分泌各種生長因子來調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖、遷移和分化，從而實(shí)現(xiàn)子宮腔形態(tài)和功能的恢復(fù)［9-10］。羊膜應(yīng)用于IUA預(yù)防和治療方面的研究國內(nèi)外均有報(bào)道，但其對(duì)于改善子宮內(nèi)膜容受性的作用鮮有報(bào)道。在臨床上，新鮮和凍干羊膜均可用于IUA的治療［11］，CHEN等［12］制備了人羊膜細(xì)胞外基質(zhì)衍生支架，用于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生長和給藥，通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí)該支架可以緩慢釋放雌二醇，而且比游離雌二醇更有利于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生長。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜具有使胚胎黏附和侵入并著床的特殊狀態(tài)，與子宮內(nèi)膜厚度、形態(tài)和子宮內(nèi)膜血流狀態(tài)有密切關(guān)聯(lián)。IUA在很大程度上影響子宮內(nèi)膜容受性，如何預(yù)防IUA的發(fā)生、改善IUA患者子宮內(nèi)膜容受性和提高IUA患者的受孕率，已成為婦產(chǎn)科醫(yī)生亟待解決的難題。在分子水平上，整合素αVβ3（integrinαVβ3）［13］和白血病 抑 制 因 子（leukemia inhibitory factor，LIF）［14］是公認(rèn)的子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志分子。

IUA模型的建立為研究其發(fā)病機(jī)制和有效的預(yù)防方法提供了有利條件，2013年LIU等［15］采用機(jī)械加感染的雙重?fù)p傷方法為建立穩(wěn)定的IUA模型奠定了基礎(chǔ)，經(jīng)蔡慧華等［16］的實(shí)踐，更加證實(shí)該方法的可靠性。本研究擬應(yīng)用機(jī)械和感染雙重造模方法建立兔IUA模型，于兔宮腔內(nèi)放置人新鮮羊膜觀察其預(yù)防IUA的效果，并通過比較子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF表達(dá)的變化，觀察新鮮羊膜在改善子宮內(nèi)膜容受性中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器10～12周齡成熟未孕的雌性新西蘭大白兔30只，體質(zhì)量2.5～3.5 kg，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（京）2020-0002，飼養(yǎng)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，溫度23℃，濕度60%，自由飲食，按每籠1只分配。細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）購自上海源葉生物科技有限公司，HE染色試劑盒、Masson染色試劑盒和免疫組織化學(xué)染色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，鼠抗兔整合素αVβ3多克隆抗體購自美國Creative Diagnostics公司，鼠抗兔LIF多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。生物顯微鏡購自日本Olympus公司

1.2 兔IUA模型建立按照參考文獻(xiàn)［15］中的實(shí)驗(yàn)步驟建立兔IUA模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前禁食水8 h，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和治療組，每組10只。每日觀察兔的外陰部，以兔的外陰部呈深紅色確定為動(dòng)情周期，為保證實(shí)驗(yàn)同步性，在兔動(dòng)情期造模。LPS棉線的制備：6 mg·L－1LPS溶于100 mL生理鹽水中，4℃冰箱保存，將1號(hào)醫(yī)用無菌手術(shù)縫線浸泡在LPS溶液中24 h。新鮮羊膜的制備：取孕足月剖宮產(chǎn)分娩的健康產(chǎn)婦的胎盤胎膜組織，無菌條件下于胎膜胎兒面剝離出羊膜層，修剪邊緣，生理鹽水反復(fù)沖洗，至無血液及羊水殘留，隨后將羊膜置于林格氏液中（＜8 h）。采用3%戊巴比妥鈉（1 mL·kg－1）行兔耳緣靜脈注射麻醉，仰臥于手術(shù)操作臺(tái)，下腹部術(shù)區(qū)備皮，分別用碘伏和75%酒精消毒下腹部皮膚，鋪無菌洞巾，行下腹距肛門約5 cm處正中縱切口，長約3 cm，逐層進(jìn)腹，分離膀胱，探查見雙側(cè)子宮。選取兩側(cè)子宮，于子宮中上1/3處做0.5 cm橫切口，用直徑4 mm無菌小刮勺搔刮宮腔，感覺子宮四壁粗糙時(shí)停止，兩側(cè)宮腔內(nèi)均留置LPS棉線，棉線端置于腹部，留長約3 cm尾絲以便術(shù)后第2天可以取出。治療組兔在放置LPS棉線的同時(shí)，置入與宮腔大小相當(dāng)?shù)男迈r羊膜。對(duì)照組為假手術(shù)組，不進(jìn)行宮腔處理，其余步驟同模型組。操作完成后，無菌生理鹽水沖洗腹腔，子宮復(fù)位后逐層關(guān)腹，75%酒精再次消毒切口。待兔子蘇醒后，放回兔籠，做好標(biāo)記。術(shù)后連續(xù)3 d給予慶大霉素2 mL肌肉注射預(yù)防感染。每日觀察實(shí)驗(yàn)兔的行為及精神狀態(tài)，術(shù)后第2天輕拉尾絲，取出棉線。分別于術(shù)后1和2周時(shí)，過量麻醉處死實(shí)驗(yàn)兔，每組各5只，取子宮（因兔是雙子宮，故每組子宮樣本n=10）放入甲醛溶液中固定，用于進(jìn)一步檢測(cè)。

1.3 組織標(biāo)本制備固定后的子宮標(biāo)本經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟塊，連續(xù)切成4μm石蠟切片，用于HE染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色。

1.4 HE染色觀察兔子宮內(nèi)膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)和腺體數(shù)量將石蠟切片復(fù)溫后，二甲苯浸泡2次，各10 min，脫蠟處理；取出切片，依序行酒精化處理，分別為100%酒精（5 min）、95%酒精（5 min）、90%酒 精（5 min）和80%酒 精（5 min），然后蒸餾水沖洗5 min；蘇木素染色3 min，流水沖洗、返藍(lán)，5 min后擦干；伊紅染色30 s，流水沖洗多余顏料，置入95%酒精（2 min）和100%酒精（2 min），自然風(fēng)干，樹膠封片后顯微鏡下觀察。顯微鏡200倍鏡下隨機(jī)選取每個(gè)組織標(biāo)本5個(gè)視野，計(jì)數(shù)腺體數(shù)量，取平均值作為該標(biāo)本的結(jié)果。

1.5 Masson染色檢測(cè)兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率石蠟切片復(fù)溫后脫蠟和酒精化處理同“1.4”。蘇木素染色5 min，流水沖洗4 min；1%鹽酸乙醇分化液分化25 s，流水沖洗4 min；麗春紅品紅染色液染色15 min，流水稍沖洗；1%磷鉬酸溶液分化4 min，傾去玻片的多余溶液（不水洗）；苯胺藍(lán)染色液復(fù)染4 min，傾去玻片的多余溶液（不水洗）；1%乙酸工作液處理切片，至切片無藍(lán)色脫出；95%酒精和100%酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固切片。顯微鏡200倍鏡下隨機(jī)選取每個(gè)組織標(biāo)本5個(gè)視野，采用Image Pro Plus 6.0病理圖片分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，計(jì)算兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率，子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率=子宮內(nèi)膜間質(zhì)纖維化面積/高倍視野面積×100%，代表子宮內(nèi)膜纖維化程度。

1.6 造模成功標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡下觀察大鼠子宮內(nèi)膜HE染色和Masson染色切片，觀察子宮內(nèi)膜組織腺體、子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和膠原纖維的分布及排列情況，經(jīng)造模處理的兔子宮組織出現(xiàn)腺體分布稀少、子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞缺失和排列不齊以及膠原纖維粗大、排列紊亂和密集分布，則表明造模成功。

1.7 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平石蠟切片復(fù)溫后脫蠟和酒精化處理同“1.4”。將抗原修復(fù)液預(yù)熱，沸騰后放入脫蠟水化的切片，恒溫孵育20 min；取出切片，用冷水冷卻至室溫，PBS緩沖液浸泡3 min，重復(fù)3次；取出切片，表面滴加3%雙氧水，室溫孵育10 min，PBS緩沖液浸泡3 min，重復(fù)3次；吸水紙擦干切片周圍多余液體，滴加一抗，4℃濕盒中孵育過夜。PBS 緩 沖 液 沖 洗3 min，重復(fù)3次；吸水紙擦干切片周圍多余液體，滴加二抗，37℃孵育20 min。PBS緩沖液沖洗3 min，重復(fù)4次；吸水紙擦干切片周圍多余液體，滴加DAB顯色液，鏡下觀察，以免著色過深。PBS緩沖液沖洗3 min，重復(fù)3次；蘇木素復(fù)染1 min，流水沖洗多余液體；重復(fù)梯度乙醇脫水、二甲苯透化2次，中性樹膠封片后鏡檢。顯微鏡400倍鏡下觀察切片，整合素αVβ3和LIF在子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)表現(xiàn)為棕色或棕褐色顆粒。以陰性對(duì)照無特異性著色為前提條件，隨機(jī)選取每個(gè)組織切片的5個(gè)視野觀察并采集圖像，采用Image Pro Plus 6.0病理圖片分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，檢測(cè)組織中陽性產(chǎn)物的積分光密度（integral optical density，IOD）值，取各切片IOD平均值表示目的蛋白表達(dá)水平。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量、子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率及子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組兔子宮內(nèi)膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)和腺體數(shù)量對(duì)照組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜層被單層柱狀上皮完整覆蓋，黏膜下層可見豐富的腺體，也可見少量整齊排列的成纖維細(xì)胞；模型組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜層的單層柱狀上皮明顯缺失，黏膜下層腺體幾近消失，膠原纖維明顯增多且排列紊亂，表明造模較理想；治療組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜層和黏膜下層上述病理改變明顯改善。與對(duì)照組比較，第1和2周時(shí)模型組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量明顯減少（P＜0.05）；與模型組比較，治療組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量明顯增加（P＜0.05）。與第1周時(shí)比較，第2周時(shí)各組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖1和表1。

圖1 各組兔子宮內(nèi)膜組織病理形態(tài)表現(xiàn)(HE，×200)Fig.1Pathomorphology of endometrium tissue of rabbits in various groups(HE，×200)

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量Tab.1Number of glands in endometrial tissue of rabbits in variousgroupsatdifferent time pointsn=10,±s）

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量Tab.1Number of glands in endometrial tissue of rabbits in variousgroupsatdifferent time pointsn=10,±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group.

Group Control Model Teatment P Number of glands 1st week 8.720±0.885 3.320±0.668*7.200±0.525*△＜0.05 2nd week 8.750±0.750 3.750±0.556*7.580±0.577*△＜0.05

2.2 各組兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率對(duì)照組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜下層結(jié)構(gòu)正常，無膠原纖維；模型組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜下層可見大量排列紊亂且彌漫的膠原纖維，纖維粗大，呈深藍(lán)色，表明造模較為理想；治療組兔子宮內(nèi)膜組織黏膜下層可見少量排列較規(guī)則的膠原纖維，分布較均勻，呈藍(lán)色。與對(duì)照組比較，第1和2周時(shí)模型組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織纖維化面積百分率明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，治療組兔子宮內(nèi)膜組織纖維化面積百分率明顯降低（P＜0.05）。與第1周時(shí)比較，第2周時(shí)對(duì)照組和治療組兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但模型組兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率明顯降低（P＜0.01）。見圖2和表2。

圖2 各組兔子宮內(nèi)膜組織Masson染色結(jié)果(×200)Fig.2Results of Masson staining of endometrium tissue of rabbits in various groups(×200)

表2 不同時(shí)間點(diǎn)各組兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率Tab.2Percentages of endometrial fibrosis area of rabbits in various groups at different time points (n=10，±s，η/%）

表2 不同時(shí)間點(diǎn)各組兔子宮內(nèi)膜纖維化面積百分率Tab.2Percentages of endometrial fibrosis area of rabbits in various groups at different time points (n=10，±s，η/%）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.01 compared with 1 st week.

Group Control Model Treatment P Percentage of endometrial fibrosis area 1st week 16.61±2.75 46.68±3.32*20.50±1.92*△＜0.01 2nd week 16.57±2.65 39.70±2.03*#19.97±3.42*△＜0.01

2.3 各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平對(duì)照組兔子宮內(nèi)膜組織中可見完整的腺上皮細(xì)胞和胞漿中沉積著大量棕黃色顆粒，分布廣泛，呈片狀，小部分間質(zhì)細(xì)胞也可見少許沉積，整合素αVβ3表達(dá)較弱；模型組兔子宮內(nèi)膜組織中腺上皮細(xì)胞及胞漿內(nèi)未見到明顯陽性著色，幾乎不表達(dá)；治療組兔子宮內(nèi)膜組織中腺上皮細(xì)胞及胞漿中可見到棕黃色顆粒沉積，多數(shù)呈點(diǎn)塊狀分布，小分部間質(zhì)細(xì)胞中可見少量沉積，整合素αVβ3表達(dá)不明顯。與對(duì)照組比較，第1和2周時(shí)模型組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，治療組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與第1周時(shí)比較，第2周時(shí)對(duì)照組和治療組兔子宮內(nèi)膜纖組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但模型組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。見圖3和表3。

圖3 各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)情況(免疫組織化學(xué)，×400)Fig.3Expression of integrinαVβ3 protein in endometrium tissue of rabbits in various groups(Immunohistochemistry,×400)

表3 各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平Tab.3Expressions levelsof integrinαVβ3proteinin endometrium tissue of rabbits in various groups（n=10，±s，×104）

表3 各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3蛋白表達(dá)水平Tab.3Expressions levelsof integrinαVβ3proteinin endometrium tissue of rabbits in various groups（n=10，±s，×104）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with 1st week.

Group Control Model Treatment P Expression level of integrinαVβ3 protein 1st week 5.11±0.18 1.89±0.02*4.19±0.14*△＜0.01 2nd week 5.12±0.18 2.06±0.13*#4.37±0.23*△＜0.01

2.4 各組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平對(duì)照組兔子宮內(nèi)膜組織中可見完整的腺上皮細(xì)胞及胞漿中沉積著大量棕黃色顆粒，廣泛分布，呈片狀，小部分間質(zhì)細(xì)胞也可見少許沉積，LIF表達(dá)較弱；模型組兔子宮內(nèi)膜組織腺上皮細(xì)胞及胞漿中未見到明顯陽性著色，呈點(diǎn)狀分布，LIF幾乎不表達(dá)；治療組兔子宮內(nèi)膜組織中腺上皮細(xì)胞及胞漿中可見到棕黃色顆粒沉積，多數(shù)呈點(diǎn)塊狀分布，小分部間質(zhì)細(xì)胞中可見少量沉積，LIF表達(dá)不明顯。與對(duì)照組比較，第1和2周時(shí)模型組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，治療組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與第1周時(shí)比較，第2周時(shí)對(duì)照組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但模型組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。見圖4和表4。

圖4 各組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)情況(免疫組織化學(xué)，×400)Fig.4Expressions of LIF protein in endometrium tissue of rabbits in various groups(Immunohistochemistry,×400)

表4 各組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平Tab.4Expression levels of LIFprotein in endometrium tissue of rabbits in various groupsn=10，±s，×104）

表4 各組兔子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白表達(dá)水平Tab.4Expression levels of LIFprotein in endometrium tissue of rabbits in various groupsn=10，±s，×104）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with model group；#P＜0.05 compared with 1st week.

Group Control Model Treatment P Expression level of LIF protein 1st week 5.16±0.24 1.97±0.22*4.79±0.15*△＜0.05 2nd week 5.08±0.13 2.14±0.13*#4.22±0.20*△＜0.05

3 討 論

本研究采用創(chuàng)傷和感染雙重?fù)p傷方法建立兔IUA模型，HE染色和Masson染色結(jié)果顯示：IUA模型兔子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量明顯減少，纖維化面積百分率明顯升高，說明該建模方法可靠。兔有2個(gè)獨(dú)立存在的子宮腔，與大鼠比較，兔的子宮腔更大，操作更容易，與犬、靈長類動(dòng)物和大型動(dòng)物比較，兔做為研究對(duì)象安全性高且費(fèi)用低。此外，兔多數(shù)時(shí)間處于發(fā)情狀態(tài)，更易監(jiān)測(cè)到發(fā)情期。

宮腔鏡下黏連松解術(shù)和輔助治療（包括激素［17-18］、宮內(nèi)節(jié)育器、宮內(nèi)球囊［19-21］、透明質(zhì)酸鈉和氧化再生纖維素防黏連膜［22］等）在治療IUA方面雖取得了一定的成功，但在中度和重度IUA患者中，其臨床效果及改善生育的作用有限。近年來羊膜已在臨床諸多科室應(yīng)用，是人體最厚的基底膜，是最有前途的生物材料之一，具有生物支架和屏障、抑制炎性反應(yīng)、抗纖維化、抑制瘢痕形成、抗菌和抗病毒等作用，且疫源性低。羊膜對(duì)IUA的預(yù)防作用包括以下幾方面［23］：①抗纖維化作用。下調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）-Smad2/Smad3信號(hào)途徑對(duì)預(yù)防損傷組織界面修復(fù)過程中的瘢痕化起關(guān)鍵作用，過度增殖的成纖維細(xì)胞和子宮內(nèi)膜纖維瘢痕化是IUA發(fā)病的病理基礎(chǔ)，羊膜基質(zhì)可抑制TGF-βl和TGF-β2等在轉(zhuǎn)錄分子水平上的表達(dá)，抑制肌纖維母細(xì)胞的分化，下調(diào)平滑肌肌動(dòng)蛋白和纖維連接蛋自的表達(dá)，使成纖維細(xì)胞的數(shù)量和生物學(xué)功能減低，減少纖維瘢痕的形成。②生物支架及屏障功能。嚴(yán)重的子宮內(nèi)膜損傷和損傷部位的暴露和互相接觸，是IUA形成的前提之一。羊膜含有層黏連蛋白、Ⅳ型膠原蛋白和硫酸肝素蛋白多糖等，后兩者可起屏障和支持作用，為細(xì)胞修復(fù)和增生提供充足的空間，還為損傷的組織提供良好的基質(zhì)環(huán)境，利于依附在羊膜上的細(xì)胞增殖、分化和遷移，是細(xì)胞生長的良好骨架，進(jìn)而促進(jìn)子宮內(nèi)膜組織和血管的修復(fù)。③抑制炎癥。感染是IUA形成的重要因素，IUA分離術(shù)后受損的子宮內(nèi)膜創(chuàng)面更易于感染。羊膜可抑制內(nèi)皮抑素前體蛋白、白細(xì)胞介素1和白細(xì)胞介素10等炎癥介質(zhì)的表達(dá)，同時(shí)羊膜中含有的蛋白酶抑制劑可促進(jìn)炎癥細(xì)胞的凋亡，協(xié)同抑制炎癥反應(yīng)。④羊膜不表達(dá)人白細(xì)胞抗原，不會(huì)因移植帶來的免疫排斥反應(yīng)加重炎癥反應(yīng)。改善子宮內(nèi)膜厚度、建立起良好的子宮內(nèi)膜容受性，恢復(fù)女性的正常生育能力，是治療IUA的當(dāng)務(wù)之急，目前整合素αVβ3和LIF是世界公認(rèn)的子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志分子，是檢測(cè)子宮內(nèi)膜容受性的金標(biāo)準(zhǔn)。

本研究中，通過比較各組子宮內(nèi)膜組織中腺體數(shù)量、纖維化面積百分率和整合素αVβ3及LIF蛋白表達(dá)水平，證實(shí)新鮮羊膜預(yù)防IUA效果較好，能夠在一定程度上減輕黏連的程度，提高部分內(nèi)膜容受性。研究［24］表明：新鮮羊膜在宮腔內(nèi)可存在21 d，可以提供充足的隔離時(shí)間供子宮內(nèi)膜生長。本研究比較不同時(shí)間點(diǎn)（第1周和第2周）各組兔IUA程度結(jié)果顯示：第1周對(duì)照組和治療組兔所檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)與第2周比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明新鮮羊膜預(yù)防IUA起效快，可以短時(shí)間內(nèi)達(dá)到快速修復(fù)子宮的作用；隨時(shí)間延長模型組兔IUA程度降低，可能與機(jī)體自我修復(fù)有關(guān)。本研究中各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平的差異說明新鮮羊膜可以改善子宮內(nèi)膜容受性，從而改善生育，提供生育力的保護(hù)。本研究對(duì)比第1周和第2周時(shí)各組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示：與第1周時(shí)比較，第2周時(shí)模型組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平明顯升高，可以看出隨著時(shí)間的延長，子宮內(nèi)膜通過自我修復(fù)使子宮容受性逐漸改善，與纖維化改善同步發(fā)生；而2個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組和治療組兔子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3和LIF蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)新鮮羊膜在最初已通過抑制炎癥、抗纖維化和屏障隔離等作用，為子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞提供了良好的增殖和修復(fù)環(huán)境，最大效率地促進(jìn)了子宮內(nèi)膜的修復(fù)及功能的恢復(fù)。

綜上所述，宮腔內(nèi)放置新鮮羊膜可以減輕IUA的程度，改善子宮內(nèi)膜容受性，起效快且作用持久。