Snail高表達(dá)對(duì)子癇前期大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響及其機(jī)制

張長(zhǎng)存,張愛萍,李玉琴

（青海省人民醫(yī)院產(chǎn)科，青海 西寧810000）

子癇前期（preeclampsia，PE）是常見的妊娠期高血壓疾病，以妊娠中后期血壓升高、蛋白尿、胎盤功能異常和胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限等為主要臨床癥狀，是導(dǎo)致母嬰死亡的主要原因之一［1-2］。目前對(duì)PE病因的研究通常集中在遺傳因素、免疫因素、內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷、炎癥反應(yīng)和滋養(yǎng)細(xì)胞侵入異常等方面，以上因素均可通過介導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲異常參與PE發(fā)?。?-4］。多位學(xué)者［5-7］已證實(shí)：滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力減弱可影響胎盤血管重構(gòu)，導(dǎo)致胎盤血液供應(yīng)不足，加劇血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷及胎兒缺血、缺氧，是PE發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail廣泛存在于果蠅、鼠和人等生物體中，是參與細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程的主要轉(zhuǎn)錄因子之一，幾乎可上調(diào)所有間質(zhì)標(biāo)志物及侵襲和遷移相關(guān)基因水平。研究［8-9］表明：Snail異常高表達(dá)于結(jié)直腸癌和鼻咽癌等惡性腫瘤中，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤組織學(xué)分級(jí)等侵襲相關(guān)病理特征有密切關(guān)聯(lián)。研究［10］顯示：Snail在PE產(chǎn)婦胎盤組織中低表達(dá)，可能參與該病發(fā)生發(fā)展，但關(guān)于過表達(dá)Snail對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力的影響及蛋白層面的機(jī)制研究尚少。本研究通過建立PE大鼠模型，分離、培養(yǎng)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞并轉(zhuǎn)染Snail過表達(dá)質(zhì)粒，分析Snail高表達(dá)對(duì)該細(xì)胞侵襲能力的影響，探討其相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器SPF級(jí)SD雌性大鼠26只，成熟期未孕，8周齡，體質(zhì)量（240±20）g；SPF級(jí)SD雄性大鼠13只，成熟期，8周齡，體質(zhì)量（300±20）g；大鼠均購(gòu)自北京天誠(chéng)醫(yī)藥科技有限公司，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2016-0047。大鼠常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水，環(huán)境溫度24℃～26℃，濕度40%～60%，12 h/12 h晝夜周期照明。亞硝基左旋精氨酸甲酯（nitro larginine methyl ester，L-NAME）（成都蒽萊生物科技有限公司），含綠色熒光蛋白的pL-tdTomato-mSnail質(zhì)粒和pL-td Tomato-Neo質(zhì)粒［生工生物工程（上海）股份有限公司］，TRIzol試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）SYBRⅡ試劑盒、放射免疫沉淀分析（radioimmunoprecipitation analysis，RIPA）細(xì)胞裂解液和二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），兔抗大鼠Snail、細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin-7，CK-7）、上皮性鈣黏蛋白（epithelial cadherin，E-cadherin）、神經(jīng)性鈣黏蛋白（neuronal cadherin，N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）單抗和山羊抗兔IgG二抗（深圳柏萬(wàn)森生物科技有限公司）。Step One Puls RT-qPCR儀（美國(guó)ABI公司），DMI4000B型熒光顯微鏡（德國(guó)徠卡微系統(tǒng)有限公司），Transwell小室（北京優(yōu)尼康生物科技有限公司），F(xiàn)ACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司），ChemiDoc XRS化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)（美國(guó)Biorad公司）。

1.2 PE模型建立［11］在大鼠發(fā)情期按照雌、雄2∶1比例合籠飼養(yǎng)，每天早晨觀察雌性大鼠陰栓，發(fā)現(xiàn)陰栓脫落為妊娠期第1天。將26只孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組，每組13只。從妊娠第12天開始 模 型 組 大 鼠 皮下注射L-NAME 100 mg·kg－1·d－1，對(duì)照組大鼠注射等量生理鹽水，每天1次，至第21天。模型建立成功標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓≥130 mmHg，尿蛋白≥790μg·L－1。模型組大鼠建模成功11只。剖宮產(chǎn)后處死母鼠，取出胎盤，分離絨毛膜滋養(yǎng)層組織，分為2份，一份用于提取及檢測(cè)組織mRNA和蛋白表達(dá)水平，一份用于分離和培養(yǎng)原代滋養(yǎng)細(xì)胞，其余胎盤組織用4%多聚甲醛固定觀察其組織形態(tài)表現(xiàn)。

1.3 HE染色法觀察大鼠胎盤組織形態(tài)表現(xiàn)取固定于4%多聚甲醛中的胎盤組織，酒精梯度脫水、包埋，病理切片機(jī)切成4μm的薄片，脫蠟、水化后常規(guī)HE染色，中性樹膠封片，顯微鏡觀察胎盤組織形態(tài)表現(xiàn)。

1.4 RT-qPCR法檢測(cè)大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail mRNA表達(dá)水平取2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織各50 mg，TRIzol試劑盒獲取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，瓊脂糖凝膠電泳鑒定，根據(jù)RT-qPCR SYBRⅡ試劑盒說明書設(shè)置總反應(yīng)體系為20μL，反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸50 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min。以β-actin為內(nèi)參基因，采用2－△△Ct法計(jì)算大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail mRNA表達(dá)水平。引物序列：Snail，F(xiàn)orward 5'-T G C G C A A C GCTTGCACCACCGCAC-3'，Reverse 5'-GTCACGCCATGCACGCACGTGCAC-3'；β-actin，F(xiàn)orward 5'-GTGCACACGCACTGCACGCTGCAC-3'，Reverse 5'-GTGCCACTCACGTGTCACGCTGAC-3'。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.5 Western blotting法檢測(cè)大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail蛋白表達(dá)水平取2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織各50 mg，冰上裂解30 min，離心后定量蛋白，取樣本與上樣緩沖液混合，沸水浴變性，離心取上清，電泳分離、濕轉(zhuǎn)至膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入兔抗大鼠Snail單抗（1∶1 000），4℃搖床孵育過夜，TBST洗滌后加入山羊抗兔IgG二抗（1∶8 000），室溫孵育1 h。加入ECL暗室中顯影，以Snail蛋白條帶灰度值與內(nèi)參β-actin條帶灰度值比值表示蛋白表達(dá)水平。

1.6 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞分離和培養(yǎng)［12］采用改良密度梯度離心法對(duì)原代胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分離與培養(yǎng)。剪碎絨毛膜滋養(yǎng)層組織，加入等體積胰蛋 白 酶（2.5 g·L－1）和DNA酶（100 U·mL－1）37℃水浴消化3×10 min，加入含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液終止消化，獲取細(xì)胞懸液1 200 r·min－1離心5 min。棄去上清，DMEM/F12培養(yǎng)液重懸。將細(xì)胞懸液分成2份，分別加入Percoll分離液和淋巴細(xì)胞分離液上層，以1 500 r·min－1、離心半徑12 cm離心30 min。觀察Percoll分離液不同濃度液面交界位置是否出現(xiàn)灰白色云霧狀的細(xì)胞層，吸取該細(xì)胞層及淋巴細(xì)胞分離液與培養(yǎng)液之間的細(xì)胞層，用培養(yǎng)液與抗生素鹽水洗滌2次。1 200 r·min－1離心5 min（離心半徑＝12 cm）。采用含有20%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基重懸后按照1.0×105mL－1個(gè)接種于培養(yǎng)板，于5%CO2、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h。

1.7 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞鑒定采用倒置光學(xué)顯微鏡觀察滋養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，取500μL新鮮分離細(xì)胞懸液，固定并破膜后，加入鼠抗人CK-7單克隆抗體及山羊抗鼠IgG各2μL，充分振蕩，4℃孵育20 min，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CK-7表達(dá)情況，以CK-7陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞百分率鑒定細(xì)胞純度。

1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)期滋養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞鋪滿瓶底約80%時(shí)，胰蛋白酶消化傳代后以每孔1×105個(gè)接種于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，待細(xì)胞再次鋪滿80%瓶底時(shí)，按照Lipofectamine 2000試劑盒說明書操作要求轉(zhuǎn)染。將Snail陰性對(duì)照質(zhì)粒（pL-tdTomato-Neo質(zhì)粒）和Snail過表達(dá)質(zhì)粒（pL-tdTomato-mSnail質(zhì)粒）轉(zhuǎn)染至滋養(yǎng)細(xì)胞，分別為Neo組和mSnail組，取不作處理的細(xì)胞設(shè)為空白對(duì)照組。每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后轉(zhuǎn)染效率。

1.9 RT-qPCR法和Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中Snail mRNA及蛋白表達(dá)水平取空白對(duì)照組、Neo組和mSnail組培養(yǎng)或轉(zhuǎn)染至48 h的細(xì)胞，RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中Snail mRNA表達(dá)水平，Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中Snail蛋白表達(dá)水平，操作及抗體稀釋度同“1.3”和“1.4”。

1.10 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力將Matrigel（采用PBS稀釋為1 g·L－1）以每孔50μL預(yù)先鋪設(shè)于Transwell小室中，上室加入密度為5.0×105mL－1的空白對(duì)照組、Neo組和mSnail組細(xì)胞，下室中加入600μL含有10%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)28 h至細(xì)胞降解Matrigel，取杯底濾膜，PBS沖洗，0.25%戊二醛固定，20 min后0.1%結(jié)晶紫染色，30 min后采用無(wú)菌棉簽擦去上層細(xì)胞，洗滌、晾干，顯微鏡下觀察染色情況，隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算每個(gè)視野平均穿過微孔的細(xì)胞數(shù)，代表細(xì)胞侵襲能力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。

1.11 Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平取空白對(duì)照組、Neo組和mSnail組細(xì)胞，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入1∶1 000稀釋的兔抗大鼠E-cadherin、N-cadherin和Vimentin單抗，其余操作同“1.4”，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參β-actin條帶灰度值比值表示目的蛋白表達(dá)水平。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織和各組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平，每個(gè)視野平均穿過微孔的細(xì)胞數(shù)，各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布，均以±s表示，2組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用SNK-q法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組大鼠胎盤組織形態(tài)表現(xiàn)對(duì)照組大鼠胎盤無(wú)明顯異常改變。模型組大鼠胎盤組織蛻膜帶可觀察到明顯腫脹和增厚，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，基帶厚度增加；滋養(yǎng)層葉細(xì)胞增生，細(xì)胞核碎裂，纖維蛋白沉積，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。見圖1。

圖1 2組大鼠胎盤組織形態(tài)表現(xiàn)（HE,×200）Fig.1Morphology of placenta tissue of rats in two groups(HE,×200)

2.2 2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較，模型組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）。見表1和圖2。

表1 2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平T ab.1Expression levels of Snail mRNA and protein in placenta chorionic trophoblast tissue of rats in two groups(±s）

表1 2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平T ab.1Expression levels of Snail mRNA and protein in placenta chorionic trophoblast tissue of rats in two groups(±s）

*P＜0.05 compared with control group.

Group Control Model n 13 11 Snail mRNA 0.95±0.07 0.46±0.05*Snail protein 0.51±0.06 0.17±0.02*

圖2 2組大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層組織中Snail蛋白表達(dá)電泳圖Fig.2Electrophoregramof expressionsof Snail protein in placenta chorionic trophoblast tissue of rats in two groups

2.3 大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)消化和傳代后，倒置顯微鏡下觀察：培養(yǎng)至4 h時(shí)，多數(shù)細(xì)胞沉至培養(yǎng)瓶底部，此時(shí)細(xì)胞為圓形且未貼壁；培養(yǎng)至8 h時(shí)，多數(shù)細(xì)胞已貼壁，其中約30%向周圍伸展；培養(yǎng)至24 h時(shí)，細(xì)胞完全貼壁，呈上皮樣細(xì)胞形態(tài)，片狀鋪展生長(zhǎng)，表現(xiàn)為不規(guī)則形狀和多邊形，有細(xì)刺向外突出，細(xì)胞間界限明顯。見圖3。

圖3 倒置顯微鏡下觀察大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)（×100）Fig.3Morphology of trophoblasts of placenta tissues of rats under inverted microscope(×100)

2.4 大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞純度鑒定大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，細(xì)胞表面CK-7表達(dá)豐富，CK-7陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞百分率為96.80%。見圖4。

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞表面特異性標(biāo)志物CK-7表達(dá)Fig.4Expression of specific marker CK-7 on surface of trophoblasts of rats detected by flow cytometry

2.5 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率熒光顯微鏡下觀察，

Neo組和mSnail組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均在80%以上，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見圖5。

圖5 熒光顯微鏡下觀察2組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率（×400）Fig.5Transfection efficiencies of cells in two groups observed under fluorescence microscope(×400)

2.6 各組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平

與空白對(duì)照組和Neo組比較，mSnail組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與空白對(duì)照組比較，Neo組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖6和表2。

圖6 各組細(xì)胞中Snail蛋白表達(dá)電泳圖Fig.6Electrophoregramof expressionsof Snail protein in cells in various groups

表2 各組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平Tab.2Expression levels of Snail mRNA and protein in cells in various groups (n=5,±s)

表2 各組細(xì)胞中Snail mRNA和蛋白表達(dá)水平Tab.2Expression levels of Snail mRNA and protein in cells in various groups (n=5,±s)

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with Neo group.

Group Blank control Neo m Snail Snail mRNA 0.39±0.04 0.41±0.05 2.07±0.62*△Snail protein 0.11±0.02 0.13±0.03 0.69±0.12*△

2.7 各組細(xì)胞侵襲能力空白對(duì)照組、Neo組和

mSnail組每個(gè)視野平均穿過微孔的細(xì)胞數(shù)分別為（52.40±7.85）、（55.20±8.14）和（162.00±20.04）個(gè)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=110.609，P＜0.01）。與空白對(duì)照組和Neo組比較，mSnail組每個(gè)視野平均穿過微孔的細(xì)胞數(shù)明顯增加（P＜0.01）；與空白對(duì)照組比較，Neo組每個(gè)視野平均穿過微孔的細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.595）。見圖7。

圖7 Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞中穿過微孔的細(xì)胞數(shù)（結(jié)晶紫，×400）Fig.7Number of cells passing through micropore observed by Transwell champer experiment（Crystal violet,×400）

2.8 各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與空白對(duì)照組和Neo組比較，mSnail組細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；與空白對(duì)照組比較，Neo組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖8和表3。

圖8 各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)電泳圖Fig.8Electrophoregram of expressionsof E-cadherin,N-cadherin,Vimentinproteins incells invarious groups

表3 各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平Tab.3Expression levels of E-cadherin,N-cadherin,and Vimentin proteins in cells in various groups (n=5，±s）

表3 各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平Tab.3Expression levels of E-cadherin,N-cadherin,and Vimentin proteins in cells in various groups (n=5，±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with Neo group.

Group Blank control Neo mSnail E-cadherin 0.75±0.08 0.79±0.09 0.21±0.03*△N-cadherin 0.19±0.03 0.20±0.04 0.69±0.08*△Vimentin 0.18±0.03 0.15±0.03 0.49±0.05*△

3 討 論

滋養(yǎng)細(xì)胞適度侵襲子宮蛻膜組織及淺肌層是胎盤形成的重要環(huán)節(jié)，對(duì)維持正常妊娠過程必不可少，該侵襲過程異?？蓪?dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)和PE等并發(fā)癥。PE是嚴(yán)重威脅母嬰健康的妊娠期特發(fā)性疾病，在妊娠期婦女中發(fā)病率為5%～8%［13］。目前臨床關(guān)于PE的發(fā)病機(jī)制尚處于探索階段，通常認(rèn)為與妊娠早期子宮胎盤動(dòng)脈發(fā)生缺氧和缺血有關(guān)，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲子宮螺旋動(dòng)脈的能力降低，細(xì)胞發(fā)生凋亡、壞死及合體化現(xiàn)象［14-15］。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化是上皮細(xì)胞在特定生理和病理情況下轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞的現(xiàn)象，被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲的起始步驟。滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲類似于腫瘤細(xì)胞對(duì)正常組織的浸潤(rùn)。因此，促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程、消除或減弱滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲受限是治療PE的重要方向。

本研究通過觀察分離出細(xì)胞的形態(tài)并鑒定其表面CK-7表達(dá)，證實(shí)該細(xì)胞為胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞。此外，本研究結(jié)果顯示：PE大鼠胎盤組織中Snail低表達(dá)，轉(zhuǎn)染p L-td Tomato-mSnail質(zhì)粒后Snail表達(dá)水平升高，且滋養(yǎng)細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)增加，提示Snail高表達(dá)可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力。Snail基因是鋅指蛋白家族重要成員之一，其在胚胎發(fā)育期間可結(jié)合多種效應(yīng)蛋白啟動(dòng)子，調(diào)控該蛋白表達(dá)，進(jìn)而促使原腸胚兩側(cè)細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，從而發(fā)生遷移發(fā)育為中胚層。既往報(bào)道［16-18］證實(shí)：多種惡性腫瘤中Snail表達(dá)明顯上調(diào)，且其表達(dá)水平越高，腫瘤發(fā)生深層侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)越高，預(yù)后較差，表明其參與腫瘤細(xì)胞侵襲過程。LU等［19］研究miR-335-5p在PE發(fā)病中的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)：miR-335-5p過表達(dá)可降低Snail表達(dá)，從而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞遷移及侵襲。通過轉(zhuǎn)染Snail低表達(dá)質(zhì)粒si-Snail進(jìn)行挽救實(shí)驗(yàn)［20］結(jié)果顯示：下調(diào)Snail表達(dá)可抑制滋養(yǎng)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，從反向提示Snail在滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲中的作用，暗示其可作為治療PE的潛在靶標(biāo)。

E-Cadherin、N-cadherin和Vimentin是重要的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物，任何改變E-cadherin功能或降低其表達(dá)因素，均是細(xì)胞獲取高侵襲能力的關(guān)鍵［21］。既往研究［22］顯示：在發(fā)生上皮細(xì)胞侵襲的病理及生理過程中，上皮細(xì)胞存在Vimentin高表達(dá)。LI等［23］采用目的基因干預(yù)滋養(yǎng)細(xì)胞結(jié)果顯示：滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲和遷移能力降低的同時(shí)，N-cadherin和Vimentin表達(dá)水平降低，E-cadherin表達(dá)水平升高，提示三者在PE發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。Snail通過與母性DPP同源蛋白相互作用蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)域的E-box序列，下調(diào)E-cadherin表達(dá)，上調(diào)N-cadherin和Vimentin表達(dá)，誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)生，增強(qiáng)細(xì)胞侵襲能力。本研究結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組和Neo組比較，mSnail組細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)降低，N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)升高，提示Snail可能通過下調(diào)E-cadherin表達(dá)、上調(diào)N-cadherin和Vimentin表達(dá)促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，從而促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲。

綜上所述，Snail高表達(dá)可增強(qiáng)PE大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力，推測(cè)其作用機(jī)制與Snail促進(jìn)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程有關(guān)。