蔬菜中百菌清殘留的檢測

◎ 李海軍，常 琴

（1.貴州博聯(lián)檢測技術(shù)股份有限公司，貴州 貴陽 550081；2.貴陽市南明區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測所有限公司，貴州 貴陽 550005）

百菌清（Chlorothalonil）是一種高效、低毒及低殘留的廣譜有機氯殺菌劑，對多種植物的真菌病害有良好的預(yù)防作用[1]，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、果樹、經(jīng)濟作物病害的防治[2]。但隨著生活水平的提高，人們對食品安全問題也越來越重視，百菌清殘留量的限量要求也越來越高，根據(jù)GB 2763—2019最大農(nóng)藥殘留限量，規(guī)定了蔬菜中百菌清最大殘留量為10 mg·kg-1[3]，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單中，百菌清被列為2B類致癌物[4]，并且2019年4月29日歐盟發(fā)布了百菌清正式禁用公告，因此百菌清對食品安全的影響不容忽視。

百菌清屬于有機氯類農(nóng)藥，含有電負性較強的氯原子，因此采用電子捕獲檢測器定量測定較為適合。本實驗采用新的前處理方法，通過Florisil固相萃取柱凈化[5]，用GC-uECD對黃瓜、生菜、菜心中的百菌清殘留量進行分析，為蔬菜中百菌清的殘留檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣本為黃瓜、生菜和菜心，均購自超市。

百菌清標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為100 μg·mL-1，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；Florisil固相萃取柱，安捷倫科技（中國）有限公司；正己烷、乙腈、乙酸乙酯，均為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

JJ-2均質(zhì)機（常州國華電器有限公司）、agilent 7890A氣相色譜儀（安捷倫科技（中國）有限公司）、BSA224S分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）、RE 52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、N-29氮氣吹干儀（山東云網(wǎng)數(shù)據(jù)科技有限公司）及H1850離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 儀器條件

色譜條件：HP-5石英毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 um），程序升溫，以120 ℃為起始溫度，然后 15 ℃·min-1到 250 ℃，然后 5 ℃·min-1到 260 ℃，保持5 min；載氣為高純氮氣（≥99.999%）；柱流速為1.5 ml·min-1，分流進樣，分流比為10∶1；進樣口溫度為230 ℃，檢測器溫度為320 ℃；用正己烷清洗進樣針。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密量取百菌清標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液（10 μg·mL-1）0.1 mL至10 mL容量瓶，用正己烷稀釋并定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為0.1 μg·mL-1。百菌清標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖1所示。

圖1 百菌清標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

1.3.3 樣品的制備

分別將黃瓜、生菜及菜心用均質(zhì)機打成漿，用自封袋盛裝，冷藏，備用。

1.3.4 樣品的提取

稱取5 g（精確到0.01）試樣于50 mL塑料離心管中，加入乙腈20 mL、氯化鈉2 g，渦旋混勻，置于25 ℃恒溫超聲儀中超聲20 min，離心，取上清液至100 mL雞心瓶中；殘渣再加入20 mL乙腈同上操作，取上清液至同一雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮近干，加入5 mL正己烷溶解，待凈化。

1.3.5 樣品的凈化

（1）florisil固相萃取柱預(yù)淋洗。加入2 g無水硫酸鈉至Florisil固相萃取柱中，先用5 mL正己烷+乙酸乙酯（90+10）淋洗，自然流出，待液面至無水硫酸鈉層，再加入5 mL正己烷，棄去淋洗液。

（2）凈化。取2 mL提取液至Florisil固相萃取柱中，用10 mL正己烷+乙酸乙酯（90+10）洗脫，收集洗脫液至20 mL玻璃氮吹管中，氮氣吹干儀40 ℃濃縮至近干，用1 mL正己烷溶解，上機測試。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）稀釋為 10 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再將儲備液稀釋為1 μg·mL-1的使用液。分別用移液器量取一定量的使用液，配制成0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1和0.20 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，用氣相色譜儀測定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間為7.150 min；回歸方程為Y=5.650 98x+19.225 55，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 47，被測物質(zhì)在給定范圍內(nèi)線性良好。

圖2 百菌清標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線圖

2.2 檢出限的測定

將0.01 μg·mL-1的樣品基質(zhì)溶液連續(xù)進樣7次，進樣結(jié)果計算標(biāo)準(zhǔn)偏差S，由MDL=t(n-1,0.99)×S，計算出方法檢出限為0.000 5 mg·kg-1。

2.3 回收率的測定

在添加濃度為0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-13個水平時，分別對黃瓜、生菜、菜心進行回收率試驗。測出百菌清的回收率為92.0%～104.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.9%～4.1%，說明方法準(zhǔn)確度較高。結(jié)果如表1所示。

表1 百菌清回收率結(jié)果表

3 結(jié)論

本文建立測定蔬菜中百菌清殘留的氣相色譜法（GC-uECD），該方法相對于國標(biāo)GB/T 5009.105—2003檢測方法，在前處理方面簡化了操作步驟，節(jié)約了處理時間、試劑成本，且重現(xiàn)性較好，提高了回收率，具有較低的檢出限，對蔬菜中百菌清殘留檢測更快速、準(zhǔn)確。