• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞脂肪變性模型的降脂作用和機(jī)制探討

    2021-07-18 04:19:24孟靚魏益謙高晶李麗邵紫萱孟智睿高學(xué)敏王景霞
    環(huán)球中醫(yī)藥 2021年7期
    關(guān)鍵詞:沙苑子批號(hào)脂肪酸

    孟靚 魏益謙 高晶 李麗 邵紫萱 孟智睿 高學(xué)敏 王景霞

    由于遺傳因素、飲食習(xí)慣、生活方式和年齡、絕經(jīng)、疾病及藥物等原因引起的血清膽固醇或甘油三酯的水平過(guò)高或高密度脂蛋白水平過(guò)低,稱為血脂代謝異常[1]。脂質(zhì)代謝異常與許多疾病都密切相關(guān),如動(dòng)脈粥樣硬化[2]、肥胖癥[3]、胰島素抵抗[4]、高脂血癥[5]、脂肪肝[6]等,因此對(duì)血脂代謝異常的防治有著極為重要的意義。沙苑子(SemenAstragaliComplanati)為豆科植物扁莖黃芪(AstragaluscomplanatusR.Br.)的干燥成熟種子,是中醫(yī)傳統(tǒng)補(bǔ)陽(yáng)藥,功能補(bǔ)腎助陽(yáng)、滋補(bǔ)腎精[7]。藥理研究顯示[8-10],沙苑子的總黃酮有明顯的調(diào)脂作用,能夠降低血清甘油三酯(triglyceride,TG)、膽固醇(cholesterol,TC)水平,沙苑子苷A是含量較高的黃酮類成分之一[11],本實(shí)驗(yàn)選擇沙苑子苷A為研究對(duì)象,采用游離脂肪酸(free fatty acid,F(xiàn)FA)誘導(dǎo)的肝脂肪變L02細(xì)胞模型,觀察沙苑子苷A對(duì)肝脂質(zhì)異常的調(diào)節(jié)作用,并針對(duì)TG的合成途徑深入探討沙苑子苷A的降脂機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

    正常人肝細(xì)胞株L02,購(gòu)于武漢普諾賽生命科技有限公司。

    1.2 藥物與試劑

    沙苑子苷A(美國(guó)Apexbio公司,批號(hào):A8425),高糖DMEM培養(yǎng)基(hyclone,批號(hào):sh30284.01)、胰蛋白酶-EDTA消化液(批號(hào):T4299)、青鏈霉素(批號(hào):V900929),牛血清白蛋白(批號(hào):V900933)、棕櫚酸鈉(Sodium Palmitate,PA,批號(hào):P9575)、油酸鈉(Sodium Oleate,OA,批號(hào):07501)、二甲基亞礬(Dimethyl sulfoxide,DMSO,批號(hào):C6295)、蛋白裂解液(RIPA,批號(hào):r0278)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,胎牛血清(美國(guó)Gibco公司,批號(hào):10099-141)、CCK8試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所,批號(hào):CK04),油紅O細(xì)胞染色試劑(北京索萊寶生物公司,批號(hào):g1262),BCA法蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒(凱基生物公司,批號(hào):KGP902),TG試劑盒(批號(hào):A110-1-1)、TC試劑盒(批號(hào):A111-1-1)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic pyruvic transaminase,ALT)試劑盒(批號(hào):C00902-1)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase,AST)試劑盒(批號(hào):C010-2-1)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)試劑盒(批號(hào):A020-2-2)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)試劑盒(批號(hào):A003-1-2)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)試劑盒(批號(hào):A001-3-2)均來(lái)源于南京建成生物工程研究所;實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)主要實(shí)驗(yàn)材料:引物(北京睿博興科生物技術(shù)有限公司合成),Trizol(美國(guó)Invitrogen公司,批號(hào):15596018),RNase Inhibitor(批號(hào):eo0382),RNase-free H2O(批號(hào):en0521)均購(gòu)自美國(guó)Fermentas(MBI)公司,轉(zhuǎn)錄酶、qPCR Mix(APEXBIO,批號(hào):k1070-5000),固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1c)抗體(批號(hào):ab133125)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,F(xiàn)AS)抗體(批號(hào):EPR5700)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptor α,PPARα)抗體(批號(hào):epr18516)、肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT-1A)抗體(批號(hào):ab189182)、抗兔IgG HRP辣根過(guò)氧化物酶(批號(hào):ab6721)均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

    1.3 主要儀器與設(shè)備

    超凈工作臺(tái)(青島海爾股份有限公司),二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司),高速低溫離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司),倒置顯微鏡(德國(guó)Leica),全自動(dòng)生化分析儀(Rayto),酶標(biāo)儀(Thermo),7500時(shí)實(shí)定量PCR儀(美國(guó)BIO-RAD公司),電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Bio-Rad) ,凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó) UVP)。

    1.4 脂肪變肝細(xì)胞模型的建立

    1.4.1 CCK8檢測(cè)確定FFA濃度范圍 將L02細(xì)胞鋪于96孔板中進(jìn)行培養(yǎng),待貼壁后,分別加入不同濃度的FFA(OA∶PA為2∶1),誘導(dǎo)24小時(shí),用CCK8試劑盒測(cè)定細(xì)胞增殖情況,測(cè)出OD值,篩選出FFA濃度范圍。

    1.4.2 油紅O染色的細(xì)胞形態(tài)觀察 油紅O染色可以對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴進(jìn)行定性觀察,以0.8×105/mL的密度鋪于6孔板中,每孔2 mL,24小時(shí)貼壁后加入不同劑量的FFA(OA∶PA為2∶1)作用于L02細(xì)胞,培養(yǎng)24小時(shí)后,進(jìn)行染色處理,PBS漂洗2~3遍,4%多聚甲醛固定,光鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴的數(shù)量和大小。

    1.4.3 細(xì)胞內(nèi)TG的檢測(cè) 將L02細(xì)胞以1×105/mL種植于24孔板,每孔1 mL,分為對(duì)照組和模型組,每組3孔。待細(xì)胞貼壁后,加入不同濃度的FFA(OA∶PA為2∶1)干預(yù),培養(yǎng)24小時(shí)后,檢測(cè)TG含量。

    1.5 沙苑子苷A對(duì)L02 細(xì)胞活力的影響

    稱取沙苑子苷 A 溶于 DMSO 中,獲得沙苑子苷 A 儲(chǔ)備液。分裝后放置于-20℃冰箱保存。臨用前用完全培養(yǎng)基稀釋,得到沙苑子苷 A 溶液。經(jīng)過(guò)直徑為 0.22 μm 的一次性針頭濾器,至容積為 15 mL 的經(jīng)過(guò)滅菌處理的離心管中。沙苑子苷 A 溶液終濃度為 1×10-6mM,1×10-5mM,1×10-4mM,1×10-3mM,1×10-2mM,1×10-1mM,1 mM。沙苑子苷 A 溶液中 DMSO 終濃度小于等于0.1%(V/V)。加入貼壁生長(zhǎng)的 L02 細(xì)胞中,每個(gè)濃度設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)孔。孵育 24 小時(shí),隨后每孔加入 10μL 的 CCK8 試劑,避光室溫反應(yīng) 30 分鐘。使用酶標(biāo)儀 520 nm 波長(zhǎng)檢測(cè)其 OD 值,計(jì)算細(xì)胞活力百分率。

    1.6 分組與給藥

    用完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的高糖DMEM)傳代培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞株L02,待細(xì)胞呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)是即開始實(shí)驗(yàn)。以0.5×105/mL的密度鋪板種植,將體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞分為對(duì)照組(Control)、模型組(Model)、沙苑子低、中、高劑量組(S-Low 25 μM、S-Middle 50 μM、S-High 100 μM)。對(duì)照組:加入完全培養(yǎng)基;模型組:待細(xì)胞貼壁后,加入1 mM FFA(1.4.1中確定的造模濃度)孵育24 小時(shí);沙苑子低、中、高劑量組:細(xì)胞貼壁后,沙苑子低、中、高劑量先預(yù)處理24小時(shí),再加入1 mM FFA干預(yù)24小時(shí)。然后測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。

    1.7 指標(biāo)檢測(cè)

    1.7.1 L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH、MDA含量,SOD活性水平的測(cè)定 收集各組細(xì)胞,PBS沖洗并1000 r/min離心2~3遍,酶標(biāo)儀測(cè)出相應(yīng)OD值,同時(shí)用BCA蛋白濃度試劑盒檢測(cè)蛋白含量。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書,應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

    1.7.2 L02細(xì)胞炎性因子IL-6、TNF-α的測(cè)定 收集各組細(xì)胞,ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。

    1.7.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)SREBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1A mRNA表達(dá) 提取各組細(xì)胞總RNA,根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書操作。用生物分光光度計(jì)測(cè)定 RNA濃度和純度。取 2 μg RNA 樣本,用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA,并以此為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄和 PCR反應(yīng)條件按照試劑盒說(shuō)明書設(shè)置。PCR進(jìn)行35~40個(gè)循環(huán):預(yù)變性 95℃,2分鐘;變性95 ℃,30秒;58 ℃退火,30秒 ;72 ℃延伸30秒。以β-actin 為內(nèi)參,所得 CT 值按照2-△△CT的方法進(jìn)行均一化處理后再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。引物序列見表1。

    表1 引物序列

    1.7.4 蛋白免疫印跡法檢測(cè)SREBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1A蛋白表達(dá) 收集各組細(xì)胞,RIPA裂解液裂解細(xì)胞,5000 rpm 離心去除沉淀,BCA 法測(cè)定蛋白含量,總蛋白50 μg上樣,經(jīng)10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,電轉(zhuǎn)移至 NC膜上,用含5%脫脂奶粉的TBST封閉后加入1∶1000稀釋的相應(yīng)的一抗,4℃搖床孵育過(guò)夜,TBST洗3次,加入1∶2000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗,室溫孵育1小時(shí),TBST洗3次后,用Western blot熒光檢測(cè)試劑盒顯影、定影。結(jié)果用圖象分析儀分析。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 L02細(xì)胞脂肪變模型的建立

    2.1.1 CCK8法檢測(cè)不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞活性的影響 分別將0.25 mM、0.5 mM、0.75 mM、1 mM、1.5 mM不同濃度FFA干預(yù)L02細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞存活狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,F(xiàn)FA濃度在1 mM以下時(shí),細(xì)胞死亡漂浮較少。CCK8結(jié)果顯示,當(dāng)FFA濃度超過(guò)1mM是吸光度顯著降低,細(xì)胞增殖影響較大(見表2)。

    表2 CCK8檢測(cè)不同濃度的FFA對(duì)L02細(xì)胞活性的影響

    2.1.2 油紅O染色觀察不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)脂滴形成的影響 光鏡下觀察可見,對(duì)照組細(xì)胞邊緣完整,胞漿豐富,細(xì)胞內(nèi)未見紅色脂滴,實(shí)驗(yàn)組隨著游離脂肪酸造模濃度的增加,細(xì)胞內(nèi)脂滴呈遞增趨勢(shì),當(dāng)FFA濃度大于1mM時(shí),細(xì)胞數(shù)量明顯減少(見圖1)。

    注:A:對(duì)照組;B:0.25 mM劑量組;C:0.50 mM劑量組;D:0.75 mM劑量組;E:1.00 mM劑量組;F:1.5 mM劑量組圖1 油紅O染色法觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴(油紅O染色,×200)

    2.1.3 不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞TG含量的影響 當(dāng)FFA作用濃度為1 mM時(shí),細(xì)胞活性及增殖不受大的影響,且在該作用濃度時(shí),細(xì)胞內(nèi)脂滴形成最多、甘油三酯含量最高。而當(dāng)FFA作用濃度高于1 mM時(shí),細(xì)胞的活性與增殖均受到很大影響,且細(xì)胞內(nèi)脂滴與脂質(zhì)含量減少較多,因此,選擇1 mM作為FFA誘導(dǎo)造模的最佳濃度(見表3)。

    表3 不同濃度的FFA對(duì)L02甘油三酯水平的影響

    以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,當(dāng)FFA作用濃度為1 mM時(shí),細(xì)胞活性及增殖不受大的影響,且在該作用濃度時(shí),細(xì)胞內(nèi)脂滴形成最多、甘油三酯含量最高。而當(dāng)FFA作用濃度高于1 mM時(shí),細(xì)胞的活性與增殖均受到很大影響,且細(xì)胞內(nèi)脂滴與脂質(zhì)含量減少較多,因此,選擇1 mM FFA誘導(dǎo)24小時(shí)造模成功。

    2.2 沙苑子苷A對(duì)正常L02細(xì)胞活性的影響

    CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示,當(dāng)沙苑子苷 A 濃度很小時(shí),低濃度的沙苑子苷 A 對(duì) L02 細(xì)胞有增強(qiáng)活性的作用,隨著沙苑子苷 A 濃度的升高,細(xì)胞活力逐漸與空白對(duì)照組相近(見表4)。

    表4 CCK8檢測(cè)不同濃度沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞活性的影響

    2.3 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH的影響

    與空白對(duì)照組比較,模型組L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH含量均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,沙苑子低、中、高劑量組L02細(xì)胞TG、ALT、AST、LDH含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),沙苑子苷A中、高劑量組L02細(xì)胞TC含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表5)。

    表5 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)TG、TC、ALT、AST、LDH含量的影響

    2.4 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞MDA、SOD、IL-6、TNF-α水平的影響

    與空白對(duì)照組比較,模型組L02細(xì)胞MDA、IL-6、TNF-α含量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,沙苑子苷A中、高劑量組L02細(xì)胞MDA含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),沙苑子苷A低、中、高劑量組L02細(xì)胞IL-6、TNF-α含量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與空白對(duì)照組比較,模型組L02細(xì)胞SOD活力水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);沙苑子低、中、高劑量組L02細(xì)胞SOD活力水平均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表6)。

    表6 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD、IL-6、TNF-α含量的影響

    2.5 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A mRNA表達(dá)水平的影響

    與對(duì)照組比較,模型組L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS mRNA的表達(dá)均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),PPARα mRNA的表達(dá)有升高趨勢(shì),但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CTP-1A mRNA的表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,沙苑子苷A低、中、高劑量L02細(xì)胞FAS、SPEBP-1c mRNA的表達(dá)均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),沙苑子中、高劑量組L02細(xì)胞PPARα、CPT-1A mRNA的表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表7)。

    表7 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1α mRNA的影響

    2.6 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白表達(dá)水平的影響

    與對(duì)照組比較,模型組L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS蛋白表達(dá)均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),PPARα蛋白的表達(dá)有升高趨勢(shì),但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CPT-1A蛋白的表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,沙苑子苷A低、中、高劑量L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS蛋白的表達(dá)均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),沙苑子中、高劑量組L02細(xì)胞PPARα、CPT-1A蛋白的表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表8,圖2)。

    表8 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白的影響

    注:A:空白對(duì)照組;B:1mM游離脂肪酸;C:沙苑子苷A低劑量組;D:沙苑子苷A中劑量組;E:沙苑子苷A高劑量組圖2 甘油三酯代謝相關(guān)蛋白免疫印跡圖

    3 討論

    目前,西醫(yī)常用的調(diào)脂藥有他汀類、貝特類、膽酸螯合樹脂類、煙酸類及其衍生物等,但都有一定的胃腸道不良反應(yīng)、頭痛或者肌肉疼痛,嚴(yán)重的可出現(xiàn)肝功能損害或橫紋肌溶解癥[12]。黃酮類化合物是一種廣泛存在于自然界中的天然有機(jī)化合物,具有較高的安全性和廣泛的生物活性[13],越來(lái)越多的研究顯示黃酮類化合物在調(diào)節(jié)血脂和預(yù)防冠心病方面發(fā)揮了重要作用[14],如:羅布麻葉總黃酮能減輕高血脂導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷和改善體內(nèi)氧化應(yīng)激水平[15],山楂葉總黃酮可調(diào)控法尼醇受體(farnesoid X receptor,F(xiàn)XR)/ SREBP-1c通路改善非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂[16],還有沙棘總黃酮[17],銀杏葉總黃酮[18]等等,具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景。沙苑子黃酮是沙苑子中含量較高的一類化合物,目前已經(jīng)從沙苑子中提取到超過(guò)16 種的黃酮類化合物,其中沙苑子苷A是含量較高的黃酮類成分之一[11,19]。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)沙苑子總黃酮的藥理作用研究較多,但是對(duì)單體成分的藥理研究還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用FFA誘導(dǎo) L02 構(gòu)建肝細(xì)胞脂肪變模型,觀察沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞的影響,探討其降脂作用及分子機(jī)制。

    肝臟脂肪變的細(xì)胞模型較高脂飼養(yǎng)建立的動(dòng)物模型個(gè)體差異較小,可較好的對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行把控,其中油酸和棕櫚酸以2∶1比例而成的FFA混合物建立細(xì)胞脂肪變模型更符合人體脂肪變的病理過(guò)程[20]。本實(shí)驗(yàn)采用CCK8法測(cè)定了不同濃度FFA對(duì)細(xì)胞活性的影響,同時(shí)結(jié)合油紅O染色光鏡下細(xì)胞內(nèi)脂滴形成情況和定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG水平,最終確定1 mM FFA誘導(dǎo)24小時(shí)可成功造模。沙苑子苷A干預(yù)治療后,能顯著降低L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH含量,同時(shí)降低MDA含量、提高SOD活性,降低IL-6、TNF-α的水平,說(shuō)明沙苑子苷A能減輕脂毒性造成的肝細(xì)胞損傷,緩解氧化應(yīng)激狀態(tài)和炎癥反應(yīng),提示沙苑子苷A是沙苑子降脂保肝的有效單體成分。

    研究表明,TG合成途徑中兩個(gè)重要的核受體轉(zhuǎn)錄因子SPEBP-1c和PPARα對(duì)其起關(guān)鍵作用。SREBP-1c是脂肪酸和甘油三酯合成中的關(guān)鍵分解因子,主要參與肝臟脂肪酸合成和脂肪前體細(xì)胞的分化,其過(guò)表達(dá)會(huì)引起與脂質(zhì)異常相關(guān)的疾病如糖尿病、高脂血癥、代謝綜合征的發(fā)生[21-22],可通過(guò)調(diào)節(jié)其下游靶基因FAS、ACC、GPAT的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)肝臟中TG的合成[23]。其中乙酰輔酶A羧化酶(ACC)催化乙酰輔酶A形成丙二酰輔酶A,合成長(zhǎng)鏈脂肪酸前體,脂肪酸合成酶(FAS)是一種多功能復(fù)合酶,催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A,參與長(zhǎng)鏈脂肪酸生產(chǎn)的內(nèi)源性蛋白酶[24],在合成脂肪酸方面發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[25]。GPAT是TG生物合成的限速酶[26]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,給予沙苑子苷A預(yù)處理,模型細(xì)胞SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白的表達(dá)量均顯著,表明沙苑子苷A可通過(guò)抑制肝臟SREBP-1c的表達(dá),下調(diào)肝臟FAS,抑制肝臟中TG的合成。

    PPARα是核受體超家族的成員之一,可顯著改善血脂異常和減輕動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)[27]。PPARα激活后與配體形成異二聚體[27],可調(diào)控與脂質(zhì)代謝相關(guān)的多種基因編碼的蛋白質(zhì),如脂肪酸轉(zhuǎn)位酶、乙酰輔酶A氧化酶等[28],從而介導(dǎo)TG和脂肪酸的代謝分解。CPT-1A是線粒體內(nèi)脂肪酸β氧化途徑的限速酶[29],其作用是將長(zhǎng)鏈脂肪酸從胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)如線粒體內(nèi)部,進(jìn)行β氧化[30]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,給予沙苑子苷A預(yù)處理,模型細(xì)胞PPARα、CPT-1A mRNA和蛋白表達(dá)量均顯著升高,說(shuō)明沙苑子苷A通過(guò)上調(diào)肝臟PPARα的表達(dá)水平,提高CPT-1A的活性,加速了脂肪酸的β氧化分解,進(jìn)而使TG的合成減少。

    綜上所述,沙苑子苷A對(duì)脂肪變性L02肝細(xì)胞模型具有良好的降脂和保肝作用,其降脂機(jī)制可能是沙苑子苷A通過(guò)抑制肝細(xì)胞SREBP-1c的表達(dá),降低TG合成途徑中限速酶FAS水平,降低TG合成速度;同時(shí)上調(diào)PPARα蛋白表達(dá),提高脂肪酸β氧化途徑中CPT-1A水平,加速脂肪酸的β氧化,減少TG合成,從兩方面共同作用從而達(dá)到降脂和保肝效果。

    猜你喜歡
    沙苑子批號(hào)脂肪酸
    補(bǔ)肝益腎沙苑子
    一種JTIDS 信號(hào)批號(hào)的離線合批方法
    揭開反式脂肪酸的真面目
    沙苑子總黃酮對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化潛能的影響
    醫(yī)學(xué)科技期刊中藥品生產(chǎn)批號(hào)標(biāo)注探析
    揭開反式脂肪酸的真面目
    中藥材批號(hào)劃分與質(zhì)量管理
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:26
    沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量比較研究
    鱷梨油脂肪酸組成分析
    “醫(yī)用材料批號(hào)監(jiān)控追蹤”質(zhì)量改進(jìn)及實(shí)施評(píng)估
    一进一出抽搐gif免费好疼 | 久久九九热精品免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 精品久久久久久电影网| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产精品亚洲一级av第二区| 搡老乐熟女国产| 欧美中文综合在线视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 无人区码免费观看不卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 超色免费av| 在线观看午夜福利视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 精品国产乱码久久久久久男人| www.999成人在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 老司机午夜福利在线观看视频| 久久这里只有精品19| 国产成人欧美在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产色视频综合| 黄片大片在线免费观看| 久久久久九九精品影院| 1024视频免费在线观看| 电影成人av| 午夜福利在线观看吧| a级毛片在线看网站| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 黄片大片在线免费观看| 久久性视频一级片| 欧美乱妇无乱码| 青草久久国产| 超色免费av| 大型av网站在线播放| 欧美日韩乱码在线| 欧美日韩乱码在线| а√天堂www在线а√下载| 高清黄色对白视频在线免费看| 91av网站免费观看| 天天添夜夜摸| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲av电影在线进入| 黄频高清免费视频| 老鸭窝网址在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 电影成人av| 久久久久九九精品影院| 99热国产这里只有精品6| 午夜精品久久久久久毛片777| 日本wwww免费看| 99久久精品国产亚洲精品| 精品欧美一区二区三区在线| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久精品亚洲av国产电影网| www.999成人在线观看| av中文乱码字幕在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| 少妇粗大呻吟视频| 嫩草影视91久久| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 在线永久观看黄色视频| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲av成人av| 国产免费现黄频在线看| 满18在线观看网站| 视频在线观看一区二区三区| 91国产中文字幕| 日本wwww免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 午夜福利,免费看| 宅男免费午夜| 久久香蕉国产精品| 黑丝袜美女国产一区| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利在线观看吧| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人亚洲精品av一区二区 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 村上凉子中文字幕在线| av视频免费观看在线观看| www.999成人在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 9色porny在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产激情欧美一区二区| 丝袜美足系列| av电影中文网址| a级毛片黄视频| 国产精品国产高清国产av| 亚洲中文字幕日韩| www.自偷自拍.com| 国产真人三级小视频在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 精品一区二区三区av网在线观看| 看片在线看免费视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 一区福利在线观看| 天堂√8在线中文| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精华一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| 日韩欧美在线二视频| 看免费av毛片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久香蕉精品热| 男人舔女人的私密视频| 午夜a级毛片| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 成在线人永久免费视频| 亚洲五月天丁香| 在线观看日韩欧美| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲美女黄片视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产成人系列免费观看| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产av在哪里看| 宅男免费午夜| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 五月开心婷婷网| 老鸭窝网址在线观看| 精品久久久久久电影网| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 午夜影院日韩av| 十八禁网站免费在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 青草久久国产| 夜夜夜夜夜久久久久| 脱女人内裤的视频| 亚洲av五月六月丁香网| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品国产av在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久亚洲真实| 69精品国产乱码久久久| 三级毛片av免费| 夜夜爽天天搞| www.自偷自拍.com| 99久久精品国产亚洲精品| 美国免费a级毛片| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产av在哪里看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲五月天丁香| 欧美黄色淫秽网站| 国产av在哪里看| 一区二区日韩欧美中文字幕| videosex国产| 国产成人影院久久av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 午夜激情av网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产激情久久老熟女| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 99在线人妻在线中文字幕| av网站免费在线观看视频| 国产成人av教育| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 窝窝影院91人妻| 一级黄色大片毛片| 丁香欧美五月| 在线天堂中文资源库| 日韩人妻精品一区2区三区| 两性夫妻黄色片| 99久久综合精品五月天人人| 麻豆一二三区av精品| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美av亚洲av综合av国产av| 午夜福利一区二区在线看| 性色av乱码一区二区三区2| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久精品国产综合久久久| 妹子高潮喷水视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久九九精品影院| 在线av久久热| 脱女人内裤的视频| 老司机在亚洲福利影院| 色在线成人网| 国产黄a三级三级三级人| 免费看十八禁软件| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美最黄视频在线播放免费 | 午夜免费观看网址| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产97色在线日韩免费| 一级毛片精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲专区国产一区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| bbb黄色大片| 窝窝影院91人妻| 欧美亚洲日本最大视频资源| 男女下面进入的视频免费午夜 | 91大片在线观看| 欧美日韩精品网址| 国产真人三级小视频在线观看| а√天堂www在线а√下载| 性少妇av在线| 国产99久久九九免费精品| 妹子高潮喷水视频| 欧美午夜高清在线| 男女下面插进去视频免费观看| 99久久综合精品五月天人人| 757午夜福利合集在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜精品在线福利| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲三区欧美一区| 午夜福利一区二区在线看| 久久久久久久久久久久大奶| 99久久综合精品五月天人人| 免费日韩欧美在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产av精品麻豆| 性欧美人与动物交配| 91九色精品人成在线观看| ponron亚洲| 美女高潮到喷水免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成人免费电影在线观看| 宅男免费午夜| 十八禁人妻一区二区| 级片在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 精品人妻在线不人妻| 精品福利永久在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 超碰成人久久| 亚洲美女黄片视频| 久久中文字幕人妻熟女| 桃色一区二区三区在线观看| 咕卡用的链子| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 性欧美人与动物交配| 香蕉久久夜色| 在线视频色国产色| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 美女午夜性视频免费| 大型av网站在线播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 岛国在线观看网站| 久久亚洲精品不卡| 国产成人影院久久av| 9色porny在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av | 制服人妻中文乱码| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲男人天堂网一区| 中文欧美无线码| 精品高清国产在线一区| 97碰自拍视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产国语露脸激情在线看| 久久精品国产综合久久久| 色在线成人网| av超薄肉色丝袜交足视频| 91大片在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 久久久精品欧美日韩精品| 操美女的视频在线观看| 超碰成人久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品偷伦视频观看了| 国产成人av激情在线播放| 成人av一区二区三区在线看| 久久精品人人爽人人爽视色| 操美女的视频在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 1024视频免费在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 妹子高潮喷水视频| 久久香蕉国产精品| 女人被狂操c到高潮| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 黄片大片在线免费观看| 国产精品电影一区二区三区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 男女之事视频高清在线观看| 多毛熟女@视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 波多野结衣av一区二区av| 人成视频在线观看免费观看| 伦理电影免费视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产一区二区在线av高清观看| e午夜精品久久久久久久| 9热在线视频观看99| 天堂动漫精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美人与性动交α欧美软件| 搡老岳熟女国产| 1024视频免费在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 午夜精品国产一区二区电影| 黑丝袜美女国产一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品九九99| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品国产高清国产av| 国产成年人精品一区二区 | 老汉色∧v一级毛片| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲av成人av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一本综合久久免费| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 十八禁人妻一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 精品人妻1区二区| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品人妻1区二区| av网站免费在线观看视频| 我的亚洲天堂| 乱人伦中国视频| 18禁美女被吸乳视频| 国产片内射在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久久久久久精品吃奶| 久久人妻av系列| 久久人人97超碰香蕉20202| 午夜亚洲福利在线播放| 天堂影院成人在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产亚洲精品久久久久5区| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久精品91蜜桃| 国产av精品麻豆| 久久影院123| av天堂在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线播放国产精品三级| 成人av一区二区三区在线看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲 国产 在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 搡老乐熟女国产| 色在线成人网| 国产成人影院久久av| 国产熟女xx| 精品一品国产午夜福利视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 美女国产高潮福利片在线看| 十八禁网站免费在线| 国产成人欧美在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 大陆偷拍与自拍| 黑人欧美特级aaaaaa片| 免费看a级黄色片| 免费看十八禁软件| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美精品亚洲一区二区| 一个人免费在线观看的高清视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产成人精品久久二区二区91| 精品国产乱子伦一区二区三区| 午夜福利欧美成人| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜免费成人在线视频| 亚洲五月婷婷丁香| 国产熟女xx| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品免费久久久久久久清纯| 免费在线观看日本一区| 国产精品国产av在线观看| x7x7x7水蜜桃| 超碰97精品在线观看| 免费搜索国产男女视频| 黑人操中国人逼视频| 亚洲精品一二三| 精品久久蜜臀av无| 欧美一区二区精品小视频在线| 视频在线观看一区二区三区| 美国免费a级毛片| 亚洲av美国av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 男女之事视频高清在线观看| 久久青草综合色| 国产不卡一卡二| 国产亚洲欧美98| 老汉色∧v一级毛片| 深夜精品福利| 国产成年人精品一区二区 | 亚洲精品在线美女| 久久久久久大精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产xxxxx性猛交| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 女同久久另类99精品国产91| 18禁美女被吸乳视频| 黑人操中国人逼视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人妻久久中文字幕网| 日韩免费av在线播放| 国产色视频综合| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产一区二区激情短视频| 精品第一国产精品| 涩涩av久久男人的天堂| 一区在线观看完整版| 国产精品99久久99久久久不卡| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品永久免费网站| 亚洲第一av免费看| 99久久精品国产亚洲精品| 成人av一区二区三区在线看| 在线观看午夜福利视频| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产高清videossex| 美女午夜性视频免费| 性少妇av在线| 老司机靠b影院| a在线观看视频网站| 色老头精品视频在线观看| 国产精品av久久久久免费| 一级毛片精品| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品久久久久久,| 精品无人区乱码1区二区| 不卡一级毛片| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 午夜福利在线免费观看网站| 国产激情欧美一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 久久影院123| 亚洲精品一区av在线观看| 一级作爱视频免费观看| 9热在线视频观看99| 久久精品国产亚洲av高清一级| av电影中文网址| 90打野战视频偷拍视频| xxxhd国产人妻xxx| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲国产看品久久| 狂野欧美激情性xxxx| av中文乱码字幕在线| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人手机av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品久久久久久成人av| 国产成人系列免费观看| av片东京热男人的天堂| 乱人伦中国视频| 热99re8久久精品国产| 麻豆久久精品国产亚洲av | 手机成人av网站| 日本a在线网址| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 日韩精品中文字幕看吧| 精品免费久久久久久久清纯| 咕卡用的链子| 亚洲性夜色夜夜综合| 丝袜美足系列| 午夜福利在线免费观看网站| 美女福利国产在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲av美国av| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲精品一二三| 级片在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 一进一出好大好爽视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 另类亚洲欧美激情| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 丰满的人妻完整版| 国产精品一区二区在线不卡| 久热这里只有精品99| 高清av免费在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一级a爱片免费观看的视频| 中出人妻视频一区二区| 99re在线观看精品视频| 国产成人啪精品午夜网站| 久热这里只有精品99| 免费av中文字幕在线| 国产欧美日韩一区二区三| 搡老乐熟女国产| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲av美国av| 99精品在免费线老司机午夜| 日本黄色日本黄色录像| xxxhd国产人妻xxx| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲精品久久午夜乱码| 成人免费观看视频高清| 在线观看舔阴道视频| 国产精品av久久久久免费| 一本大道久久a久久精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 精品福利永久在线观看| 久久国产精品影院| 桃红色精品国产亚洲av| 妹子高潮喷水视频| 99精品久久久久人妻精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 很黄的视频免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费不卡黄色视频| 亚洲成人免费av在线播放| 老司机福利观看| 国产精品国产av在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日本五十路高清| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 黄色丝袜av网址大全| 88av欧美| 窝窝影院91人妻| 女性生殖器流出的白浆| av电影中文网址| a级毛片在线看网站| 日本黄色视频三级网站网址| 久久九九热精品免费| 亚洲 国产 在线| e午夜精品久久久久久久| 欧美在线黄色| 久久伊人香网站| 亚洲av美国av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久中文字幕人妻熟女| 热99国产精品久久久久久7| 69av精品久久久久久| 亚洲中文字幕日韩| 国产欧美日韩综合在线一区二区| av中文乱码字幕在线| 狂野欧美激情性xxxx| 久热这里只有精品99| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产一区二区激情短视频| 一本综合久久免费| 久久亚洲真实| 亚洲精品在线美女| 国产亚洲欧美98| 国产av一区二区精品久久| 怎么达到女性高潮| 欧美激情高清一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久国产成人免费| 搡老岳熟女国产| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜免费观看网址|