通過(guò)式固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中多種受體激動(dòng)劑藥物殘留

李艷明，王 坤，朱富強(qiáng)，高會(huì)蘭

（1.濱州市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東濱州 256600；2.濱州市職業(yè)學(xué)院，山東濱州 256603）

受體激動(dòng)劑目前主要是指α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑，俗稱(chēng)“瘦肉精”。α2-受體激動(dòng)劑中的可樂(lè)定（Clonidine）是一種腎上腺素能，位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其在動(dòng)物上有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。王雷杰等[1]在飼料中添加可樂(lè)定發(fā)現(xiàn)，豬的瘦肉率明顯提高，眼肌面積增加，脂肪比率降低，背膘厚度減少。α2-受體激動(dòng)劑除可樂(lè)定還包括替扎尼定、安普樂(lè)定、溴莫尼定、賽拉嗪等物質(zhì)[2]。賽庚啶（Cyproheptadine）屬H1型抗過(guò)敏性藥物，可以用于治療蕁麻疹等疾病，并有抗5-羥色胺及抗膽堿的作用，可以使機(jī)體中樞神經(jīng)興奮，降低飽腹感，增加食量和體重[2]。β2-受體激動(dòng)劑是一種腎上腺素的受體激動(dòng)劑，其主要用途是防治支氣管哮喘。牲畜體使用后，能夠改變其體內(nèi)代謝的方式，促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)，并且可以快速轉(zhuǎn)化脂肪和分解脂肪，促進(jìn)合成骨骼肌蛋白，最終達(dá)到提高牲畜瘦肉率的目的[3?6]。常見(jiàn)的β2-受體激動(dòng)劑有鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等[7?9]。這些種類(lèi)的“瘦肉精”，進(jìn)入機(jī)體，可能會(huì)導(dǎo)致其出現(xiàn)頭暈心悸等中毒反應(yīng)，甚至死亡[10?12]，目前已經(jīng)禁止在養(yǎng)殖的食用動(dòng)物中使用受體激動(dòng)劑[13]。

α2-受體激動(dòng)劑因其在動(dòng)物養(yǎng)殖方面的非法添加可能造成安全隱患，我國(guó)農(nóng)業(yè)部的第1519 號(hào)公告[14]中明確規(guī)定，可樂(lè)定與賽庚啶禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用。我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告176 號(hào)[15]、193 號(hào)[16]、1519 號(hào)[14]，對(duì)禁止在食用動(dòng)物飼料添加相關(guān)的β2-受體激動(dòng)劑也進(jìn)行了說(shuō)明。目前對(duì)于α2-受體激動(dòng)劑在動(dòng)物組織中的研究較少，F(xiàn)an 等[17]利用QuEChERS的方法，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的技術(shù)，檢測(cè)可樂(lè)定與賽庚啶在豬肉、豬肝和豬腎的殘留。β2-受體激動(dòng)劑研究的比較多也比較成熟，檢測(cè)技術(shù)也得到了飛快發(fā)展[18?20]，包括氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[21]，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[22?24]，其中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法應(yīng)用的較多。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 31660.6-2019[25]與GB/T 22286-2008[26]分別規(guī)定了α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)方法。離子交換固相萃取小柱（SPE）是目前采用的凈化方式，α2-受體激動(dòng)劑和β2-受體激動(dòng)劑是不同的檢驗(yàn)方法，但均采用SPE 進(jìn)行凈化。SPE 需要活化，上樣，淋洗，洗脫4 個(gè)步驟，才能達(dá)到凈化的目的，方法費(fèi)時(shí)，操作繁瑣，試劑耗材大量消耗[27?28]。為濃縮樣品及避免溶劑效應(yīng)，將SPE 凈化后的樣品旋蒸或者氮吹，一批樣品旋蒸或者氮吹都會(huì)消耗近1 h的時(shí)間，并且氮吹時(shí)可能會(huì)帶來(lái)交叉污染等各種不確定因素，前處理需要花費(fèi)大量的時(shí)間。

通過(guò)式固相萃取小柱，無(wú)需活化，直接上樣并接收，即可達(dá)到去除基質(zhì)的目的，凈化效果顯著。目前沒(méi)有將通過(guò)式固相萃取小柱運(yùn)用到多種類(lèi)受體激動(dòng)劑的同時(shí)檢測(cè)當(dāng)中的相關(guān)報(bào)道。本文采用通過(guò)式固相萃取小柱，對(duì)豬肉中的α2型、β2型、H1型等11 種受體激動(dòng)劑進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，該方法可以運(yùn)用到豬肉受體激動(dòng)劑的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣品及突發(fā)事件的及時(shí)處置當(dāng)中。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

豬肉 在本市隨機(jī)選取小型市場(chǎng)與市集10 個(gè)，每個(gè)市場(chǎng)選取3 個(gè)豬肉攤位，共計(jì)30 份樣品；乙腈、甲醇 色譜純，美國(guó)TEDIA 公司；甲酸 色譜純，美國(guó)ACS 恩科化學(xué)；乙酸 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙酸銨 色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶>100.000 units/mL 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；乙酸銨緩沖溶液0.2 mol/L：稱(chēng)取15.4 g 乙酸銨，超純水溶解之后，定容至1 L，用適量乙酸調(diào)節(jié)pH 至5.2；85%乙腈水溶液（含0.2%甲酸）：量取850 mL 乙腈，加入2 mL 甲酸，超純水定容至1 L；11 種受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)品：替扎尼定（99.9%，CAS 號(hào)64461-82-1）、賽拉嗪（99.6%，CAS 號(hào)23076-35-9）、溴莫尼定（99.0%，CAS 號(hào)59803-98-4）、安普樂(lè)定（97.0%，CAS 號(hào)73218-79-8）、可樂(lè)定（98.3%，CAS號(hào)4205-91-8） Stanford Chemicals 公司；鹽酸賽庚啶（液體，濃度100 μg/mL，CAS 號(hào)969-33-5） First Standard 公司；鹽酸克倫特羅（99.3%，CAS 號(hào)21898-19-1）、沙丁胺醇半硫酸鹽（99.4%，CAS 號(hào)23031-32-5）、萊克多巴胺鹽酸鹽（95.0%，CAS 號(hào)90274-24-1）、硫酸特布他林（99.6%，CAS 號(hào)23031-32-5）

Dr.Ehrenstorfer 公司；西馬特羅（液體，濃度100 μg/mL，CAS 號(hào)54239-37-1） 農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；Wates Oasis PRIME HLB 固相萃取小柱 6cc 200 mg，沃特世科技公司；Bond Elut EMRLipid 分散SPE1g/管、EMR-Lipid Bond Elut Polish反萃管2 g/管，安捷倫科技有限公司。

Agilent1290II-6470QQQ 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLC-MS/MS） 配有ESI 電噴霧離子源并裝有MassHunter B.08.00 數(shù)據(jù)處理軟件，美國(guó)Agilent 公司；ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色譜儀、XevoTQ-XS 三重四極桿質(zhì)譜儀 美國(guó)Waters 公司；ME204T 電子天平 精度0.0001 g，上海梅特勒—托利多儀器有限公司；MILLI-Q ADWANTAGE A10 超純水機(jī) 美國(guó)密理博公司；SB25-12 DTD 超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；SGLMultis-100 多管渦旋混合儀 島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司；3k15 高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品替扎尼定、賽拉嗪、溴莫尼定、安普樂(lè)定、可樂(lè)定、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇半硫酸鹽、萊克多巴胺鹽酸鹽、硫酸特布他林各10 mg 于10 mL 棕色容量瓶當(dāng)中，用甲醇溶解，定容后，配制成濃度為1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確量取液體標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸賽庚啶、西馬特羅1 mL 于10 mL 棕色容量瓶當(dāng)中，用甲醇溶解，定容后，配制成濃度為10 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用前，用甲醇配制成1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中間液，根據(jù)需要，配制成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.2.2 超高效液相色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18RRHD 1.8 μm，2.1 mm×50 mm；流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相；A 為0.1%甲酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table 1 Condition of gradient elution

1.2.3 質(zhì)譜條件 電離模式：電噴霧正離子模式（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）質(zhì)譜分析方法；毛細(xì)管電壓3500 V；噴嘴電壓500 V；干燥氣溫度250 ℃；干燥氣流量8 L/min；霧化氣壓力45 psi；鞘氣溫度300 ℃；鞘氣流量11 L/min；11 種受體激動(dòng)劑的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 11 種物質(zhì)質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Chromatography-mass spectrometry parameters of eleven substances

1.2.4 樣品前處理 豬肉用粉碎機(jī)充分混勻粉碎，稱(chēng)取2.0000 g 左右的樣品于50 mL 離心管中，加入2 mL 0.2 mol/L 乙酸銨緩沖溶液（pH=5.2），40 μL 的β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，于37 ℃下水浴振蕩16 h，充分酶解，加入8 mL 85%乙腈水溶液（含0.2%甲酸），渦旋5 min，于10000 r/min 冷凍（?4 ℃）離心5 min，取上清液過(guò)Waters Oasis PRiME HLB 小柱，棄去前0.6 mL 初濾液，收集流出液0.5 mL，加入初始流動(dòng)相0.5 mL，渦旋混勻，過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜，UPLCMS/MS 進(jìn)樣檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

UPLC-MS/MS 配有MassHunter B.08.00 數(shù)據(jù)處理軟件，譜圖為Origin61 做圖軟件繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

為了獲得良好的分離效果，在色譜柱的選擇、流動(dòng)相的選擇以及梯度洗脫條件進(jìn)行了優(yōu)化。采用C18柱可對(duì)11 種物質(zhì)進(jìn)行很好的分離，并且峰形良好。流動(dòng)相的選取對(duì)于目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和色譜峰形狀以及靈敏度也會(huì)有很大的影響，根據(jù)11 種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)可知，加酸更易使其離子化，因此選擇0.1%（v/v）甲酸水與乙腈作為流動(dòng)相。更改流動(dòng)相的配比，使11 種物質(zhì)達(dá)到最佳的分離，同時(shí)到達(dá)最佳峰面積。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

本實(shí)驗(yàn)分別配制100 ng/mL 的各種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇ESI+模式，對(duì)11 種物質(zhì)進(jìn)行優(yōu)化參數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)樣品與流動(dòng)性混合后，不經(jīng)過(guò)色譜柱直接連接質(zhì)譜的方式，利用MRM 采集模式，優(yōu)化出母離子、子離子、碰撞電壓、碰撞能量等參數(shù)，優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表2。11 種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖和MRM 圖提取離子色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖（1.0 μg/L）Fig.1 TIC chromatograms of standard solution of eleven substances (1.0 μg/L)

圖2 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM 圖（0.5 μg/L）Fig.2 MRM chromatograms of standard solution of eleven substances (0.5 μg/L)

2.2 前處理?xiàng)l件的選取

2.2.1 提取溶劑的選擇β2-受體激動(dòng)劑大多有苯乙胺醇和叔丁基或異丙基連接而成，一般分為苯胺型（克倫特羅、西馬特羅）、苯酚型（沙丁胺醇）、間苯二酚型（菜克多巴胺）。β2-受體激動(dòng)劑在體內(nèi)代謝完，會(huì)跟羥基結(jié)合，進(jìn)而形成一個(gè)葡萄糖醛苷的代謝物，若要檢測(cè)，需將其酶解后游離出來(lái)[29]。而苯胺型的克倫特羅與蛋白結(jié)合率低，因而不需要酶解。而α2型與H1型并沒(méi)有這種現(xiàn)象，綜合考慮，仍需對(duì)豬肉進(jìn)行酶解再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，具體酶解步驟為，在豬肉樣品里面加入40 μL 的β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，在37 ℃下水浴16 h。選擇豬肉樣品4 份，分別編號(hào)樣品1、樣品2、樣品3、樣品4，樣品1 與樣品2 按照處理步驟進(jìn)行，樣品3 與樣品4 不加入β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，其余步驟相同，具體結(jié)果見(jiàn)表3。比較4 份樣品可以看出，酶解與否，對(duì)于α2型與H1型的回收率并無(wú)影響。

表3 酶解對(duì)α2 型與H1 型回收率的影響Table 3 Effect of enzymatic hydrolysis on recovery of α2 and H1

在不含待測(cè)7 種物質(zhì)的陰性樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，提取溶劑分別選用含0.2%（v/v）甲酸的純乙腈、含0.2%（v/v）甲酸的85%乙腈溶液、含0.2%（v/v）甲酸的70%乙腈溶液，具體結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，在純乙腈中，沙丁胺醇與賽庚啶的回收率僅有60%左右，而在70%的乙腈溶液中，萊克多巴胺、克倫特羅、賽庚啶、西馬特羅的回收率均低于60%，原因是純乙腈沒(méi)有讓基質(zhì)分散開(kāi)，提取效率不高，而70%乙腈濃度又偏低，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)沒(méi)有很好的提取出來(lái)。通過(guò)圖表可以清楚的判斷出，含0.2%（v/v）甲酸的85%乙腈溶液的提取溶劑對(duì)11 種物質(zhì)的提取效果最好，均滿足要求。

圖3 不同乙腈濃度下各化合物回收率對(duì)比Fig.3 Comparison of recoveries using different acetonitrile concentrations

研究甲醇濃度比例對(duì)各化合物的影響，分別選用含0.2%（v/v）甲酸的純甲醇、含0.2%（v/v）甲酸的85%甲醇溶液、含0.2%（v/v）甲酸的70%甲醇溶液，與乙腈的提取溶劑做相應(yīng)對(duì)比，如圖4。從圖4中可以清晰的看出，甲醇對(duì)于賽庚啶基本提取不到，回收率幾乎均為零。賽庚啶是易溶于甲醇的，在過(guò)PRIME HLB 小柱時(shí)，均被吸附在小柱里，沒(méi)能洗脫出來(lái)。因此，不能選擇甲醇溶液作為提取溶劑。

圖4 不同甲醇濃度比例下各化合物回收率對(duì)比Fig.4 Comparison of recoveries using different Methanol concentrations

另外甲酸的添加對(duì)提取效果也有影響，見(jiàn)圖5。在85%乙腈溶液中分別不添加、添加0.1%（v/v）、添加0.2%（v/v）的甲酸溶液，添加1.0%（v/v）的甲酸溶液，觀察每種物質(zhì)的回收率，不加甲酸的情況下，沙丁胺醇回收率只有40%，其他物質(zhì)的回收率也均在60%～85%期間，而添加0.1%或0.2%的甲酸，提取效果非常好且基本相同，但是，溴莫尼定這種物質(zhì)，提取液若是含0.2%，回收率在70%左右，比其他兩種提取液的回收率高一些，加酸可以促進(jìn)其離子化，但是添加甲酸量到1.0%時(shí)，回收率沒(méi)有明顯改變，最后選擇添加0.2%（v/v）甲酸的85%乙腈溶液作為最終提取溶劑。

圖5 不同甲酸濃度下各化合物回收率對(duì)比Fig.5 Comparison of analyte recoveries using different concentrations of formic acid

2.2.2 凈化方式的選擇 本實(shí)驗(yàn)采用三種凈化方式，方式一不凈化，方式二通過(guò)Waters Oasis PRiME HLB 通過(guò)式固相萃取小柱凈化、方式三通過(guò)Agilent EMR Lipid 凈化管凈化。結(jié)果見(jiàn)圖6，不進(jìn)行凈化，直接上機(jī)，雖然有一定的回收率，但雜質(zhì)較多，對(duì)儀器是有一定的損害的，并且基質(zhì)的去除很有限，因此回收率偏低。其他兩種的凈化方式回收率相當(dāng)，但溴莫尼定用EMR Lipid 凈化管，回收率比PRiME HLB低一些，因此選擇Waters Oasis PRiME HLB 通過(guò)式固相萃取小柱進(jìn)行凈化。

圖6 不同凈化條件下各化合物回收率對(duì)比Fig.6 Comparison of recoveries using different clean-up methods

2.3 基質(zhì)效應(yīng)與溶劑效應(yīng)

在農(nóng)獸藥物殘留檢測(cè)方面，存在著兩方面的影響，一個(gè)是基質(zhì)效應(yīng)，由于樣品基質(zhì)復(fù)雜，基質(zhì)對(duì)分析過(guò)程會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾，另一個(gè)是溶劑效應(yīng)，當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度不同時(shí)，峰形可能前展或者拖尾，二者均會(huì)影響目標(biāo)物的定量。

2.3.1 基質(zhì)效應(yīng)的影響 在運(yùn)用質(zhì)譜檢測(cè)的過(guò)程中，樣品基質(zhì)會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，對(duì)目標(biāo)物有抑制或增強(qiáng)作用，統(tǒng)稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度?；|(zhì)效應(yīng)消除常用方法有同位素內(nèi)標(biāo)法[30?31]、空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法[32]、前處理方法優(yōu)化[33]等，同位素內(nèi)標(biāo)法是消除基質(zhì)效應(yīng)最好的方法，但其缺點(diǎn)是同位素內(nèi)標(biāo)價(jià)格昂貴，不易購(gòu)買(mǎi)。本文前處理方法中，使用PRIME HLB 小柱可去除部分基質(zhì)，凈化后的樣品是否還存在基質(zhì)效應(yīng)的影響，可以利用流動(dòng)相和空白基質(zhì)提取液分別配制標(biāo)準(zhǔn)品的方式來(lái)驗(yàn)證。

用流動(dòng)相配制一份標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為1 ng/mL，再按前處理步驟得到一份空白前處理液，用其配制濃度為1 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，比較每種物質(zhì)在流動(dòng)相中和基質(zhì)中的峰面積，得到基質(zhì)響應(yīng)相對(duì)強(qiáng)度（ME），若ME>100%，表明基質(zhì)對(duì)離子起到增強(qiáng)作用，反之則為抑制作用，從表4中可以看出，除西馬特羅是基質(zhì)增強(qiáng)外，其他均為基質(zhì)抑制作用，而溴莫尼定、沙丁胺醇和特布他林的ME 值均在60%以下，說(shuō)明基質(zhì)對(duì)其抑制很?chē)?yán)重，因此選擇用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表4 11 種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液在空白基質(zhì)提取液和初始流動(dòng)相中的峰面積Table 4 Peak area of 11 substances in blank matrix extracting solution and initial mobile phase

ME（%）=基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)峰面積/流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)峰面積×100

2.3.2 溶劑效應(yīng)的影響 溶劑效應(yīng)會(huì)影響物質(zhì)的峰形與峰寬，因?yàn)榍疤幚磉^(guò)程當(dāng)中，所用提取液為85%乙腈水溶液，而儀器所用初始流動(dòng)相為5%乙腈水溶液，樣品溶液的溶劑強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度時(shí)會(huì)造成的峰展寬、峰分叉現(xiàn)象，從而影響定量。為了減少溶劑效應(yīng)，在進(jìn)樣之前用流動(dòng)相按1:1 比例稀釋?zhuān)纯山鉀Q溶劑效應(yīng)的問(wèn)題。

2.4 線性范圍、回歸方程和檢出限

選取11 種物質(zhì)濃度為1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中間液配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，定容溶劑為空白基質(zhì)溶液，在0.1～100 μg/L 的范圍內(nèi)選取0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/L 幾個(gè)濃度點(diǎn)，以濃度為橫坐標(biāo)x，待測(cè)物峰面積為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.9992～0.9999。以目標(biāo)物在空白樣品中的3 倍SNR 值計(jì)算檢出限，檢出限為0.5 μg/kg，11 種受體激動(dòng)劑的線性范圍、回歸方程和檢出限見(jiàn)表5。

表5 11 種物質(zhì)的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 5 Linear ranges,regression equation,R2 and limits of detection (LODs) of 11 substances

2.5 方法的回收率和精密度

分別向空白豬肉樣品基質(zhì)中添加各自的檢出限，2 倍檢出限，10 倍檢出限標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行3 個(gè)水平的加標(biāo)回收率試驗(yàn)，按照本方法進(jìn)行前處理，所得結(jié)果的平均回收率在81.3%～117.6%之間，RSD 值在0.7%～6.5%之間，具體數(shù)值見(jiàn)表6。

表6 11 種物質(zhì)的加標(biāo)回收試驗(yàn)及精密度（n=6）Table 6 Recovery and precision for 11 substances (n=6)

2.6 實(shí)際樣品檢測(cè)

豬肉樣品30 批次，采用本文所建立的方法進(jìn)行檢測(cè)之后，結(jié)果顯示，有2 批次克倫特羅檢出陽(yáng)性樣品，分別為1.51 和2.13 μg/kg。用另一臺(tái)Waters UPLCMS/MS 檢測(cè)后，分別為1.46 和2.09 μg/kg，排出了內(nèi)源性污染源的可能性。這兩批次豬肉為市集所購(gòu)，市集攤位流動(dòng)性大，豬肉來(lái)源不明，養(yǎng)殖戶添加了克倫特羅違禁藥物，因此本方法可以應(yīng)用在風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)樣品及突發(fā)事件的及時(shí)處置當(dāng)中。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用通過(guò)式固相萃取小柱提取豬肉里的目標(biāo)化合物，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)，建立了11 種受體激動(dòng)劑同步測(cè)定的方法。該方法凈化步驟簡(jiǎn)單，高效便捷，覆蓋多種受體激動(dòng)劑，在耗材成本上大大縮減，與SPE 凈化方式相比，有著明顯的優(yōu)勢(shì)?？紤]到溶劑效應(yīng)，用1:1 比例稀釋凈化液即可消除影響。配合空白基質(zhì)配制標(biāo)曲的方式，基本消除了基質(zhì)效應(yīng)的影響，檢出限與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)[25?26]，回收率、精密度等均滿足要求。通過(guò)豬肉中的受體激動(dòng)劑實(shí)際檢測(cè)結(jié)果可知，該方法有一定可靠性，可以很好地用于實(shí)際豬肉檢測(cè)當(dāng)中。