燈盞花素促進(jìn)缺血/再灌注損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬、抑制氧化損傷及凋亡

王娓娓，葉 宏，孫 林，鮑天昊，3

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科，云南 昆明 650101；2.昆明醫(yī)科大學(xué)病理教研室，云南 昆明 650101；3.云南省精神病醫(yī)院老年科，云南 昆明 650101)

心肌梗死后快速恢復(fù)梗死區(qū)域供血、供氧會(huì)進(jìn)一步誘發(fā)心血管損傷，這種恢復(fù)血液供應(yīng)而導(dǎo)致的組織損傷加重現(xiàn)象稱心肌缺血/再灌注損傷(myocardial ischemia-reperfusion injury，MIR)[1]。在缺血/再灌注(ischemia/reperfusion injury，I/R)損傷過程中，內(nèi)皮細(xì)胞比心肌細(xì)胞更容易發(fā)生損傷，內(nèi)皮損傷引發(fā)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，微血栓形成等級(jí)聯(lián)效應(yīng)，加速心肌細(xì)胞的I/R損傷，最終導(dǎo)致心肌壞死，功能失調(diào)[2-3]。

燈盞花素又名野黃芩苷(scutellarin，Scu)可以促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的合成和釋放從而緩解缺氧/復(fù)氧對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損害[4]。燈盞花素通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活，減少活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生，抑制核易位和DNA 結(jié)合核因子κB(nuclear factor κB，NF-κB)活性，對(duì)腦損傷具有治療作用[5]。研究者的既往研究表明，燈盞花素能夠減小I/R損傷小鼠心肌梗死面積，增加心臟射血分?jǐn)?shù)，降低血清心肌酶肌鈣蛋白I水平，抑制心肌細(xì)胞和腦細(xì)胞凋亡，抑制炎癥因子損傷，增加細(xì)胞活力。在此基礎(chǔ)上我們進(jìn)一步研究燈盞花素對(duì)I/R損傷內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(microvascular endothelium cell，MEC)購于上?？道噬锟萍加邢薰?。內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(endothelial cell culture medium，ECM)，胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)，L-谷氨酰胺的衍生物(L-glutamine derivative，Glut MAX)，β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)，0.05% 胰酶-乙二胺四乙酸(pancreatin-ethylenediaminetetraacetic acid，trypsin-EDTA)，二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)均購買于Gibco公司。噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)，表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)，堿性纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)購買于Millipore公司。聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為天根生物公司產(chǎn)品。KG-501、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD,貨號(hào)19160)、丙二醛(malondialdehyd，MDA，貨號(hào)MAK085)，乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH，貨號(hào)MAK066)，購自Sigma公司。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)為碧云天生物公司產(chǎn)品。SYBR Green Master 購買于ABI公司。燈盞花素為北京原葉生物科技有限公司(HPLC≥95%)產(chǎn)品。環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-response element binding protein，CREB,貨號(hào)9197)及Toll樣受體4(Toll-like receptor-4，TLR4，貨號(hào)14358)購于Cell Signaling 公司。微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3，貨號(hào)ab192890)購買于Abcam生物公司。辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP，貨號(hào)CW0103)購買于北京康為試劑公司。LC3，半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)，細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)，血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)及GAPDH基因引物由Invitrogen公司合成。ICAM-1 :F:5′-GGCGTCCATTTACACCTATTA-3′; R:5′-TTCCTTTTCTTCTCTTGCTTG-3′。VCAM-1:F:5′-CGGTCATGGTCAAGTGTTTG-3′; R:5′-GAG ATCCAGGGGAGATGTCA-3′。LC3:F:5′-AGCTCTG AAGGCAACAGCAACA-3′; R:5′-GCTCCATGCAGGT AGCAGGAA-3′。caspase-3:F:5′-ACCGATGTCGAT GCAGCTAA-3′; R:5′-GGTGCGGTAGAGTAAGCA TA-3′。GAPDH:F:5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′; R:5′-TTGGCTCCACCCTTCAAGTG-3′。

1.2 MEC細(xì)胞培養(yǎng)及缺血/再灌注損傷模型制作

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 使用6孔板培養(yǎng)MEC細(xì)胞(2×105/孔)，(MEC培養(yǎng)基成分：ECM，5% FBS，10 μg·L-1EGF，10 μg·L-1bFGF，2 mmol·L-1L-Glut MAX和0.1 mmol·L-1β-巰基乙醇)，24 h后換液。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為對(duì)照組(vehicle)、缺血/再灌注損傷組(I/R)、燈盞花素治療組(Scu+I/R)。

1.2.2I/R模型制作 6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下(條件為37 ℃，90% N2，5% O2，5% CO2的缺氧培養(yǎng)箱)中培養(yǎng)8 h，然后繼續(xù)復(fù)氧(置于正常培養(yǎng)箱)培養(yǎng)16 h。正常對(duì)照組MEC細(xì)胞始終在正常細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。燈盞花素治療組于缺血/再灌注開始前6 h將燈盞花素加入6孔板。

1.2.3KG-501及LPS配置 將KG-501 配制成儲(chǔ)存液(20 mmol·L-1)4 ℃儲(chǔ)存。將終濃度20 μmol·L-1的KG-501加入到MEC培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后進(jìn)行模型制作(燈盞花素治療模型及I/R模型)。

將LPS 配制成儲(chǔ)存液(1 mg·L-1)4 ℃儲(chǔ)存。使用時(shí)將其稀釋，終濃度100 μg·L-1。LPS加入培養(yǎng)基作用24 h后進(jìn)行燈盞花素治療及I/R模型制作。

1.2.4MTT測(cè)定 使用96孔板培養(yǎng)MEC細(xì)胞(0.1×105細(xì)胞/孔)，體外培養(yǎng)56 h，加入5 g·L-1的MTT在37 ℃作用4 h，去除培養(yǎng)基，加入DMSO 150 μL/孔，室溫下?lián)u床上孵育15 min，使用酶標(biāo)儀(Turner BioSystems公司)450 nm測(cè)定吸光度。細(xì)胞活力/%=(吸光度/溶劑空白對(duì)照組吸光度)×100%。燈盞花素處理濃度為0、10、30、50、100 μmol·L-1。

1.2.5LDH活性測(cè)定 按照LDH測(cè)試盒說明書對(duì)MEC細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性進(jìn)行檢測(cè)。微孔法測(cè)量，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔(ODs)、空白孔(ODb)和測(cè)定孔(ODu)、對(duì)照孔(ODc)，使用酶標(biāo)儀在450 mn測(cè)吸光度值，計(jì)算LDH值。

1.3 生化法測(cè)定MDA、SOD的表達(dá)PBS清洗MEC細(xì)胞后先加PBS(0.1 mol·L-1)和EDTA(0.05 mmol·L-1，pH 8.0)，再加入1%的Triton-X 100 50 μL，孵育1 min，加入25%的H3PO4100 μL，4 ℃離心1 h，取上清液，按說明書測(cè)定SOD及MDA水平。

1.4 RT-PCR測(cè)定使用TRIzol裂解液提取總內(nèi)皮細(xì)胞RNA。根據(jù)試劑盒的操作步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄(RNA逆轉(zhuǎn)為cDNA)。依RT-PCR試劑盒指南進(jìn)行cDNA擴(kuò)增。

1.5 Western blot 分析細(xì)胞加入RIPA裂解液提取總蛋白經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后加入一抗置于4 ℃冰箱孵育12 h，然后經(jīng)HRP二抗(兔抗，使用濃度1 ∶2 000)孵育1 h。ECL顯影、成像，經(jīng)過使用Image J軟件測(cè)定。一抗使用濃度為L(zhǎng)C3(兔抗，使用濃度1 ∶1 500)，TLR4(兔抗，使用濃度1 ∶2 000)，CREB(兔抗，使用濃度1 ∶2 000)。

2 結(jié)果

2.1 燈盞花素修復(fù)I/R損傷內(nèi)皮細(xì)胞的活力MTT測(cè)定發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，I/R組細(xì)胞活力顯著降低(P<0.01)。在細(xì)胞I/R損傷前分別加入10、30、50、100 μmol·L-1的燈盞花素均有一定程度恢復(fù)MEC細(xì)胞活力，結(jié)果表明50 μmol·L-1燈盞花素具有最好的改善細(xì)胞活力的作用，見Fig 1。結(jié)果提示：燈盞花素使I/R損傷的MEC的細(xì)胞活力得到修復(fù)，活細(xì)胞數(shù)量增多，由于50 μmol·L-1效果最好，后續(xù)實(shí)驗(yàn)燈盞花素劑量均使用50 μmol·L-1。

Fig 1 Changes in microvascular endothelial cell viability(n=5)

2.2 燈盞花素使I/R損傷微血管內(nèi)皮細(xì)胞SOD表達(dá)增加，MDA、LDH表達(dá)減少對(duì)照組SOD水平高于I/R組(P<0.01)，MDA和LDH表達(dá)低于I/R組(P<0.01)。燈盞花素治療后，SOD表達(dá)顯著增加(與I/R組比較P<0.01)，同時(shí)MDA及LDH表達(dá)降低(與I/R組比較P<0.05)，見Tab 1。結(jié)果提示：對(duì)于I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞，燈盞花素具有對(duì)抗氧化損傷的保護(hù)作用。

2.3 燈盞花素使I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1及VCAM-1表達(dá)減少研究發(fā)現(xiàn)，I/R組ICAM-1mRNA及VCAM-1mRNA明顯增加(同對(duì)照組比較P<0.01)。與I/R組比較，燈盞花素治療組ICAM-1mRNA(P<0.01)及VCAM-1mRNA(P<0.05)表達(dá)減少，見Tab 1。結(jié)果提示：對(duì)于I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞，燈盞花素具有緩解內(nèi)皮損傷的作用。

2.4 燈盞花素使I/R細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)減少研究發(fā)現(xiàn)I/R組caspase-3 mRNA表達(dá)增加(同對(duì)照組比較P<0.01)。與I/R組比較，燈盞花素治療使caspase-3 mRNA表達(dá)減少，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見Tab 2。結(jié)果提示，燈盞花素具有對(duì)抗I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用。

2.5 燈盞花素使I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬標(biāo)準(zhǔn)蛋白LC3表達(dá)增加與對(duì)照組相比，I/R組LC3 mRNA及蛋白表達(dá)均降低(P<0.05和P<0.01)。與I/R組比較，燈盞花素治療組LC3 mRNA及蛋白表達(dá)均增高(P<0.05)，見Tab 2，F(xiàn)ig 2。結(jié)果提示：I/R損傷模型組細(xì)胞自噬減少，細(xì)胞修復(fù)能力受到破壞，燈盞花素促進(jìn)微血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬及細(xì)胞自我修復(fù)。

Fig 2 Protein expression of LC3

Tab 1 Changes of SOD,MDA,LDH,ICAM-1 mRNA and VCAM-1mRNA in MEC

Tab 2 Changes of caspase-3,LC3,CREB and TLR4 in MEC

2.6 燈盞花素抑制I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞TLR4表達(dá)，增加CREB表達(dá)與對(duì)照組相比，I/R組TLR4表達(dá)增加(P<0.01)，CREB表達(dá)降低(P<0.01)。燈盞花素治療使TLR4表達(dá)減少(與I/R組比較P<0.05)，CREB表達(dá)增高(與I/R組比較P<0.05)，見Tab 2，F(xiàn)ig 3。結(jié)果提示：燈盞花素可能通過CREB及TLR4通路對(duì)I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)自噬，抑制凋亡作用

2.7 抑制CREB表達(dá)使燈盞花素治療的I/R微血管內(nèi)皮細(xì)胞LC3表達(dá)減少，抑制自噬與Scu+I/R組相比，Scu+I/R組加入CREB抑制劑(KG-501)后CREB表達(dá)減少(P<0.05)；LC3mRNA及蛋白表達(dá)減少(P<0.05)，見Tab 2，F(xiàn)ig 2,3。結(jié)果顯示：KG-501有效抑制CREB表達(dá)，CREB表達(dá)減少后使自噬減少，進(jìn)一步印證燈盞花素可能通過調(diào)控CREB表達(dá)對(duì)I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)自噬作用。

2.8 激動(dòng)TLR4表達(dá)使燈盞花素治療的I/R微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加與Scu+I/R組比較，將TLR4激動(dòng)劑(LPS)加入Scu+I/R組后，TLR4表達(dá)增加(P<0.05)，caspase-3 mRNA表達(dá)增加(P<0.05)，見Tab 2，F(xiàn)ig 3。進(jìn)一步印證燈盞花素可能通過TLR4通路對(duì)I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮抑制凋亡作用。

Fig 3 Protein expression of CREB and TLR4

3 討論

通過血運(yùn)重建恢復(fù)缺血或梗死區(qū)域的血液灌注是治療心肌梗死首要方法，然而冠狀動(dòng)脈阻塞區(qū)域血管的再通并不意味著恢復(fù)了心臟組織的有效灌注。微血管內(nèi)皮細(xì)胞是微循環(huán)系統(tǒng)的最基本單位，微血管內(nèi)皮細(xì)胞與心肌細(xì)胞之間的最小距離約1-2 μm。內(nèi)皮細(xì)胞舒縮能夠調(diào)節(jié)微血管直徑，進(jìn)而調(diào)節(jié)周圍心肌組織血流分配，通過旁分泌和自分泌方式調(diào)節(jié)心肌代謝及功能。心肌缺血/再灌注損傷的病理特點(diǎn)之一是微循環(huán)損傷，氧自由基在I/R誘導(dǎo)的微循環(huán)損傷中起主要作用，I/R會(huì)導(dǎo)致氧自由堆積。細(xì)胞膜及胞內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)、脂肪均會(huì)受到氧自由基攻擊，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損[6-7]，進(jìn)一步發(fā)生細(xì)胞凋亡或壞死。

MTT通過測(cè)定活細(xì)胞的線粒體代謝水平來反映細(xì)胞活力。本研究發(fā)現(xiàn)I/R損傷導(dǎo)致MEC活力減低，燈盞花素治療使MEC活力恢復(fù)，其中50 μmol·L-1燈盞花素劑量為最優(yōu)選擇。本結(jié)果說明燈盞花素修復(fù)MEC線粒體，增加活細(xì)胞數(shù)量，提高細(xì)胞活力。

SOD作為抗氧化酶具有清除氧自由基，緩解氧化損傷的作用。MDA是脂類物質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，是反映組織過氧化損傷程度的客觀指標(biāo)。LDH主要參與無氧酵解，對(duì)細(xì)胞受損敏感，可以作為反映細(xì)胞損傷程度的指標(biāo)。本研究指出I/R損傷引起MEC抗氧化能力降低，易發(fā)生過氧化反應(yīng)，誘發(fā)細(xì)胞氧化損傷發(fā)生。燈盞花素使I/R損傷的MEC的SOD表達(dá)增加，MDA及LDH表達(dá)減少，提示燈盞花素能夠?qū)惯^氧化反應(yīng)，緩解過氧化損傷。

I/R損傷導(dǎo)致白細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，黏附于血管內(nèi)皮并釋放活性氧產(chǎn)物和蛋白酶，誘發(fā)心肌損傷。繼而白細(xì)胞滲出到再灌注區(qū)域，通過炎癥級(jí)聯(lián)效應(yīng)誘發(fā)缺血區(qū)再損傷。大量的白細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞造成微血管堵塞，進(jìn)一步加重心肌損傷。細(xì)胞黏附糖蛋白主要包含ICAM-1和VCAM-1。ICAM-1介導(dǎo)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，VCAM-1與單核細(xì)胞與內(nèi)皮的黏附有關(guān)。生理狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞較少表達(dá)ICAM-1和VCAM-1。腦缺血時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌ICAM-1和VCAM-1，誘導(dǎo)單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞遷移，滲出，導(dǎo)致缺血區(qū)域發(fā)生再損傷[8]。I/R產(chǎn)生的活性氧導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷，ICAM-1和VCAM-1分泌增多使內(nèi)皮屏障功能障礙，微血管通透性增加，白細(xì)胞黏附，血管炎癥及粥樣斑塊破碎形成血栓[9-10]。活化的中性粒細(xì)胞透過內(nèi)皮細(xì)胞向心肌組織浸潤(rùn)，使心肌損傷加重。本研究發(fā)現(xiàn)燈盞花素使I/R損傷的MEC產(chǎn)生的ICAM-1和VCAM-1減少，有助于減輕白細(xì)胞黏附及炎性損傷，可能會(huì)避免毛細(xì)血管狹窄及血栓形成。

自噬是細(xì)胞內(nèi)“自我平衡的動(dòng)態(tài)循環(huán)”過程，通過吞噬、分解損傷物質(zhì)為細(xì)胞提供合成新物質(zhì)的原料及能源，促進(jìn)細(xì)胞在“能源不足”狀態(tài)下保持存活。損傷性刺激會(huì)導(dǎo)致自噬通路活化，形成自噬溶酶體，清除受損DNA、蛋白質(zhì)、細(xì)胞器，增加細(xì)胞抵抗損傷的能力[11]。本研究發(fā)現(xiàn)燈盞花素使I/R損傷的MEC的自噬標(biāo)準(zhǔn)蛋白LC3表達(dá)增高。在哺乳動(dòng)物中，LC3是自噬的標(biāo)志性蛋白。當(dāng)LC3與其配體蛋白p62結(jié)合后形成自噬體，誘發(fā)自噬級(jí)聯(lián)反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)燈盞花素能夠修復(fù)損傷的線粒體，恢復(fù)線粒體功能，使細(xì)胞活力增加，同時(shí)使LC3增加，啟動(dòng)自噬程序，修復(fù)受損細(xì)胞對(duì)抗氧化損傷。

CREB屬于DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，與順式作用元件結(jié)合，調(diào)控多種下游基因轉(zhuǎn)錄。研究證實(shí)，轉(zhuǎn)錄因子CREB通路在細(xì)胞增殖、神經(jīng)元再生、突觸形成及學(xué)習(xí)記憶，損傷修復(fù)等多方面起重要作用[12-13]，自噬相關(guān)基因亦受CREB調(diào)控[14]。本研究亦發(fā)現(xiàn)I/R使MEC的CREB表達(dá)減少，燈盞花素治療CREB得到提高。為了驗(yàn)證燈盞花素是否通過調(diào)節(jié)CREB表達(dá)促進(jìn)MEC自噬，我們將CREB抑制劑加入燈盞花素治療的I/R細(xì)胞發(fā)現(xiàn)LC3表達(dá)減少，抑制了自噬。因此本研究提出燈盞花素可能通過促進(jìn)CREB表達(dá)抑制I/R損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬。

caspase-3處于凋亡有序級(jí)聯(lián)通路的下游，線粒體途徑和死亡受體途徑均激活caspase-3。caspase-3激活標(biāo)志著凋亡不可逆轉(zhuǎn)。我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)燈盞花素治療可以使caspase-3 mRNA表達(dá)減少，抑制I/R導(dǎo)致的MEC凋亡。

Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)在心臟中表達(dá)水平最高，主要參與心肌組織損傷及凋亡[15]。敲除TLR4 基因可以減少大鼠心肌梗死面積，抑制TLRs下游分子表達(dá)具有減輕心肌I/R損傷的作用，TLR4信號(hào)通路在心肌I/R損傷中起關(guān)鍵調(diào)控作用[16]。研究者的既往研究表明，燈盞花素能夠減小缺血/再灌注損傷小鼠心肌梗死面積，增加心臟射血分?jǐn)?shù)，降低血清心肌酶肌鈣蛋白I水平，抑制心腦細(xì)胞凋亡，抑制炎癥因子損傷，增加細(xì)胞活力。燈盞花素可能是通過調(diào)控TLR4 基因抑制I/R損傷的心肌細(xì)胞凋亡。本研究測(cè)定了TLR4在MEC的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)I/R損傷使TLR4表達(dá)增加，燈盞花素治療后TLR4表達(dá)減少。為了驗(yàn)證燈盞花素是否通過調(diào)控TLR4表達(dá)抑制I/R損傷的MEC凋亡，研究者在燈盞花素治療的I/R細(xì)胞中加入TLR4激動(dòng)劑，發(fā)現(xiàn)caspase-3表達(dá)增加。因此推測(cè)燈盞花素可能是通過抑制TLR4表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用。

既往研究發(fā)現(xiàn)，燈盞花素可以增加大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞糖氧剝奪模型的組織纖溶酶原激活物和擴(kuò)血管物質(zhì)釋放，抑制組織纖溶酶原激活劑抑制物和縮血管物質(zhì)內(nèi)皮素的生成，使炎癥指標(biāo)TNF-α、IL-1β、IL-6下降[17]。燈盞花素能夠?qū)乖囵B(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞的缺氧/復(fù)氧損傷，降低LDH和MDA的 含量，增加SOD和 GSH-PX 的活性，以起到心肌保護(hù)作用[18]。本研究發(fā)現(xiàn)燈盞花素可以提高缺血/再灌注損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞活力、使氧化損傷指標(biāo)LDH、MDA減少，抗氧化指標(biāo)SOD增加，與既往研究具有部分一致性，但二者研究對(duì)象不同。同時(shí)，首次提出燈盞花素可以減少內(nèi)皮細(xì)胞I/R損傷模型ICAM-1和VCAM-1的釋放，有助于減輕白細(xì)胞黏附及炎性損傷，可能會(huì)避免毛細(xì)血管狹窄及血栓形成、減輕微血管炎性損傷。并且指出燈盞花素是通過促進(jìn)CREB表達(dá)促進(jìn)自噬，通過抑制TLR4表達(dá)抑制凋亡，從而發(fā)揮對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞I/R損傷模型的保護(hù)作用。