膠質(zhì)瘤組織中Beclin1及Bcl-2的表達(dá)水平及其與術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性

吳紅舉 賈東佩 胡 科 李春雷

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的、來源于神經(jīng)上皮的惡性腫瘤，占顱內(nèi)腫瘤的40%左右，病理類型包括室管膜瘤、髓母細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等，由于腫瘤多呈浸潤性生長，手術(shù)治療雖然有一定的效果，但是不易全切，在術(shù)后容易復(fù)發(fā)[1-2]。有研究認(rèn)為膠質(zhì)瘤患者術(shù)后常在短期內(nèi)復(fù)發(fā)，多數(shù)發(fā)生在距原發(fā)灶≤2 cm的范圍內(nèi)，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后[3]。多種因素可影響膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后，包括組織學(xué)分級、臨床分期、年齡[4-5]，但對影響膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的因素還不明確。隨著基因診斷學(xué)與現(xiàn)代分子生物學(xué)及的發(fā)展，部分分子標(biāo)志物已被用于預(yù)測惡性腫瘤的預(yù)后[6]。自噬相關(guān)基因Beclin1是第1個被確認(rèn)的自噬通路上的腫瘤抑制因子，也是酵母ATG6基因在哺乳動物中的同源物，其表達(dá)異常在惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要作用[7-8]。B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的重要因子，也是一種促癌因子，在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)狀況[9-10]。本文具體探討了膠質(zhì)瘤組織中Beclin1及Bcl-2的表達(dá)水平及與術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性，現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2017年3月到2020年2月選擇在本院神經(jīng)外科診治的膠質(zhì)瘤患者92例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床與隨訪資料完整；首次神經(jīng)外科手術(shù)；具有手術(shù)指征；病理診斷為膠質(zhì)瘤；術(shù)前均未行放化療及免疫治療；年齡20～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本資料被破壞者；臨床與隨訪資料缺乏者；妊娠與哺乳期婦女。

入選的92例患者中男性48例，女性44例；年齡最小34歲，最大68歲，平均年齡(52.48±3.77)歲；病理類型：星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤48例，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤32例，室管膜細(xì)胞瘤6例，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤2例，髓母細(xì)胞瘤4例；臨床分級：Ⅰ級36例，Ⅱ級24例，Ⅲ級18例，Ⅳ級14例；組織學(xué)分化：高分化38例，中分化32例，低分化22例；手術(shù)范圍：非全切22例，全切70例；術(shù)后放療34例，術(shù)后化療28例。

1.2 Beclin1及Bcl-2表達(dá)檢測

取所有患者的術(shù)后病灶組織標(biāo)本(病灶組)與癌旁組織標(biāo)本(癌旁組，距腫瘤邊緣≥2 cm正常標(biāo)本)，制成病理切片，采用酶聯(lián)免疫法檢測Beclin1及Bcl-2表達(dá)水平。Beclin1及Bcl-2一抗、二抗均購于美國BD公司，免疫組化試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒購自福州邁新公司，病理染色嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照，每例切片在陽性反應(yīng)區(qū)域選擇5個200倍視野，計算染色區(qū)域累積光密度值與面積，取平均值，由病理科醫(yī)生判斷陽性情況。

1.3 復(fù)發(fā)隨訪

通過電話、微信及門診隨診、門診復(fù)查進(jìn)行隨訪，記錄患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況，復(fù)發(fā)時間為術(shù)后至定期影像學(xué)復(fù)查發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)病灶的間隔時間。本研究所有隨訪時間截至2020年9月1日。

1.4 統(tǒng)計方法

選擇SPSS21.00軟件對本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示(對比為t檢驗)，計數(shù)數(shù)據(jù)采用例數(shù)(百分比)，即n(%)表示(對比為卡方χ2分析)，采用多元Logistic逐步回歸分析進(jìn)行多因素分析，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，P<0.05為統(tǒng)計學(xué)上差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 Beclin1及Bcl-2表達(dá)陽性率對比

病灶組的Beclin1及Bcl-2表達(dá)陽性率分別為34.8%和70.7%，癌旁組分別為72.8%和29.3%，組間對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組Beclin1及Bcl-2表達(dá)陽性率對比(例，%)

2.2 復(fù)發(fā)情況

92例患者術(shù)后都得到隨訪，復(fù)發(fā)32例，復(fù)發(fā)率為34.8%，平均復(fù)發(fā)時間為(12.01±2.17)個月。

2.3 一般資料對比

92例患者按是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組，復(fù)發(fā)組的性別、年齡、病理類型與未復(fù)發(fā)組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；2組的臨床分級、組織學(xué)分化、手術(shù)范圍、術(shù)后放療、術(shù)后化療等對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組一般資料對比

2.4 Beclin1及Bcl-2的表達(dá)陽性率及與術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性

復(fù)發(fā)組的Beclin1、Bcl-2的表達(dá)陽性率與未復(fù)發(fā)組對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。Spearman相關(guān)性分析膠質(zhì)瘤患者Beclin1、Bcl-2的表達(dá)陽性率與術(shù)后復(fù)發(fā)存在相關(guān)性(γ=-0.655、0.598，P=0.000)。

表3 Beclin1及Bcl-2的表達(dá)陽性率及與術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性(例，%)

2.5 影響因素分析

多元Logistic逐步回歸分析顯示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析(n=92)

3 討論

有研究顯示膠質(zhì)瘤患者經(jīng)單純手術(shù)治療后的5年生存率≦25%，而經(jīng)過化療、放療、手術(shù)等綜合治療方法，中位生存時間也很少超過15個月[11]，主要在于膠質(zhì)瘤具有腫瘤浸潤性及高度間變的生長特點，病灶多處于腦部重要結(jié)構(gòu)，且與正常腦組織界限不明確，手術(shù)難以徹底切除[12-13]。本研究顯示病灶組的Beclin1及Bcl-2表達(dá)陽性率分別為34.8%和70.7%，癌旁組分別為72.8%和29.3%，組間對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。從機(jī)制上分析，Beclin1可通過Ⅲ型PI3K形成一個復(fù)合體定位于自噬前體結(jié)構(gòu)，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)自噬活性。Beclin1表達(dá)缺失可使得多種惡性腫瘤逃避自噬死亡，從而使得腫瘤惡性增殖[14]。Bcl-2定位于人類染色體18a21上，主要發(fā)揮細(xì)胞凋亡調(diào)控的作用。Bcl-2的高表達(dá)可促使Racl由失活狀態(tài)向激活狀態(tài)轉(zhuǎn)變，進(jìn)而影響細(xì)胞的極化性，促進(jìn)細(xì)胞運動和遷移[15]。

膠質(zhì)瘤的總體預(yù)后隨著外科手術(shù)及輔助治療手段的不斷更新改進(jìn)，已經(jīng)有了很大的改善，但是很多患者在術(shù)后容易發(fā)生復(fù)發(fā)，直接影響患者的預(yù)后[16]。膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)定位為原發(fā)性膠質(zhì)瘤術(shù)后再次出現(xiàn)復(fù)發(fā)灶，呈多中心性或散在病灶，可單發(fā)也可多發(fā)[17]。本研究中92例患者術(shù)后復(fù)發(fā)32例，復(fù)發(fā)率為34.8%，平均復(fù)發(fā)時間為(12.01±2.17)個月。復(fù)發(fā)組的性別、年齡、病理類型與未復(fù)發(fā)組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，2組的臨床分級、組織學(xué)分化、手術(shù)范圍、術(shù)后放療、術(shù)后化療等對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。從機(jī)制上分析，腫瘤的臨床分級越高與組織學(xué)分化越低，其惡性程度越高，侵襲性越強(qiáng)，術(shù)后更加容易復(fù)發(fā)。手術(shù)范圍、術(shù)后放療、術(shù)后化療也是影響患者術(shù)后復(fù)發(fā)的基礎(chǔ)因素，此外，長期治療也會對患者的身心狀態(tài)與免疫功能造成負(fù)面影響[18]。

膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的原因復(fù)雜，與多種分子生物學(xué)因素有關(guān)。因而探尋相關(guān)基因在膠質(zhì)瘤的發(fā)生及發(fā)展機(jī)制，對評估預(yù)后膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)具有非常重要的價值。本研究顯示復(fù)發(fā)組的Beclin1、Bcl-2的表達(dá)陽性率與未復(fù)發(fā)組對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Spearman相關(guān)性分析膠質(zhì)瘤患者Beclin1、Bcl-2的表達(dá)陽性率與術(shù)后復(fù)發(fā)存在相關(guān)性(γ=-0.655，0.598，P=0.000)；多元Logistic逐步回歸分析顯示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立影響因素(P<0.05)。從機(jī)制上分析，自噬是亞細(xì)胞水平變化的1種進(jìn)化保守的細(xì)胞功能，有利于細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境與保持細(xì)胞功能穩(wěn)定[19]。Beclin1位于人染色體17q21，不僅可參與自噬體的形成，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還可促進(jìn)細(xì)胞增殖[20-21]。Bcl-2蛋白是1種重要的抗細(xì)胞凋亡分子，在維持線粒體完整性中發(fā)揮重要作用[22]。Bcl-2可在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮抑制細(xì)胞凋亡的作用，從而有利于細(xì)胞增殖與侵襲[23]。本研究也存在一定的不足，觀察時間不夠長，未觀察到總生存時間，存在一定的偏倚性，將在后續(xù)研究中深入探討。

總之，膠質(zhì)瘤患者術(shù)后容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)，且伴隨有Beclin1及Bcl-2異常表達(dá)，Beclin1、Bcl-2的表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)存在相關(guān)性，也是影響患者復(fù)發(fā)的主要因素。