炒地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

高瑩瑩，孫立麗，曹亮亮，孫陽

（1吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林；2吉林國安藥業(yè)有限公司，吉林 吉林）

0 引言

地龍為鉅蚓科動物參環(huán)毛蚓(E.Perrier)、通俗環(huán)毛 蚓（Chen）、威 廉 環(huán) 毛 蚓(Michaelsen)或 櫛 盲 環(huán) 毛蚓（Michaelsen）的干燥體[1]。生地龍性寒，味咸，有小毒。歸肝、脾、膀胱經(jīng)，具有清熱定驚、通絡(luò)、平喘、利尿之功效。用于高熱神昏，關(guān)節(jié)痹痛，半身不遂，肺熱喘咳。主要有平喘、抗凝血、抗腫瘤、降血壓等藥理作用，所含的蚯蚓解熱堿具有良好的解熱作用。地龍的平喘降壓作用，主要是含有次黃嘌呤、黃嘌呤等核苷酸成分。其中次黃嘌呤具有降壓平喘的作用,并有抗組織胺及舒張支氣管作用，從而達到止咳平喘的目的。地龍并含有能溶解血栓的蛋白酶，抗血栓的原理是激活纖溶酶原，達到抗血栓的目的[2-4]。經(jīng)炒制后，主要作用使藥物質(zhì)地酥脆，便于加工粉碎成細(xì)粉，降低滋膩之性，可降低腥味，利于服用[5]。目前，《中國藥典》2015年版一部未收錄炒地龍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，故以地龍的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為參照，制定炒地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 實驗材料

1.1 儀器

OLYMPUSBX51顯微鏡；JCX-400Z超聲清洗器；A型高效液相色譜儀；SX2-4型箱式電阻爐等。

1.2 試劑

乙 腈 為 色 譜 純（HoneyWell）；甲 醇 為 色 譜純（HoneyWell）；正丁醇，冰醋酸，三氯甲烷，甲苯，丙酮，均為分析純，水為高純水。

1.3 藥物飲片

地龍飲片分別購于河北省安國藥材市場，廣西容縣六五鎮(zhèn)溫鳳村，廣西玉林市玉州區(qū)城西街，江蘇省太倉市沙溪鎮(zhèn)中和村等10批次飲片，取10批次地龍飲片，文火炒至表面顏色變深時，取出，晾涼。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 性狀

參照《中國藥典》2015年版一部地龍藥材性狀描述，經(jīng)炮制后：炒廣地龍呈不規(guī)則的薄片狀段，邊緣略卷，具環(huán)節(jié)，背部棕褐色，腹部黃棕色至棕褐色。略帶革質(zhì)。體輕，質(zhì)脆。氣腥，微具焦香，味微咸。

炒滬地龍多皺縮不平，背部棕褐色至黃褐色。易折斷。

2.2 鑒別

2.2.1 顯微鑒別

參照《中國藥典》2015年版一部地龍藥材粉末鑒別特征。粉末灰棕色至深棕色。斜紋肌纖維無色或淡棕色，多稍彎曲，邊緣常不平整。表皮細(xì)胞呈棕黃色，細(xì)胞界限不明顯，有暗棕色的色素顆粒。剛毛碎斷散在，淡棕色至黃棕色，先端多鈍圓，有的表面可見縱裂紋。

2.2.2 薄層鑒別

取本品粉末1g，加水10ml，加熱至沸，放冷，離心，取上清液作為供試品溶液。取賴氨酸對照品、亮氨酸對照品、纈氨酸對照品，加水制成每1ml各含1mg、1mg和0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部通則0502）試驗，吸取上述四種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，與對照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。

取本品10批次炒地龍飲片，依法按上述方法實驗。

2.2.3 取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，超聲處理20min，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。取地龍對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光主斑點。

取本品10批次炒地龍飲片，依法按上述方法實驗。

上述2.2.2和2.2.3薄層鑒別通過不同廠家薄層板、不同人員及耐用性等方法學(xué)考察，薄層板分離效果好，專屬性強，重現(xiàn)性好，易操作。

2.3 檢查

2.3.1 水按照水分測定法測定

結(jié)果見表1。

10批次炒地龍飲片測定水分較低，因為炮制后炒地龍較炒前地龍飲片干燥，酥脆，短時間內(nèi)進行測定，另外，炒地龍測定時室內(nèi)空氣干燥，相對濕度較小，所以實測水分結(jié)果偏低?？紤]炒制后貯藏時間長短等因素，綜合考慮結(jié)果制定炒地龍水分限度為10.0%。

2.3.2 總灰分

按照灰分測定法測定。結(jié)果見表1。

10批次地龍飲片總灰分在4.49%-9.82%，均值7.9%。炒地龍在4.63%-9.50%，均值7.5%。參考藥材限度不得過10.0%，制定炒地龍總灰分不得過10.0%。

2.3.3 酸不溶性灰分

按照灰分測定法測定。結(jié)果見表1。

表1 炒地龍飲片水分、灰分、酸不溶性灰分測定結(jié)果（%）

10批次酸不溶性灰分在0.60%-4.60%，均值3.5%，參考藥材限度不得過5.0%，擬制定炒地龍酸不溶性灰分不得過5.0%。

2.4 浸出物

照水溶性浸出物測定項下的熱浸法測定。取供試品粉碎，使能通過二號篩，并混合均勻，取供試品約2g，精密稱定，置250ml的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，稱定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，持續(xù)微沸1h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱重。除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。10批樣品水溶性浸出物測定結(jié)果見表1。

10批炒地龍水溶性浸出物在16.74%-24.43%，均值為19.2%?？紤]市場地龍飲片的質(zhì)量差異較大實際情況，故制定炒地龍的浸出物限度不得少于12.0%。

2.5 黃曲霉毒素含量測定

黃曲霉毒素是毒性極強的劇毒物質(zhì)[6]。黃曲霉毒素的主要檢測方法最初是薄層層析法，后來逐漸發(fā)展到高效液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法[7]。

為進一步加強地龍藥材的質(zhì)量控制，中國藥典規(guī)定地龍藥材限度為每1000g含黃曲霉毒素B1不得過5μg，黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2和黃曲霉毒素B1的總量不得過10μg。

供試品溶液的制備、色譜條件及測定方法參照《中國藥典》2015年四部2351黃曲霉毒素測定法第一法[8，9]，取本品5g,進行測定。

炒地龍飲片10批黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2均未檢出。考慮到黃曲霉毒素為安全性指標(biāo)，雖然測定的炒地龍樣品未檢出黃曲霉毒素，但放置環(huán)境、儲藏等因素均可能導(dǎo)致炒地龍飲片產(chǎn)生黃曲霉毒素，故制定黃曲霉毒素限度為每1000g含黃曲霉毒素B1不得過5μg，黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2和黃曲霉毒素B1的總量不得過10μg。

3 結(jié)果與討論

本研究對10批次炒地龍飲片進行研究，根據(jù)《中國藥典》2015年版一部地龍藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定方法進行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，起草制定炒地龍飲片炮制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對全面控制炒地龍飲片的質(zhì)量，保證臨床用藥具有重要意義；同時進一步促進生產(chǎn)、流通和醫(yī)藥使用單位炒地龍飲片質(zhì)量的控制[10-12]。