小兒咳喘靈制劑中麻黃堿類成分的快速定量方法研究

王亞瓊，鐘水生，張華鋒

(蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測中心，蘇州 215104)

小兒咳喘靈制劑源自醫(yī)圣張仲景的經(jīng)典名方麻杏石甘湯，由麻黃、金銀花、板藍(lán)根、苦杏仁、甘草、石膏和瓜蔞7味藥材組成，具有宣肺、清熱、止咳、祛痰的功效。小兒咳喘靈顆粒劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第四冊及20個(gè)注冊標(biāo)準(zhǔn)。小兒咳喘靈口服液現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2020年版一部、《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第四冊及5個(gè)注冊標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量繁多、質(zhì)量控制指標(biāo)及限度差異大，其中麻黃堿的分析方法均為液相分析法。麻黃堿作為小兒咳喘靈制劑中明確藥效的主要成分，普通液相分析提取方法復(fù)雜、耗時(shí)，同時(shí)普通的C18色譜柱對鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的分離也有一定的困難[1-4]。毛細(xì)管電泳法(CE)可用水溶液直接進(jìn)樣，無需提取，直接分析麻黃堿類成分[5-10]。為了對市場上該制劑中麻黃堿類成分的含量進(jìn)行快速定量分析，擬采用CE法對樣品中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量進(jìn)行快速測定，并與水蒸氣蒸餾法聯(lián)合高效液相分析方法(WD-HPLC)的測定結(jié)果進(jìn)行比較。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫7100型電泳儀及DAD檢測器，CE毛細(xì)管柱(美國Agilent公司)；AG245 型十萬分之一電子天平(瑞士METTLER-TOLEDO公司)。Waters 2695-2998型液相色譜儀及DAD檢測器(美國Waters公司)。

1.2試藥 實(shí)驗(yàn)藥品源自2018年國家藥品評價(jià)性抽樣中的抽樣樣品：小兒咳喘靈顆粒劑[批號1707033，湖南富興飛鴿藥業(yè)有限公司；批號161202，江西民康制藥有限公司；批號171106，四川省通園制藥有限公司；批號4161214、4171010，通化萬通藥業(yè)股份有限公司；批號170888、170908，健民集團(tuán)葉開泰國藥(隨州)有限公司；批號171101，廣西藥用植物園制藥廠；批號20171106，黃石燕舞藥業(yè)有限公司；批號1712004Z，華潤三九(黃石)藥業(yè)有限公司]。小兒咳喘靈口服液(批號20170702，山東孔府制藥有限公司；批號170516，陜西步長制藥有限公司；批號20171202，杭州老桐君制藥有限公司；批號171202，重慶小葵花兒童制藥有限公司；批號171133，江西南昌制藥有限公司；批號170701，江西藥都樟樹制藥有限公司；批號20170704，庫爾勒龍之源藥業(yè)有限責(zé)任公司；批號170501，亞寶藥業(yè)四川制藥有限公司；批號180102，吉林市雙士藥業(yè)有限公司；批號1801078，浙江天一堂藥業(yè)有限公司)。濃縮型小兒咳喘靈口服液(批號1712019)，哈爾濱市康隆藥業(yè)有限責(zé)任公司。對照品：鹽酸麻黃堿(批號171241-201508，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8%)鹽酸偽麻黃堿(批號171237-201208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.9%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。純水(自制)；0.05 mol·L-1四硼酸鈉緩沖液(pH 9.3)，0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液(美國Agilent公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1電泳條件及色譜條件 毛細(xì)管柱：CE 毛細(xì)管，未涂漬熔融石英，內(nèi)徑 50 μm；有效長度56 cm；檢測波長：207 nm；盒式溫度：20 ℃。高壓系統(tǒng)：啟用高壓，電流：100 μA；功率：5.0 W。停止時(shí)間：6 min。注入：25 mbar，持續(xù)10 s。液相色譜條件：Waters 2695-2998液相色譜儀，采用Polar-phenyl (250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以乙腈-2 mL·L-1磷酸(5∶95)為流動相，檢測波長：207 nm。

2.2溶液的制備

2.2.1混合對照品溶液 分別精密稱取鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿對照品10.0 mg，加水定容至20 mL量瓶中，備用。

2.2.2供試品溶液 精密稱取小兒咳喘靈顆粒劑樣品2 g，加水溶解并定容至10 mL，經(jīng)0.22 μm水性濾膜過濾，即得供試品溶液1。精密量取小兒咳喘靈口服液樣品1.5 mL，直接經(jīng)0.22 μm水性濾膜過濾，即得供試品溶液2。

2.2.3陰性溶液 分別精密稱取缺麻黃的模擬制劑樣品顆粒2 g和口服液1.5 mL，同2.2.2項(xiàng)下方法制得陰性溶液1和陰性溶液2。

2.3方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1專屬性實(shí)驗(yàn) 分別取2.2項(xiàng)下制備的混合對照品溶液、2種供試品溶液以及2種陰性溶液，記錄色譜圖，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿色譜峰保留時(shí)間與對照色譜峰一致，各成分相互無干擾，見圖1。

圖1 電泳圖譜

2.3.2線性關(guān)系考察 采用對半稀釋法將混合對照品溶液制成系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按照2.1項(xiàng)下電泳條件分別進(jìn)樣測定，以各對照品的峰面積為縱坐標(biāo)(y)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。逐級稀釋，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，以3倍信噪比估算檢出限，結(jié)果見表1。

表1 回歸方程與線性范圍

2.3.3精密度實(shí)驗(yàn) 取2.3.2項(xiàng)下制備的系列混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算出2種成分的精密度RSD值分別為4.11%、4.45%，均小于5%，表明該儀器精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取2.2.2項(xiàng)下制備的2種供試品溶液，分別放置0、2、4、8、16、24 h后，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，計(jì)算RSD值，結(jié)果顆粒劑中2種成分的RSD值分別為1.31%、1.41%，口服液中2種成分的RSD值分別為1.28%、3.16%，均小于5.00%，表明供試品溶液在室溫放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.3.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取2.2.2項(xiàng)下制備的2種供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣6次，測得顆粒劑中2種成分的RSD值分別為0.76%、1.38%，口服液中2種成分的RSD值分別為0.66%、2.55%，均小于5.00%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.6回收率實(shí)驗(yàn) 分別取3份不同廠家的供試品溶液(小兒咳喘靈顆粒劑，批號分別為161202、171106、1712004Z；小兒咳喘靈口服液，批號分別為20170702、171202、171133)，分別精密加入與樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿等量的對照品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，濾過，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，結(jié)果3批顆粒劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的平均回收率分別為98.73%、100.49%。3批口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的平均回收率分別為96.54%、93.47%，顆粒劑的回收率略高于口服液。

2.3.7樣品含量測定 CE法除濃縮型小兒咳喘靈口服液的電泳色譜行為異常外，其他樣品均可在5.5 min內(nèi)完成鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的測定，且二者分離度好，色譜峰純度高。WD-HPLC法測定經(jīng)系統(tǒng)的條件考察和方法學(xué)研究，樣品處理?xiàng)l件確定為：精密稱取小兒咳喘靈顆粒劑1 g(或小兒咳喘靈口服液5 mL)，加100 g·L-1氫氧化鈉溶液120 mL，蒸餾，蒸餾液用盛有10 mL·L-1鹽酸5 mL的100 mL量瓶收集近95 mL后，加水定容至刻度，取續(xù)濾液，作為液相分析的供試品溶液。將二者的測定結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見表2和表3。

表2 小兒咳喘靈顆粒劑中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量比較

表3 小兒咳喘靈口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量比較

2.3.8相關(guān)性分析 采用SPSS 22.0軟件對小兒咳喘靈口服液中麻黃堿類成分的含量與口服液中蔗糖的含量進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果見表4。

表4 小兒咳喘靈口服液中鹽酸偽麻黃堿RSD值與蔗糖的含量相關(guān)性分析

3 討論

對小兒咳喘靈顆粒劑及口服液不同廠家10個(gè)批次樣品中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量進(jìn)行CE法的快速測定，并與采用WD-HPLC法測定的結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2種檢測方法的含量測定結(jié)果基本一致。通過相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，小兒咳喘靈口服液中鹽酸偽麻黃堿的RSD值與蔗糖含量呈正相關(guān)(r=0.867，P=0.001)。蔗糖的含量超過5%的小兒咳喘靈口服液在CE法測定中鹽酸偽麻黃堿的測定值偏低。杭州老桐君制藥有限公司和江西南昌制藥有限公司2個(gè)廠家的口服液中蔗糖含量較高，鹽酸偽麻黃堿的CE法測定結(jié)果偏低。哈爾濱市康隆藥業(yè)有限責(zé)任公司的濃縮型口服液在CE法分析中無法正常出峰，只能采用WD-HPLC法進(jìn)行分析。

采用CE法對小兒咳喘靈顆粒劑及口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量進(jìn)行測定，時(shí)間為5.5 min，二者分離度好，不受其他雜質(zhì)干擾，色譜峰純度高，但不適合濃縮型制劑及蔗糖含量超過5%的制劑分析，濃縮型制劑和蔗糖含量對CE法分析的影響原因還需進(jìn)一步研究?？傮w而言，采用CE法對麻黃堿類成分進(jìn)行測定，不需要經(jīng)過萃取或蒸餾等復(fù)雜的前處理方法，水溶液過濾后直接進(jìn)樣，分析時(shí)間短，適合短時(shí)間內(nèi)對大批量樣品進(jìn)行快速分析。