• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微透析探針回收率探討及提高脂溶性藥物回收率的方法

    2021-12-04 17:50:59蔡俊飛李亶燁馬云淑
    西北藥學雜志 2021年3期
    關鍵詞:環(huán)糊精溶性灌流

    蔡俊飛,范 曉,李亶燁,張 昆,馬云淑*

    (1.云南中醫(yī)藥大學中藥學院,昆明 650500;2.云南省高校外用給藥系統(tǒng)與制劑技術研究重點實驗室,昆明 650500)

    微透析技術是一種用于分析體內(nèi)細胞外液中生化物質(zhì)的采樣技術[1],具有連續(xù)取樣、動態(tài)觀察、定量分析、采樣量小和組織損傷輕等特點[2]。1972 年 Delgado J M等[3-5]發(fā)明了微透析探針,人們將其應用在腦微透析的神經(jīng)科學領域。隨著微透析技術的發(fā)展和各種檢測技術的不斷更新,微透析技術的應用范圍進一步擴大。目前,微透析技術被廣泛用于藥物在體內(nèi)、靶器官和靶組織中的藥動學研究[6]。

    1 影響微透析探針回收率的因素

    微透析技術取樣時,藥物順濃度梯度沿著探針的半透膜進入灌流液中,然后被連續(xù)灌流的灌流液帶出,最終進入收集器中。由于微透析取樣的連續(xù)性,灌流液流經(jīng)半透膜有效部位的時間很短,所以體系處于非平衡狀態(tài),藥物在半透膜兩側的交換并不完全,收集到的透析液中化合物濃度只是探針周圍樣品實際濃度的一部分,并非靶器官或組織內(nèi)該成分的真實含量,因此需要通過回收率的校正。

    微透析回收率是指從灌流液中流出的待測組分與對照品溶液的濃度之比。影響探針回收率的因素很多,主要包括半透膜長度、灌流液流速、灌流液成分、攪拌速度、藥物質(zhì)量濃度、探針使用次數(shù)、探針植入時間、灌流液的pH值、溫度和探針類型等。

    1.1半透膜長度 微透析探針膜越長,膜表面積就越大。根據(jù) Ficks 擴散定律,膜表面積越大擴散速度越快,回收率越高[7]。吳黎莉等[8]研究微透析探針膜長度對醋酸曲安奈德回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),相同條件下CMA30探針(膜長10 mm)比CMA20(膜長 4 mm)回收率高。徐宇琦等[9]研究微透析探針膜長對京尼平苷回收率的影響。結果顯示,膜長為10、15 mm時,探針的回收率分別為34.32%±1.35%、42.97%±0.93%,表明微透析探針的回收率隨探針膜長的增加而增大。

    微透析探針體內(nèi)回收率通常較低,加上檢測儀器靈敏度的限制,為了提高實驗結果的準確性,在實驗過程中通常需要選擇膜長較長的微透析探針提高探針的回收率。探針膜長的選擇需要根據(jù)取樣部位確定,較均一的組織(如皮膚、血液等)應選用膜較長的探針,這樣可以提高探針的回收率。但在腦、關節(jié)等精細部位,采用膜太長的探針不方便定位,且容易損壞探針,所以需要選用膜較短的探針。

    1.2灌流液流速 微透析取樣時,灌流液的流速通常為0.5~3 μL·min-1。通常灌流液流速越慢,探針回收率越高;流速越快,回收率越低。陳騰飛等[10]把微透析探針植入大鼠腦、頸靜脈,分別以 0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 μL·min-1的流速灌流梔子苷溶液。結果發(fā)現(xiàn),灌流速度為0.5~3.0 μL·min-1時,隨著灌流速度的增加,微透析探針對梔子苷的回收率逐漸降低。

    實驗中應根據(jù)具體情況,如透析液中藥物濃度、檢測儀器的靈敏度和檢測方法等選擇合適的灌流速度。如果透析液中藥物濃度較高,在保證藥物能被檢測到的前提下可適當增加灌流速度;如果透析液中藥物濃度較低,在保證收集到的樣品量能夠用于檢測的前提下可適當降低灌流速度。

    1.3灌流液成分 在選擇微透析灌流液時,為了減少灌流液對待測組織和待測物的影響,灌流液通常選用接近細胞外液的林格氏液或磷酸鹽緩沖液(PBS)。但灌流液中含有 K+、Ca2+和 Mg2+等,這些離子可顯著影響多種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放及其代謝物的濃度,從而影響探針的回收率[7]。詹淑玉等[11]采用等滲氯化鈉溶液、林格氏液、PBS和葡萄糖溶液作為灌流液,研究不同灌流液對葛根素回收率的影響。結果發(fā)現(xiàn),以上述4種溶液為灌流液時探針的回收率分別為71.25%±2.36%、73.48%±1.41%、68.50%±2.43%、74.98%±1.16%,說明灌流液成分會影響探針對葛根素的回收率。吳麗穎等[12]采用含體積分數(shù)為0.1%甲酸和不含甲酸的葡萄糖溶液作為灌流液測定氯己定的體外回收率。結果發(fā)現(xiàn),含體積分數(shù)為0.1%甲酸的葡萄糖溶液和不含甲酸的葡萄糖溶液作為灌流液時,回收率分別為29.9%、18.7%。說明在灌流液中添加體積分數(shù)為0.1%的甲酸能明顯提高探針的回收率。

    1.4攪拌速度 微透析體外實驗中,為了得到穩(wěn)定的探針回收率,往往把探針置于充分攪拌的介質(zhì)中,消除對流引起的濃度邊界效應從而影響藥物的傳質(zhì)阻力,使微透析探針回收率穩(wěn)定[13]。詹淑玉等[11]以林格氏液為灌流液,采用0、100、150、200、250、300 r·min-1的轉速攪拌灌流液,測定葛根素體外回收率,結果發(fā)現(xiàn),探針體外回收率隨著攪拌速度的增大而增大,當攪拌速度達到200 r·mim-1時,探針的回收率穩(wěn)定在70%左右。

    1.5藥物質(zhì)量濃度 在微透析體內(nèi)實驗中,取樣時間較長,藥物質(zhì)量濃度處于隨時變化的狀態(tài),為確保微透析所得的藥物質(zhì)量濃度能準確反映待測部位的實際藥物質(zhì)量濃度,需要測定不同藥物質(zhì)量濃度下探針的回收率,考察藥物質(zhì)量濃度是否會影響探針的回收率。許小建等[14]研究不同質(zhì)量濃度的左氧氟沙星對微透析探針回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),不同質(zhì)量濃度(1、8、40 μg·mL-1)的左氧氟沙星在微透析探針中的回收率分別為58.81%±2.20%、58.74%±1.59%、60.10%±3.51%,說明藥物質(zhì)量濃度對微透析探針回收率幾乎無影響。徐宇琦等[9]采用林格氏液為灌流液,研究不同質(zhì)量濃度的京尼平苷(2.5、5.0、10.0 μg·mL-1)對微透析探針回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),探針回收率與京尼平苷質(zhì)量濃度無關。

    1.6探針使用次數(shù) 微透析探針較貴,為減少實驗成本,新探針使用后通常不會丟棄,而是清洗后保存在純水中下次繼續(xù)使用。因此需要測定探針使用后的回收率,考察探針使用后回收率是否會發(fā)生改變。陳騰飛等[15]以人參皂苷Rg1為檢測藥物,采用正透析法分別測定新探針、使用過1次和使用過2次的腦、血微透析探針回收率,結果顯示,使用過1次和使用過2次并經(jīng)過處理的探針與新探針相比,回收率無明顯變化。說明在探針使用后,用20 g·L-1的肝素鈉溶液、超純水灌流沖洗處理,能夠維持探針半透膜的通透性。陳騰飛等[16]采用增量法對新探針、使用過1次和使用過2次并經(jīng)過恢復處理的探針進行體外回收率實驗,結果顯示,使用過1次和2次并經(jīng)過恢復處理后的腦、血探針對黃芩苷的回收率與新探針相比,無明顯變化。

    1.7探針植入時間 微透析實驗中,取樣時間通常較長,因此,需要考察探針植入動物體內(nèi)一段時間后回收率的穩(wěn)定性。郭麗蓉等[17]把微透析探針植入大鼠皮下,連續(xù)取樣10 h,測定烏頭堿在探針中的回收率,結果發(fā)現(xiàn),烏頭堿在大鼠體內(nèi)的回收率10 h內(nèi)基本保持穩(wěn)定,說明探針植入時間不影響探針的回收率。劉楊等[18]把微透析探針植入大鼠海馬與腦,連續(xù)取樣9 h,采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法測定人參皂苷Rg1在探針中的回收率,結果表明,人參皂苷Rg1在大鼠體內(nèi)的回收率9 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

    1.8灌流液的pH值 微透析灌流液的pH值對探針回收率的影響主要表現(xiàn)在2個方面:首先是導致探針膜結構的改變,從而影響藥物順濃度梯度的跨膜運動;其次是影響藥物在灌流液中的溶解度和穩(wěn)定性。唐紅艷等[19]以不同pH值的PBS為灌流液,采用增量法測定雪上一枝蒿甲素在微透析探針中的回收率,結果發(fā)現(xiàn),以pH值為 6.5、7.4、8.5的PBS為灌流液時,雪上一枝蒿甲素的回收率分別為34.4%±8.31%、71.8%±1.71%、67.1%±1.24%,表明灌流液的pH值對雪上一枝蒿甲素在微透析探針中的回收率影響較大。

    1.9溫度 溫度升高,分子熱運動加快,藥物擴散速度加快,微透析探針回收率增大。孟英姣等[20]采用林格氏液和人工腦脊液為灌流液,研究不同溫度(25、30、37、42 ℃)對芒柄花素、芍藥苷在血、腦微透析探針中的回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),芒柄花素和芍藥苷在微透析探針中的回收率會隨著溫度的升高而增大。廖衛(wèi)國等[21]研究不同溫度(25、30、37、42 ℃)對阿魏酸、川芎嗪在微透析探針中的回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),在相同條件下,隨著溫度升高,阿魏酸和川芎嗪在腦微透析探針中的回收率增大。鄧顯儀等[22]研究不同溫度(25、37、45 ℃)對雪上一枝蒿甲素在微透析探針中的回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),溫度對探針的回收率有較大的影響,溫度升高探針回收率增大。因此,微透析體內(nèi)實驗時,需要保持動物體溫穩(wěn)定,從而提高探針回收率的穩(wěn)定性,保證實驗結果準確可靠。

    1.10探針類型 微透析探針形式多樣,按其幾何構造可分為同心圓形探針、線性探針、柔性探針和分流探針。不同類型的探針適用于不同部位取樣,回收率也會不同。張巖等[23]采用林格氏液為灌流液,研究氧化苦參堿在同心圓形探針和線性探針中的回收率,結果發(fā)現(xiàn),相同條件下同心圓形探針的回收率明顯高于線性探針的回收率。

    2 提高脂溶性藥物回收率的方法

    微透析實驗中,通常采用降低灌流液流速、選擇合適的探針和灌流液等方法提高探針的回收率。但由于脂溶性藥物在水溶性灌流液中溶解度低的特性,加上實驗條件和檢測手段的限制,實驗過程中,通常采用改變灌流液的成分和pH值等來提高脂溶性藥物在探針中的回收率。

    目前,微透析實驗常用的灌流液有林格氏液、人工腦脊液、PBS和檸檬酸-葡萄糖溶液[24]等。這些灌流液大多屬于水溶性溶液,探針對水溶性藥物回收率較高。但使用水溶性灌流液很難較好地溶解脂溶性藥物,會導致探針回收率低、檢測困難和實驗誤差大[25]。此外,微透析探針對脂溶性成分具有一定的吸附性,也會導致探針回收率降低[26]。

    2.1改變灌流液的成分 研究發(fā)現(xiàn),向常用灌流液中加入灌流液改性劑,如環(huán)糊精、乙醇、脂肪乳、牛血清白蛋白、抗體或其他親和物質(zhì)能一定程度上消除脂溶性藥物與微透析探針膜的結合或增加藥物在灌流液中的溶解度,從而提高脂溶性藥物在探針中的回收率。

    2.1.1加入助溶劑 灌流液中加入環(huán)糊精(α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精和γ-環(huán)糊精)等助溶劑可以與脂溶性藥物形成水溶性復合物,消除脂溶性藥物與探針膜的結合,從而增加脂溶性藥物在探針中的回收率[27]。Khramov A N等[28]研究發(fā)現(xiàn),向微透析灌流液中添加助溶劑環(huán)糊精(β環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精等)后,環(huán)糊精可以與藥物形成絡合物,加快藥物透過探針透析膜的速度,從而提高脂溶性藥物(丙咪嗪、地昔帕明、阿米替林、卡馬西平和異丙嗪)在微透析探針中的回收率。Fletcher H J等[29]研究腦啡肽在微透析探針中的回收率,結果發(fā)現(xiàn),在灌流液中添加助溶劑環(huán)糊精可將腦啡肽的回收率提高2倍。

    2.1.2加入潛溶劑 脂溶性藥物在水溶性灌流液中的溶解度較低,導致藥物在微透析探針中的回收率偏低,加入乙醇等潛溶劑可增加脂溶性藥物在灌流液中的溶解度,從而提高藥物在探針中的回收率。因此,可通過向常用灌流液中添加適當比例的乙醇從而增大藥物在微透析探針中的回收率。管詠梅等[30]以乙醇體積分數(shù)為30%的生理鹽水溶液、林格氏液和PBS為灌流液,采用LC-MS/MS法研究雷公藤甲素在微透析探針中的回收率。結果顯示,以上述3種溶液為灌流液時,雷公藤甲素在微透析探針中的回收率分別為43.79%±5.53%、38.39%±2.46%、32.50%±1.76%,說明以乙醇體積分數(shù)為30%的生理鹽水溶液為灌流液時雷公藤甲素在微透析探針中的回收率最高。劉新國等[31]考察灌流液改性劑對環(huán)維黃楊星 D在微透析探針中的回收率的影響,結果發(fā)現(xiàn),以乙醇體積分數(shù)為30%的生理鹽水溶液為灌流液時環(huán)維黃楊星 D的回收率最高,且回收率較穩(wěn)定。

    2.1.3加入增溶劑 水包油微乳液作為一種增溶劑,被廣泛用于提高脂溶性藥物的溶解度[32],從而提高脂溶性藥物在微透析探針中的回收率。水包油型微乳液為液態(tài),液滴外的脂溶性分子可以通過油水界面擴散進入液滴內(nèi)的油相核心,從而提高疏水性藥物的溶解度[33]。由于水包油型微乳具有提高脂溶性藥物溶解度的特點,適合用作微透析灌流液,并能增大脂溶性藥物的回收率。Zhang Yong Tai等[34]采用聚氧乙烯蓖麻油和二乙二醇單乙基醚作為表面活性劑和助表面活性劑,以油酸乙酯為油相制備成微乳,將微乳與林格氏液按1∶6的比例混合,獲得等滲溶液。實驗結果表明,以這種溶液為灌流液時脂溶性化合物吳茱萸堿和吳茱萸次堿的回收率分別為58.36%±0.57%、49.40%±0.57%,高于以聚乙二醇(PEG)400體積分數(shù)為20%的林格氏液和乙醇體積分數(shù)為10%的林格氏液為灌流液時的回收率。Gao Qizhen等[35]研究發(fā)現(xiàn),糠酸莫米松在含PEG400體積分數(shù)為40%、含脂肪乳體積分數(shù)為5%、20%林格氏液中的溶解度明顯高于在林格氏液中的溶解度。同時,與含脂肪乳體積分數(shù)為40%、20%林格氏液相比,含脂肪乳體積分數(shù)為5%的林格氏液中糠酸莫米松的回收率和傳遞率均明顯提高,且回收率與傳遞率相等。

    2.1.4加入滲透劑 高相對分子質(zhì)量截留膜的微透析探針可用于相對分子質(zhì)量大的化合物(如生物活性肽和蛋白質(zhì))取樣。但較高相對分子質(zhì)量截留膜中液體容易流失,從而影響分析物的回收率。研究發(fā)現(xiàn),滲透劑如牛血清白蛋白可以降低微透析探針膜的失水能力,顯著提高分析物在探針中的回收率。吳黎莉等[8]以PBS、脂肪乳、含 50 g·L-1羥丙基-β-環(huán)糊精及含不同質(zhì)量濃度牛血清白蛋白(5、10、20 g·L-1)的PBS為灌流液,研究醋酸曲安奈德在微透析探針中的回收率,結果發(fā)現(xiàn),以PBS中添加 10、20 g·L-1牛血清白蛋白的溶液為灌流液時,醋酸曲安奈德在探針中的回收率得到較大提高,且回收率和傳遞率相等。

    2.1.5加入親和物質(zhì) 在微透析取樣過程中,由于蛋白質(zhì)和肽具有疏水性,導致相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)和肽等物質(zhì)在微透析探針中的回收率較低。在灌流液中加入抗體、肝素等親和物質(zhì)能提高其在探針中的回收率。Ao Xiaoping等[36]研究發(fā)現(xiàn),在微透析灌流液中加入抗體包被的微球增加了透析膜中分析物的擴散驅動力,從而使腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)、白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-4(IL-4)和白細胞介素-5(IL-5)在微透析探針中的回收率提高4~12 倍。Herbaugh Anthony W等[37]研究發(fā)現(xiàn),灌流液中添加單克隆抗體后,灌流液流速為2.0、1.0 μL·min-1時,趨化因子配體2在探針中的回收率從9.6%±3.4%、12.2%±4.1%提高到37.5%±10.2%、64.8%±11.7%,說明在灌注液中添加游離抗體會增加趨化因子配體2的回收率。Duo Jia等[38]研究發(fā)現(xiàn),向微透析灌流液中加入肝素包被的微球作為親和劑后,酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、單核細胞趨化蛋白-1(CCL2)和正常T細胞表達和分泌因子(CCL5)在微透析探針中的回收率提高2~5倍。

    目前,常用的灌流液改性劑,如環(huán)糊精、乙醇、脂肪乳、牛血清白蛋白、抗體或其他親和物質(zhì)均能在一定程度上消除脂溶性藥物與微透析探針膜的結合或增加藥物在灌流液中的溶解度,從而提高脂溶性藥物在探針中的回收率。但對于某些藥物而言,并非所有的灌流液改性劑都能提高其在探針中的回收率。因此,在微透析實驗中,應根據(jù)實驗藥物選擇能使其回收率提高的灌流液改性劑。

    2.2改變灌流液的pH值 微透析灌流液的pH值可影響藥物在灌流液中的溶解度及穩(wěn)定性,從而影響藥物在探針中的回收率。因此,可以采用改變灌流液pH值的方法來提高脂溶性藥物在微透析探針中的回收率。Tre Emmanuelle S等[39]研究優(yōu)化灌流液的 pH 值提高脂溶性藥物在探針中的回收率。結果發(fā)現(xiàn),酮康唑、克霉唑和維甲酸為脂溶性藥物,在生理pH(7.4)條件下溶解度較低,導致它們在探針中的回收率較低。采用pH值為4的灌流液時,酮康唑和克霉唑的回收率分別提高6.9、8.3倍,采用pH值為9的灌流液時,維甲酸的回收率提高2倍。說明對于脂溶性藥物,微透析探針回收率較低,可以采用改變灌流液pH值的方法提高探針的回收率。

    3 總結與展望

    與傳統(tǒng)的取樣技術相比,微透析技術作為一種新型活體取樣技術具有以下優(yōu)點:(1)可以在不干擾機體正常生命活動的情況下進行在體、實時、在線取樣;(2)既可對同一組織進行長時間連續(xù)取樣,又可對同一動物進行多個部位取樣,減少實驗動物數(shù)量,同時也避免實驗動物的個體差異造成的實驗誤差;(3)采樣量小、組織損傷輕,所得數(shù)據(jù)準確可靠;(4)微透析樣品干凈,不需要前處理,可以直接進行樣品分析;(5)可以直接測定生物體內(nèi)游離態(tài)藥物質(zhì)量濃度;(6)可與多種分析儀器聯(lián)用[40-42],實現(xiàn)在線分析,易于自動化。因此,微透析技術在藥學研究中顯示出巨大的優(yōu)勢。隨著微透析技術和現(xiàn)代檢測技術的發(fā)展,微透析技術越來越多地被應用于腦部[43]、眼部[44]、血液[45]、肌肉[46]、皮膚[47]、肝臟[48]、腫瘤[49]、關節(jié)[50]、膽[51]及肺[52]等部位的藥動學、藥效學、藥動學-藥效學結合模型中。

    微透析技術在藥學研究中也存在一定的局限性:(1)藥動學實驗通常需要通過探針的體內(nèi)回收率計算藥物在體內(nèi)的實際質(zhì)量濃度。但由于藥物在動物體內(nèi)的質(zhì)量濃度未知,只能測定探針傳遞率,然后用傳遞率推測探針回收率。對于一種化合物而言,傳遞率和回收率并不總是相等的。因此,如何解決探針傳遞率和回收率不相等的問題成為微透析技術在藥動學研究中的重點。(2)微透析實驗常用灌流液(如生理鹽水、林格氏液、PBS、人工腦脊液等)大多屬于水溶性溶液,對脂溶性強的藥物回收率較低。所以,在進行脂溶性藥物微透析實驗時,如何選擇合適的灌流液,提高探針回收率,確保實驗數(shù)據(jù)準確可靠,成為人們需要研究的問題。(3)由于微透析技術取樣的連續(xù)性,探針回收率較低,對檢測儀器要求較高。常用的檢測儀器(如高效液相色譜儀等)靈敏度較低,可能導致實驗數(shù)據(jù)不準確甚至檢測不到透析液中的藥物,需要靈敏度更高的儀器(如 LC-MS/MS等)才能用于透析液樣品的檢測。但這些靈敏度高的儀器通常價格較貴,而且使用和維護成本較高。因此,如何提高探針回收率,減少實驗成本,成為未來微透析技術研究的重點。相信隨著科學技術的不斷發(fā)展,這些問題將會被解決。

    猜你喜歡
    環(huán)糊精溶性灌流
    血液灌流聯(lián)合血液透析治療銀屑病療效觀察
    脂溶性維生素:營養(yǎng)需求之外的功能
    鴉膽子油β-環(huán)糊精包合物的制備
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:08
    黔產(chǎn)丹參脂溶性成分的研究
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:22
    β-環(huán)糊精對決明子的輔助提取作用
    中成藥(2018年4期)2018-04-26 07:12:43
    加熱法在無肝素血液灌流護理中的應用
    血液灌流治療戊巴比妥鈉中毒1例
    西藏科技(2015年9期)2015-09-26 12:15:31
    粗鹽中難溶性雜質(zhì)的去除
    血液透析聯(lián)合血液灌流對尿毒癥自主神經(jīng)病變的影響
    β-環(huán)糊精對安賽蜜口感修飾的研究
    食品科學(2013年13期)2013-03-11 18:24:19
    可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产一区二区三区视频了| 黄色 视频免费看| 国产爱豆传媒在线观看 | 成人欧美大片| 国内精品久久久久精免费| 欧美大码av| 久久热在线av| 在线播放国产精品三级| 伦理电影免费视频| 在线播放国产精品三级| 精品久久久久久久久久久久久 | 成人永久免费在线观看视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩精品免费视频一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 最近在线观看免费完整版| 国产av一区在线观看免费| 亚洲最大成人中文| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产成人精品久久二区二区91| 人人妻人人澡人人看| 我的亚洲天堂| 亚洲成人久久性| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产主播在线观看一区二区| 久久精品国产清高在天天线| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品 欧美亚洲| 成人永久免费在线观看视频| 国产真人三级小视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 很黄的视频免费| 真人做人爱边吃奶动态| 韩国精品一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 后天国语完整版免费观看| 九色国产91popny在线| 又紧又爽又黄一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲专区中文字幕在线| 99国产综合亚洲精品| x7x7x7水蜜桃| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产三级在线视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文字幕人妻熟女乱码| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲三区欧美一区| 亚洲男人天堂网一区| a在线观看视频网站| 日本在线视频免费播放| av免费在线观看网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利在线在线| 成在线人永久免费视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲中文日韩欧美视频| 丁香欧美五月| 免费高清在线观看日韩| 精品午夜福利视频在线观看一区| av免费在线观看网站| 国产免费av片在线观看野外av| 一级片免费观看大全| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美成人午夜精品| 国产三级黄色录像| 国产视频内射| 亚洲色图av天堂| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 啪啪无遮挡十八禁网站| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 中文亚洲av片在线观看爽| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 丁香六月欧美| av中文乱码字幕在线| 黑丝袜美女国产一区| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | av片东京热男人的天堂| 色老头精品视频在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 满18在线观看网站| 天堂影院成人在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产单亲对白刺激| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲,欧美精品.| 一夜夜www| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 色老头精品视频在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 黄片大片在线免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 97碰自拍视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 精品国产美女av久久久久小说| 一区二区三区精品91| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 一本精品99久久精品77| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 在线天堂中文资源库| 久久中文字幕人妻熟女| 成人手机av| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产1区2区3区精品| 亚洲三区欧美一区| 国产不卡一卡二| 视频区欧美日本亚洲| 丝袜人妻中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲 欧美一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产精品999在线| 美女高潮到喷水免费观看| 老鸭窝网址在线观看| 中出人妻视频一区二区| 黑人操中国人逼视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩欧美一区视频在线观看| 大香蕉久久成人网| 香蕉久久夜色| 国产不卡一卡二| 一区二区三区精品91| 看片在线看免费视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产成人精品无人区| www.熟女人妻精品国产| 91字幕亚洲| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 级片在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 午夜福利在线观看吧| 国产99久久九九免费精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 十八禁人妻一区二区| 一区二区三区国产精品乱码| 丰满的人妻完整版| aaaaa片日本免费| 色老头精品视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 十分钟在线观看高清视频www| 日本熟妇午夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 两人在一起打扑克的视频| 女性被躁到高潮视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲一区高清亚洲精品| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲人成77777在线视频| 中出人妻视频一区二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美中文日本在线观看视频| 黄色成人免费大全| 黑丝袜美女国产一区| 成人18禁在线播放| 韩国精品一区二区三区| 桃红色精品国产亚洲av| 在线国产一区二区在线| 日韩欧美三级三区| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久久大精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美又色又爽又黄视频| 久久九九热精品免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 三级毛片av免费| 亚洲色图av天堂| 长腿黑丝高跟| 色av中文字幕| 日韩欧美国产一区二区入口| 男人的好看免费观看在线视频 | www日本在线高清视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 1024视频免费在线观看| 香蕉久久夜色| 黄色视频不卡| 国产成人啪精品午夜网站| 在线观看www视频免费| 嫩草影院精品99| 色尼玛亚洲综合影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品欧美一区二区三区在线| 黄色 视频免费看| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线视频色国产色| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲精品色激情综合| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久久久精品国产欧美久久久| netflix在线观看网站| 亚洲av五月六月丁香网| 两个人免费观看高清视频| 国产精品 国内视频| 久久热在线av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲熟妇熟女久久| 精品一区二区三区四区五区乱码| 麻豆一二三区av精品| 免费在线观看影片大全网站| 啦啦啦 在线观看视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲av片天天在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 在线观看66精品国产| 亚洲激情在线av| 99在线视频只有这里精品首页| 国产99久久九九免费精品| 日韩精品青青久久久久久| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲午夜理论影院| 美女大奶头视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久热在线av| 熟女电影av网| 草草在线视频免费看| 免费观看人在逋| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美一级a爱片免费观看看 | 午夜两性在线视频| 久久99热这里只有精品18| a级毛片在线看网站| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产日本99.免费观看| 黑人操中国人逼视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲精品美女久久av网站| 国产97色在线日韩免费| 757午夜福利合集在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 国产成人欧美在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 国产黄a三级三级三级人| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品在线美女| АⅤ资源中文在线天堂| bbb黄色大片| 国内精品久久久久精免费| 少妇 在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产av不卡久久| 99久久国产精品久久久| 免费在线观看日本一区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久久国内视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品人妻少妇| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品久久久久久久久久久久久 | 超碰成人久久| 正在播放国产对白刺激| 看免费av毛片| 国产视频一区二区在线看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产av又大| 日本熟妇午夜| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 一级毛片女人18水好多| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产午夜精品久久久久久| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 黄片大片在线免费观看| 91在线观看av| 精华霜和精华液先用哪个| 两个人视频免费观看高清| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲最大成人中文| 香蕉av资源在线| 一区二区三区精品91| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 操出白浆在线播放| 一本综合久久免费| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 俺也久久电影网| 99国产精品99久久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 免费观看精品视频网站| 国产爱豆传媒在线观看 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 精品一区二区三区av网在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 一个人免费在线观看的高清视频| www国产在线视频色| 欧美日韩黄片免| 99国产精品一区二区蜜桃av| 午夜免费鲁丝| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久精品91无色码中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 免费av毛片视频| 免费在线观看亚洲国产| 不卡一级毛片| 亚洲av电影在线进入| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲成人久久性| 日本免费a在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 又紧又爽又黄一区二区| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品第一国产精品| 91字幕亚洲| 大型av网站在线播放| 国产精华一区二区三区| 91在线观看av| 村上凉子中文字幕在线| 高清毛片免费观看视频网站| 国产1区2区3区精品| 搡老岳熟女国产| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 老司机在亚洲福利影院| 麻豆av在线久日| 麻豆成人av在线观看| 亚洲五月天丁香| av免费在线观看网站| 亚洲五月天丁香| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 色精品久久人妻99蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 中文资源天堂在线| 日本免费a在线| 日韩国内少妇激情av| 极品教师在线免费播放| 日本一本二区三区精品| 婷婷丁香在线五月| 日日夜夜操网爽| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲黑人精品在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人一区二区视频在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 99热6这里只有精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 哪里可以看免费的av片| 老司机靠b影院| 91国产中文字幕| 亚洲午夜理论影院| 国产精品,欧美在线| 成年免费大片在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 制服丝袜大香蕉在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲第一电影网av| 不卡av一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 亚洲第一av免费看| 免费看十八禁软件| 国内精品久久久久精免费| 欧美日本亚洲视频在线播放| 男人的好看免费观看在线视频 | 麻豆一二三区av精品| 亚洲国产看品久久| 99热6这里只有精品| 日本黄色视频三级网站网址| 日韩三级视频一区二区三区| 在线看三级毛片| 亚洲电影在线观看av| 欧美zozozo另类| 亚洲午夜理论影院| 宅男免费午夜| 欧美中文日本在线观看视频| 国产99白浆流出| 69av精品久久久久久| 9191精品国产免费久久| 亚洲中文av在线| 观看免费一级毛片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精华国产精华精| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产主播在线观看一区二区| 99在线视频只有这里精品首页| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 18禁观看日本| 级片在线观看| 久热这里只有精品99| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产真实乱freesex| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 一夜夜www| 国产亚洲精品一区二区www| 国产欧美日韩精品亚洲av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久久午夜电影| 淫妇啪啪啪对白视频| 1024香蕉在线观看| 日本三级黄在线观看| 成人三级黄色视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 丝袜在线中文字幕| 免费搜索国产男女视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲一区二区三区色噜噜| 少妇被粗大的猛进出69影院| 99久久国产精品久久久| 身体一侧抽搐| 成人手机av| 亚洲中文字幕日韩| 满18在线观看网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲男人天堂网一区| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲三区欧美一区| 1024视频免费在线观看| 欧美性长视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 男人舔女人的私密视频| 在线观看免费午夜福利视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产成人欧美| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品久久久av美女十八| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 一二三四在线观看免费中文在| 91av网站免费观看| 国产亚洲精品av在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 在线播放国产精品三级| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲成人久久性| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩欧美 国产精品| 1024手机看黄色片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 又大又爽又粗| 精品福利观看| 国产黄色小视频在线观看| 一本久久中文字幕| 亚洲专区字幕在线| 久久中文字幕人妻熟女| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 午夜福利18| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 高清毛片免费观看视频网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲五月天丁香| 在线观看免费视频日本深夜| 男女视频在线观看网站免费 | 成人国产综合亚洲| a级毛片在线看网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 青草久久国产| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩免费av在线播放| xxxwww97欧美| 男女下面进入的视频免费午夜 | 婷婷精品国产亚洲av| or卡值多少钱| 欧美最黄视频在线播放免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 可以在线观看的亚洲视频| 精品国产亚洲在线| 香蕉国产在线看| 熟女电影av网| 91国产中文字幕| 亚洲精品在线美女| 久久久久九九精品影院| 欧美成人午夜精品| tocl精华| 妹子高潮喷水视频| 禁无遮挡网站| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 日本一本二区三区精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲男人天堂网一区| 一级毛片女人18水好多| 在线天堂中文资源库| 人人妻人人看人人澡| 国产一区二区在线av高清观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 伦理电影免费视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 久久中文看片网| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线天堂中文资源库| 一区二区三区国产精品乱码| 嫩草影院精品99| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 白带黄色成豆腐渣| 俺也久久电影网| 免费在线观看影片大全网站| aaaaa片日本免费| 欧美在线黄色| √禁漫天堂资源中文www| 免费电影在线观看免费观看| 免费观看精品视频网站| 黄色视频不卡| 麻豆一二三区av精品| 国产午夜精品久久久久久| 午夜日韩欧美国产| 国产精品精品国产色婷婷| 国产伦在线观看视频一区| 母亲3免费完整高清在线观看| 日本成人三级电影网站| 后天国语完整版免费观看| 久久久久久九九精品二区国产 | 天堂影院成人在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久久久久中文| 成人免费观看视频高清| 99国产精品99久久久久| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲专区字幕在线| 十八禁人妻一区二区| 12—13女人毛片做爰片一| 一进一出抽搐动态| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美日韩福利视频一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久亚洲精品不卡| 中出人妻视频一区二区| 美女午夜性视频免费| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| www.精华液| 韩国精品一区二区三区| 在线看三级毛片| 午夜影院日韩av| x7x7x7水蜜桃| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美黑人精品巨大| 黄片播放在线免费| 视频区欧美日本亚洲| 欧美精品啪啪一区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 18禁黄网站禁片免费观看直播|