番茄枯萎病防治藥劑的篩選

李丙雪 SIHOMCHANH Bounpheng 禤子琪 何瓊 吳海燕

摘? ? 要：以咪鮮胺、咯菌腈、戊唑醇、異菌脲和腐霉利等為試驗藥劑，開展番茄枯萎病菌的抑菌試驗，并對抑制效果好的藥劑進行復配試驗，篩選出對番茄枯萎病菌抑制效果好的濃度及復配比例。結(jié)果表明，咪鮮胺和咯菌腈對番茄枯萎病菌菌絲生長的抑制作用顯著。0.1 μg·mL-1咪鮮胺對枯萎病菌的抑菌率為73.8%，EC50為 0.02 μg·mL-1;0.1 μg·mL-1咯菌腈對枯萎病菌的抑菌率為48.7%，EC50為0.17 μg·mL-1。0.1 μg·mL-1咪鮮胺和0.1 μg·mL-1咯菌腈以體積比為2∶8進行復配時，抑制效果最佳，抑菌率為91.1%。研究結(jié)果對化學藥劑的科學合理使用提供理論依據(jù)，為防治番茄枯萎病提供重要信息。

關鍵詞：番茄枯萎病;咯菌腈;咪鮮胺;藥劑復配;抑菌率

中圖分類號：S641.2+S436.412.1 文獻標志碼：A 文章編號：1673-2871（2021）02-061-004

Screening of fungicides on Fusarium wilt of tomato

LI Bingxue1， SIHOMCHANH Bounpheng1，2， XUAN Ziqi1， HE Qiong1， WU Haiyan1

（1. Guangxi Key Laboratory of Agric-Environment and Agric-Products Safety， Agricultural College of Guangxi University， Nanning

530004， Guangxi， China; 2. Nation Agriculture and Forestry Research Institute， Horticulture Research Center， Vientiane 7071， Lao PDR）

Abstract： The fungistatic effects of prochloraz， fludioxonil， tebuconazole， iprodione and procymidone on tomato Fusarium wilt were evaluated in this study. The concentration and proportion of compounds with mycelium growth-inhibition effect on Fusarium oxysporum were screened. The results showed that prochloraz and fludioxonil had significant inhibitory effect on the growth of mycelium . The inhibition rate of 0.1 μg·mL-1 prochloraz and fludioxonil on Fusarium oxysporum were 73.8% and 48.7%， respectively. EC50 was 0.02 μg·mL-1 and 0.17 μg·mL-1 respectively. When the concentration of 0.1 μg·mL-1 of prochloraz was mixed with fludioxonil， the inhibition rate was 91.1%. When the volume ratio was 2：8， it showed the significantly inhibitory effect. The results provide a theoretical data for the scientific and rational use of chemical fungicide， and provide important information for controlling tomato fusarium wilt as well.

Key words： Tomato Fusarium wilt; Fludioxonil; Prochloraz; Fungicide mixture; Inhibition rate

近年來，露地番茄和保護地番茄種植面積迅速擴大，番茄的集約化種植使病害發(fā)生愈加頻繁[1]。在番茄侵染性病害中，主要有真菌性病害、細菌性病害、病毒性病害和根結(jié)線蟲病。其中真菌性病害約占番茄病害的80%，且病害類型多，引起的病害癥狀復雜。番茄真菌性病害包含番茄枯萎病、番茄晚疫病、番茄早疫病、番茄灰霉病等，其中番茄枯萎病的發(fā)生日趨嚴重[2]。番茄枯萎病是由枯萎病菌引起的一種維管束疾病，是一種嚴重危害番茄品質(zhì)和產(chǎn)量的土傳性病害，從番茄幼苗期到成株期均可受到枯萎病的侵染[3]。番茄枯萎病病原菌是尖孢鐮刀菌番茄專化型（Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici race），屬半知菌類菌物。番茄多在開花結(jié)果期發(fā)病，往往在盛果期枯死。發(fā)病初期，植株中、下部葉片在中午前后萎蔫，早、晚尚可恢復，以后萎蔫癥狀逐漸加重，葉片自下而上逐漸變黃，不脫落，直至枯死。有時僅在植株一側(cè)發(fā)病，另一側(cè)莖葉生長正常。莖基部接近地面處呈水浸狀，高濕時產(chǎn)生粉紅色、白色或藍綠色霉狀物，拔出病株，切開病莖基部，可見維管束變?yōu)楹稚?。在連茬多年田塊中，枯萎病發(fā)病率為20%～40%，并逐年加重，采收前期和中期的減產(chǎn)率分別為發(fā)病率的70%～100%和30%～50%[4-5]。

目前，對于番茄枯萎病病害的控制研究多集中在生物防治與化學防治方面。已有研究表明，在番茄移植30 d內(nèi)4次施用草酸青霉，可以改善青霉對番茄枯萎病的防治效果并延長其對番茄枯萎病的防治時間[6];非致病鐮刀菌Fusarium oxysporum FO47液體培養(yǎng)濾液能有效抑制番茄枯萎病菌孢子萌發(fā)，抑制萌發(fā)率為81.7%[7];非致病性尖鐮刀菌FJAT-9290菌株能促進番茄植株生長，顯著提高其株高和葉片數(shù)量，對番茄枯萎病盆栽及田間防治效果分別達76.70%和69.56%[8];800倍液梧寧霉素和1 000倍液寧南霉素噴灌根部，防治效果分別為71.4%和68.8%[9];海洋源細菌-赤桿菌YH-07的室內(nèi)平板試驗中，表現(xiàn)出對番茄枯萎病具有較強的抑制作用[10];植物源胡椒粗氯仿提取物可有效地抑制土壤中鐮刀菌數(shù)量，用于番茄枯萎病的防治[11];已開發(fā)出以解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）B6為主要成分的植物根際益生菌生防菌劑防治番茄枯萎病[12]。近年來，應用較廣的化學藥劑有5%抗枯寧水劑500倍液，70%敵克松可濕性粉劑800倍液與40%多菌靈可濕性粉劑800倍液等，在棚室番茄栽培中，一般用70%百菌清可濕性粉劑或50%多菌靈可濕性粉劑，對水噴施到土壤中[13]。

為篩選出對番茄枯萎病菌抑制效果好的藥劑，采用咯菌腈、咪鮮胺、異菌脲、戊唑醇和腐霉利等5種殺菌劑進行番茄枯萎病菌菌絲生長抑制效果試驗，并針對病原菌抑制效果好的殺菌劑咪鮮胺和咯菌腈進行不同比例復配試驗，以期為番茄生產(chǎn)上枯萎病的防治提供一些新的途徑。

1 材料與方法

1.1 番茄枯萎病菌來源

2019年2月于廣西百色市田陽縣番茄種植基地進行病害調(diào)查時采集病株，帶回實驗室，并從病組織中分離純化，獲得番茄枯萎病菌。試驗在2019年2—5月在廣西大學農(nóng)學院實驗室進行。

1.2 供試藥劑

咯菌腈（99.2%，山東濰坊潤豐化工有限公司），咪鮮胺（96.8%，山東濰坊潤豐化工有限公司），異菌脲（96.7%，山東濰坊潤豐化工有限公司），戊唑醇（97%，山東濰坊潤豐化工有限公司），腐霉利（98%，山東濰坊潤豐化工有限公司），丙酮（99.5%，成都市科龍化工試劑廠）。

1.3 方法

1.3.1 病原菌分離 采用常規(guī)組織分離法對樣本進行病原菌的分離、培養(yǎng)和純化。切取樣本病健交界處5 mm×5 mm組織，70%（φ）乙醇消毒5 s，再用0.1%氯化汞消毒30 s，無菌水漂洗3次，置于PDA平板（培養(yǎng)皿直徑9 cm），于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，挑取菌落邊緣菌絲進行分離純化，經(jīng)形態(tài)鑒定和分子鑒定為Fusarium oxysporum （基因登錄號為 MN240928），保存于4 ℃冰箱待用。

1.3.2 藥劑抑制病原菌菌絲生長的測定方法 用菌絲生長速率法進行測定。以99.5%的丙酮為溶劑分別配制5種藥劑母液500 μg·mL-1。用無菌水分別稀釋至100 μg·mL-1和50 μg·mL-1，分別取10 mL加入90 mL的PDA中，搖勻，5種藥劑的最終質(zhì)量濃度分別為10 μg·mL-1和5 μg·mL-1。用直徑為6 mm的打孔器在培養(yǎng)7 d的番茄枯萎病病原菌邊緣打孔，將菌餅分別接到含系列濃度藥劑的培養(yǎng)基上（培養(yǎng)皿直徑9 cm），以0.01%丙酮和無菌水作對照，每個濃度設置3次重復，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱（型號GXZ280C-4，寧波江南儀器廠）中培養(yǎng)，7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。計算殺菌劑對番茄枯萎病病原菌菌絲的生長抑制率。同樣的方法和條件重復3次實驗。

菌絲生長抑制率/%=（對照菌落直徑-藥劑處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-接種菌餅直徑）×100。

1.3.3 不同藥劑對枯萎病菌的抑制作用 將咪鮮胺、咯菌腈、戊唑醇、異菌脲和腐霉利5種藥劑分別配制成質(zhì)量濃度為5 μg·mL-1和10 μg·mL-1溶液。以0.01%丙酮和無菌水作對照，每個濃度設置3次重復，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱（型號GXZ280C-4，寧波江南儀器廠）中培養(yǎng)，7 d后用菌絲生長速率法檢測不同處理對枯萎病病原菌菌絲生長的抑制情況。

1.3.4 不同濃度咯菌腈和咪鮮胺對枯萎病菌的抑制作用 將咯菌腈分別配制成0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、10.0 μg·mL-1等不同質(zhì)量濃度，將咪鮮胺原藥分別配制0.01、0.1、1.0、10.0、15.0 μg·mL-1等不同質(zhì)量濃度，以0.01%丙酮和不加藥劑的培養(yǎng)基（CK）作對照，每個濃度設置3個重復，利用菌絲生長速率法檢測不同濃度咯菌腈和咪鮮胺對枯萎病菌生長抑制效果。

1.3.5 咯菌腈和咪鮮胺兩種藥劑不同比例復配對枯萎病菌的抑制作用 以0.1 μg·mL-1的咪鮮胺和0.1 μg·mL-1咯菌腈按體積比為10?0、1?9、2?8、3?7、4?6、5?5、6?4、7?3、8?2、9?1、0?10進行復配，以0.01%的丙酮和不加藥劑的培養(yǎng)基（CK）作對照，各體積比及對照均設置3次重復。利用菌絲生長速率法檢測不同處理對枯萎病病原菌菌絲的生長抑制情況，并采用共毒因子法[14]評價混劑的增效作用。

共毒因子=（實際抑菌率-理論抑菌率）/理論抑菌率×100。

共毒因子>20表示為增效作用;-20≤共毒因子≤20表示為相加作用;共毒因子<-20為拮抗作用。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2007和DPS 7.50計算藥劑抑制菌絲生長的回歸方程、相關系數(shù)r和有效中濃度EC50;利用DPS 7.50進行Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗及方差分析，應用最小顯著差數(shù)（LSD）法進行檢驗;采用SPSS 20.0軟件進行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對菌絲生長的抑制效果

從表1可以看出，供試5種藥劑2個濃度均對番茄枯萎病菌菌絲生長均具有抑制作用，其中咪鮮胺、咯菌腈和戊唑醇均對其有顯著抑制作用。在藥劑質(zhì)量濃度為10 μg·mL-1時，戊唑醇、咯菌腈和咪鮮胺對番茄枯萎病菌絲生長抑制率分別為58.4%、93.9%和81.5%;在藥劑質(zhì)量濃度為5 μg·mL-1時，戊唑醇、咯菌腈和咪鮮胺對番茄枯萎病菌絲生長抑制率分別為65.5%、84.5%和67.0%。

2.2 不同濃度咯菌腈和咪鮮胺單劑對菌絲生長的抑制效果

由表2可以看出，不同濃度咪鮮胺均對枯萎病菌菌絲生長具有抑制作用，經(jīng)藥劑處理的菌落直徑均顯著小于0.01%丙酮和空白對照。在藥劑質(zhì)量濃度為0.1 μg·mL-1時，咪鮮胺對枯萎病菌菌絲生長抑菌率為73.8%;在藥劑質(zhì)量濃度為15 μg·mL-1時，抑菌率高達98.7%，其EC50值為0.02 μg·mL-1，毒力回歸方程為y=6.307 1+0.768 2 x，r=0.991 6。

不同濃度咯菌腈均對枯萎病菌菌絲的生長具有抑制作用，除質(zhì)量濃度0.01 μg·mL-1外，其他質(zhì)量濃度含藥平板菌落直徑均顯著小于0.01%丙酮和空白對照。在藥劑質(zhì)量濃度為0.1 μg·mL-1時，咯菌腈對枯萎病菌菌絲生長抑制率為48.7%;在藥劑質(zhì)量濃度為10 μg·mL-1時，抑菌率達94.3%，其EC50值為0.17 μg·mL-1，毒力回歸方程為y=5.929 3+1.200 7 x，r=0.951 0。

2.3 咪鮮胺和咯菌腈不同體積比復配對菌絲生長的抑制效果

由表3可以看出，咪鮮胺和咯菌腈不同復配比例對番茄枯萎病菌菌落生長均有顯著抑菌效果。其中，0.1 μg·mL-1咪鮮胺與相同質(zhì)量濃度咯菌腈體積比為5∶5、7∶3、1∶9、6∶4、8∶2、2∶8復配效果較好，抑菌率分別為78.9%、80.3%、83.4%、83.7%、84.8%、91.1%，共毒因子分別為28.7、21.1、62.9、31.2、23.3、69.6。在所有復配試驗中，以咪鮮胺與咯菌腈體積復配2：8對番茄枯萎病菌的抑制效果最好，抑菌率為91.1%，共毒因子為69.6。

3 討論與結(jié)論

農(nóng)藥復配是隨著農(nóng)藥研究的深入和市場上藥劑種類的增加而出現(xiàn)的。一些農(nóng)藥混劑應用可大大降低開發(fā)一種新型殺菌劑的難度，而且有利于延緩病菌對殺菌劑抗藥性的產(chǎn)生[15]。我國從20世紀80年代初期開始逐漸應用復配藥劑。近40年來，復配藥劑在農(nóng)藥種類中所占比例不斷增大[16]。截止到2019年10月31日，我國登記的農(nóng)藥品種為41 207種，其中復配劑12 020種，約占農(nóng)藥市場的三分之一。

已有研究表明，咯菌腈和嘧菌酯的復配劑對番茄枯萎病菌的抑制率為69%[17]。在番茄枯萎病發(fā)生初期，25%咪鮮胺乳油（EC）和20%嘧霉胺懸浮劑（WP）復配對病害有較好的防治效果[18]。1%阿維菌素·咯菌腈顆粒劑在使用劑量為300～375 g· hm-2時，在施藥后60 d對番茄枯萎病平均防效均高于90%，分別比單獨使用1%阿維菌素、0.1%咯菌腈顆粒劑防效高約18%和20%[19]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在質(zhì)量濃度為5、10 μg·mL-1的情況下，咪鮮胺、咯菌腈、戊唑醇對番茄枯萎病菌菌絲生長抑制作用顯著，抑制效果順序為：咯菌腈 > 咪鮮胺 > 戊唑醇，異菌脲和腐霉利對番茄枯萎病菌菌絲生長沒有抑制作用。咪鮮胺和咯菌腈不同比例復配對番茄枯萎病菌菌絲生長有顯著的抑制作用。0.1 μg·mL-1咪鮮胺對枯萎病菌的抑菌率為73.8%，其EC50為 0.02 μg·mL-1;0.1 μg·mL-1咯菌腈對枯萎病菌的抑菌率為48.7%，其EC50為0.17 μg·mL-1。0.1 μg·mL-1咪鮮胺和0.1 μg·mL-1咯菌腈以體積比為2∶8進行復配時，抑制效果最佳。因此，推存咪鮮胺與咯菌腈的復配劑可用于防治番茄枯萎病。然而，僅此復配比對枯萎病菌的抑制是否有增效作用還需要進一步深入研究。

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