頂空-氣相色譜法測(cè)定富馬酸伊布利特原料藥中5種溶劑殘留量

楊 帆,朱 夢(mèng),仝 倩

(江蘇九旭藥業(yè)有限公司,徐州 221200)

富馬酸伊布利特,化學(xué)名為N-[4-[4-(乙基庚基胺)-1-羥基丁基]苯基]甲磺酰胺富馬酸鹽,是一種安全、有效、快速轉(zhuǎn)復(fù)房顫抗心律失常藥物[1]。在富馬酸伊布利特的合成過(guò)程中用到二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮等有機(jī)溶劑,藥物中殘留的溶劑會(huì)增加毒性,因此應(yīng)在藥品生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)引入溶劑的殘留量進(jìn)行測(cè)定[2],以保證藥品的安全性。

目前,關(guān)于溶劑殘留量的測(cè)定方法主要有氣相色譜法(GC)[3-5]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[6-7],還有文獻(xiàn)報(bào)道采用頂空-氣相色譜法對(duì)富馬酸伊布利特原料藥中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定[8-9]。為有效控制富馬酸伊布利特的質(zhì)量,保證藥品的療效,本工作結(jié)合其制備工藝,根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)Q3C(R7)及《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則中對(duì)殘留溶劑的控制要求[10],采用頂空-氣相色譜法對(duì)富馬酸伊布利特原料藥中可能存在的二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮等溶劑殘留進(jìn)行測(cè)定。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B型氣相色譜儀;7697A 型頂空自動(dòng)進(jìn)樣器;XSE 205DU 型電子天平(十萬(wàn)分之一天平)。

混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液:分別稱取二氯甲烷約48.0 mg、四氫呋喃約57.6 mg,用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解并定容至10 mL 容量瓶中,搖勻,配制成二氯甲烷和四氫呋喃的混合儲(chǔ)備溶液;再分別稱取乙酸乙酯40 mg、乙醇40 mg、丙酮40 mg,移取二氯甲烷和四氫呋喃的混合儲(chǔ)備溶液1 mL,用DMF稀釋溶解并定容至100 mL容量瓶中,得到二氯甲烷的質(zhì)量濃度為48.0 mg·L-1,四氫呋喃的質(zhì)量濃度為57.6 mg·L-1,乙酸乙酯、乙醇、丙酮的質(zhì)量濃度均為400 mg·L-1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

混合對(duì)照品溶液1～3:分別移取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶 液12.5,25,50mL置于50mL容量瓶中,用DMF定容,搖勻,依次得到混合對(duì)照品溶液1～3。

富馬酸伊布利特原料藥,質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98.0%;二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇和丙酮均為分析純;DMF和二甲基亞砜(DMSO)均為色譜純。

1.2 儀器工作條件

1)頂空條件 頂空溫度為105 ℃;平衡時(shí)間為20 min。

2)色譜條件 DB-624毛細(xì)管色譜柱(60 m×0.32 mm,1.8μm);進(jìn)樣口溫度200 ℃;分流進(jìn)樣,分流比為10∶1;火焰離子化檢測(cè)器(FID),檢測(cè)器溫度250 ℃;載氣為氮?dú)?流量1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量1 000μL。柱升溫程序:初始溫度40 ℃,保持7 min;以10 ℃·min-1速率升溫至100 ℃,保持4 min;再以30 ℃·min-1速率升溫至200 ℃,保持4 min。

1.3 試驗(yàn)方法

稱取富馬酸伊布利特0.2 g,置于20 mL 頂空瓶中,加入DMF 5 mL,壓蓋,作為供試品溶液,按照儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑和柱溫的選擇

頂空-氣相色譜法測(cè)定殘留溶劑時(shí),通常以水為溶劑,但試驗(yàn)中測(cè)定的二氯甲烷和乙酸乙酯兩種殘留溶劑不溶于水,因此選擇DMF或DMSO 作為溶劑進(jìn)行測(cè)定。但DMSO 對(duì)樣品中丙酮的測(cè)定有干擾(專屬性不符合要求),而DMF 對(duì)樣品中丙酮的測(cè)定無(wú)干擾,因此試驗(yàn)選擇DMF為溶劑。

乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃均為極性相似的低沸點(diǎn)溶劑,沸點(diǎn)分別為78,57,40,77,66 ℃,因此試驗(yàn)選擇色譜柱的初始溫度為40 ℃。

2.2 專屬性試驗(yàn)

分別取空白溶液、5 mL 的混合對(duì)照品溶液2,各置于20 mL 頂空瓶中,壓蓋,按儀器工作條件測(cè)定。稱取2份富馬酸伊布利特0.2 g,置于20 mL頂空瓶中,分別加入5 mL的DMF和5 mL的混合對(duì)照品溶液2,壓蓋,依次得到供試品溶液和加標(biāo)供試品溶液,按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。記錄各溶劑峰與相鄰峰的分離度,各溶液的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 色譜圖Fig.1 Chromatograms

由圖1可知:空白溶劑對(duì)樣品的測(cè)定無(wú)干擾,各溶劑峰間的分離度均大于1.5,符合測(cè)定要求。5種溶劑的保留時(shí)間見(jiàn)表1。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

取混合對(duì)照品溶液2適量,用DMF 逐級(jí)稀釋,按照儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定,以3倍信噪比(S/N)計(jì)算方法的檢出限(3S/N),以10倍信噪比計(jì)算方法的測(cè)定下限(10S/N),結(jié)果見(jiàn)表1。

取5種溶劑測(cè)定下限對(duì)應(yīng)濃度的溶液、混合對(duì)照品溶液1～3、混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液等5個(gè)濃度水平(均在《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則中殘留溶劑的限度內(nèi))的溶液作為線性溶液,按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定。以5種溶劑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 5種溶劑的保留時(shí)間、線性參數(shù)、檢出限與測(cè)定下限Tab.1 Retention times,linearity parameters,detection limits and lower limits of determination for 5 solvents

由表1可知:乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和四氫呋喃的質(zhì)量濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,其相關(guān)系數(shù)均大于0.999 0。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取6份富馬酸伊布利特0.2 g,置于20 mL頂空瓶中,加入5 mL的混合對(duì)照品溶液2,壓蓋,即得加標(biāo)供試品溶液,按照儀器工作條件對(duì)殘留溶劑進(jìn)行測(cè)定,并計(jì)算測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)Tab.2 Results of test for repeatability(n＝6)

由表2 可知:5 種溶劑殘留量的RSD 均小于2.0%,符合測(cè)定要求。

2.5 回收試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法對(duì)富馬酸伊布利特原料藥樣品進(jìn)行低、中、高等3個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)濃度水平平行測(cè)定5次,其回收率和測(cè)定值的RSD 見(jiàn)表3。

由表3可知:5種溶劑的加標(biāo)回收率為102%～105%,RSD 均小于2.0%,說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度較高。

表3 回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)Tab.3 Results of test for recovery(n＝5)

2.6 樣品分析

取3 批樣品按試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明:3批樣品中均未檢出二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯和乙醇,而丙酮的檢出量均為0.001%。

本工作采用頂空-氣相色譜法測(cè)定富馬酸伊布利特中二氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯和乙醇等5種溶劑的殘留量,該方法的專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性好,滿足藥物分析的要求。