IL-39 在急性冠狀動脈綜合征中的表達(dá)水平及意義

李建民，王 斌，劉 玲，王葉寶，王立春

(江蘇省泰州市人民醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇 泰州 225300)

大量研究顯示，動脈粥樣硬化(AS)不僅僅是脂質(zhì)的積累，也是一種炎性疾病[1-2]。炎性反應(yīng)在ACS的發(fā)生、發(fā)展和心室重構(gòu)中起著重要作用[3-5]?？寡仔苑磻?yīng)治療被認(rèn)為是治療動脈粥樣硬化和ACS的新的希望。有最新的研究顯示，給予ACS患者150 mg/3個月的白介素-1β單克隆抗體卡那單抗(canakinumab)，與對照組相比，隨訪2年，顯著降低了心血管事件的復(fù)發(fā)率，而與血脂水平降低無關(guān)[6]。

IL-39是IL-12家族的新發(fā)現(xiàn)的家族成員[7-8]。有研究顯示，它在胰腺癌的疾病發(fā)展過程中可能促進(jìn)炎性反應(yīng)的發(fā)生[9]。同時有研究顯示，在角質(zhì)細(xì)胞中，IL-39可以抑制炎性反應(yīng)并促進(jìn)傷口愈合[10]。而在ACS患者中血漿IL-39的水平及其在ACS中的潛在作用仍有待研究。

IL-12家族成員其在炎性反應(yīng)中作用不一，IL-6作為公認(rèn)明確的促進(jìn)炎性因子[11]，而IL-35被認(rèn)為是一種抑制炎性因子[12，13]。在本研究中，檢測患者血漿IL-6、IL-35、IL-39的水平，并研究其與ACS其他參數(shù)的相關(guān)性，包括血漿脂蛋白、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶MB(CK-MB)和左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2018年6月～2019年6月江蘇省泰州市人民醫(yī)院150例冠狀動脈造影的患者。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。將其分為三組：對照組52例為冠狀動脈正常者，不穩(wěn)定型心絞痛組(UAP)組38例為不穩(wěn)定型心絞痛患者，急性心肌梗死組(AMI)60例為急性心肌梗死患者。按美國心臟協(xié)會/美國心臟病學(xué)會的ACS指南來識別UAP患者和AMI患者。60例AMI患者的特征均符合世界衛(wèi)生組織的診斷標(biāo)準(zhǔn)和中國醫(yī)學(xué)會的指南，包括持續(xù)30 min以上的胸痛，心電圖動態(tài)變化明顯而明確，心肌酶動態(tài)變化。在本文中，UAP組和AMI組共同組成了ACS組。排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性或慢性傳染病和自身免疫性疾病;②心肌病和瓣膜性心臟病;③肝臟疾病，腎功能不全，消化系統(tǒng)疾病或血液系統(tǒng)疾病;④甲狀腺功能障礙或癌癥;⑤最近的手術(shù)或外傷史;⑥既往有心肌梗死和支架植入病史;⑦他汀類藥物治療史超過一周。從每位患者獲得書面知情同意書。該研究得到中國江蘇省臺州市人民醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，批準(zhǔn)文號為“[2018]TZRY012”。

身穿輕便衣服的患者用電子秤稱重，精確度為0.1 kg，并通過便攜式測距儀以0.1 cm的精確度赤腳測量身高，計算每個患者的BMI(BMI=kg/m2)。每位患者的血壓通過標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)血壓計連續(xù)測量3次，并將平均值作為患者的血壓。入院后第2天，使用IE 33超聲檢查儀(菲利普斯，埃因霍溫，荷蘭)帶有成人探針對患者進(jìn)行檢查，并通過面積長度法從心尖四腔視圖測量LVEF。

1.2方法

1.2.1血液準(zhǔn)備：入院后24 h內(nèi)收集每位患者的空腹靜脈血，檢測尿酸(UA)、總膽固醇(TC)(酶法)、三酰甘油(TG)(酶法)、血糖(GLU)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(直接方法)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)(直接方法)。并通過橈動脈穿刺收集所有患者的動脈血。血液在半小時內(nèi)離心，-80℃保存。

采用雙抗夾心法ELISA檢測：①包被：用Ebi3抗體25 μl，加10 ml緩沖液使終濃度為25 μg/ml。向酶標(biāo)板各實(shí)驗(yàn)孔加入50 μl，封板，4℃孵育過夜。②封閉：用PBS緩沖液沖洗3次，加入200 μl封閉液，37℃孵育1 h。用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次；拍干板內(nèi)液體后室溫、晾干，封口膜封板，-20℃保存。③加樣：向待測孔內(nèi)加入120 μl PBS，再加40 μl待測樣品，向陽性對照孔內(nèi)加入198 μl PBS，再加2 μl 100 μl/ml標(biāo)準(zhǔn)品，梯度稀釋樣品與標(biāo)準(zhǔn)品。37℃孵育1 h。④加二抗：用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次，向酶標(biāo)板各實(shí)驗(yàn)孔中加入100 μl稀釋后的二抗(二抗P19 1 μl加5 ml PBS)，37℃孵育30 min。⑤顯色：用PBS/吐溫緩沖液沖洗5次，向酶標(biāo)板各實(shí)驗(yàn)孔中加入50 μl TMB，37℃孵育15 min，向酶標(biāo)板各實(shí)驗(yàn)孔中加入50 μl終止液(0.25M HCl)。⑥比色：酶標(biāo)儀450 nm處讀取吸光度值。ELISA法檢測了IL-6和IL-35，試劑來自Santa Cruz Company。

2 結(jié)果

2.1基線特征：三組年齡、收縮壓、空腹血糖、CK、CK-MB、LVEF比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩兩比較結(jié)果：身高、體重、BMI、LDL、TG、LVEDD兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組一般資料比較

2.2三組血清IL-39表達(dá)比較：UAP和AMI組血清IL-39均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；UAP組和AMI組之間的IL-39水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2、圖1。

表2 三組IL-39、IL-35和IL-6的表達(dá)比較

圖1 對照組、UAP和 AMI組之間IL-39的差異

2.3IL-39與血清中其他因子之間的相關(guān)性：IL-39在所有患者中均與IL-35、收縮壓和HDL呈正相關(guān)，而與IL-6、CK、CK-MB、年齡、GLU呈負(fù)相關(guān)，其中與IL-35正相關(guān)最高，與IL-6負(fù)相關(guān)最高。見表3。

表3 血清中IL-39與其他因素的相關(guān)性

2.4ACS組中IL-39與IL-35相關(guān)(r=0.239，P=0.018)，如圖2所示。

圖2 ACS組中IL-39和IL-35的相關(guān)性

2.5不同發(fā)作時間下IL-39的表達(dá)：在AMI組中，根據(jù)發(fā)病時間分組，發(fā)現(xiàn)IL-39的表達(dá)先下降然后上升，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表4。

表4 不同發(fā)作時間IL-39表達(dá)

2.6AMI患者抽吸組和非抽吸組比較：其IL-39均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 抽吸組與非抽吸組各臨床指標(biāo)比較

整理左前降支閉塞的AMI組共19例，未發(fā)現(xiàn)IL-39與LVEF之間的相關(guān)性(r=0.052，P=0.808)。

3 討論

動脈粥樣硬化不僅僅是脂質(zhì)的積累，也是一種炎性疾病。炎性反應(yīng)的靶向治療有可能成為冠心病治療的新熱點(diǎn)[6]。白介素被認(rèn)為是調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化進(jìn)展中的重要因素。研究證實(shí)，白介素-12家族各成員(IL-12、IL-23、IL-27、IL-35、IL-39等)是通過JAK/STAT(JAK/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活轉(zhuǎn)錄)途徑傳導(dǎo)信號，參與了動脈粥樣硬化形成和發(fā)展的作用[14]。其中IL-12、IL-23為促進(jìn)冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)展，IL-35、IL-Y為抑制AS的發(fā)展，IL-27對AS具有促進(jìn)及抑制的雙向作用。IL-39在ACS中的表達(dá)及意義研究不多。

本文首先檢測ACS患者血清IL-39、IL-6、IL-35、cTnI、CK-MB和LVEF水平。結(jié)果顯示ACS患者血液中IL-39水平較正常人明顯降低。所有患者血清IL-39水平與IL-35、收縮壓、HDL呈正相關(guān)，與IL-6、CK、CK-MB、年齡、空腹血糖呈負(fù)相關(guān)。其中，IL-35為正相關(guān)，IL-6為負(fù)相關(guān)。IL-39與LVEF無相關(guān)性。

IL-35是公認(rèn)的抗炎因子，能有效抑制效應(yīng)T細(xì)胞(Teff)的增殖和激活，誘導(dǎo)iTr35細(xì)胞的產(chǎn)生[15-16]。作為一種抑制性細(xì)胞因子，它還可以在自身免疫性疾病和病毒性傳染病中發(fā)揮作用[17-18]。IL-6作為一種明確的促炎因子，是參與機(jī)體炎性反應(yīng)、促進(jìn)動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的重要中介物質(zhì)[19-20]。IL-39在ACS中的表達(dá)明顯降低，與IL-6呈負(fù)相關(guān)，與IL-35呈正相關(guān)。我們的結(jié)果提示IL-39可能在ACS的發(fā)展過程中抗炎性因子。

按心肌梗死發(fā)病時間分組，雖然IL-39表達(dá)水平隨心肌梗死發(fā)生時間呈先下降后上升的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。我們檢測冠脈內(nèi)的IL-39表達(dá)與外周表達(dá)無明顯差異，提示IL-39在ACS的發(fā)病機(jī)制中更可能是一種慢性全身性炎性反應(yīng)，無局部炎性加重或者增強(qiáng)分泌的功能。我們未能發(fā)現(xiàn)急性心肌梗死(AMI)中IL-39和LVEF之間的明顯相關(guān)性，甚至在左前降支(LAD)閉塞引起的急性前壁心肌梗死中也是如此。我們認(rèn)為IL-39作為一種抗炎因子，在AMI發(fā)生發(fā)展過程中不能預(yù)測其預(yù)后。

總之，IL-39在ACS中表達(dá)水平明顯下降，可能作為ACS發(fā)生發(fā)展的一種抗炎癥因子，可能作為ACS治療的新靶點(diǎn)。但其表達(dá)與急性心肌梗死發(fā)病時間無關(guān)，與LVEF無關(guān)，不能作為心肌梗死預(yù)后的指標(biāo)。