宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9蛋白的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

薛麗，王剛，王常利

(1.空軍986醫(yī)院檢驗病理科；2.解放軍987醫(yī)院檢驗科，陜西 西安 710000)

鱗狀細胞癌是宮頸癌最常見的組織學類型[1]。近年宮頸癌及癌前病變的早期診斷和治療已得到顯著提高，但浸潤、轉(zhuǎn)移和分化不良仍是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和死亡的重要原因[2-3]。Ki-67是一種與細胞增殖相關(guān)的蛋白質(zhì)，能反映腫瘤細胞的增殖能力[4]。MMP9是MMP家族的重要成員之一，與多種腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。本研究擬對宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9蛋白的表達進行分析，并探討其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2020年6月在空軍986醫(yī)院病理科存檔并經(jīng)兩名病理專家確診的100份宮頸鱗癌組織標本和60份經(jīng)病理檢查證實為正常宮頸組織的癌旁標本。所有病例均有完整的臨床病理資料。根據(jù)FIGO分期標準，Ib-IIa期33例，IIb期46例，III期21例，低分化39例，中高分化61例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學法檢測Ki-67和MMP9蛋白表達 所有組織標本均采用多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度2 μm，。染色步驟如下：組織切片用梯度二甲苯和乙醇脫蠟脫水，放入100 ℃檸檬酸鹽緩沖液加熱20 min，待抗原冷卻至室溫后用3%過氧化氫封閉8 min，然后按照SP組織化學試劑盒(北京中山金橋生物科技有限公司)說明書進行操作，5%正常血清室溫孵育15 min，棄去血清，勿洗，加一抗4℃孵育過夜(Ki-67稀釋比例1∶100，MMP9稀釋比例1∶50，抗體購自美國Cell Signaling Technology公司)，次日使用磷酸鹽緩沖溶液沖洗3次，加入生物素標記的二抗，37℃孵育60 min，再經(jīng)磷酸鹽緩沖溶液沖洗3次，分別用二氨基聯(lián)苯胺和蘇木精染色，最后，經(jīng)梯度二甲苯和乙醇水合透明后用樹脂封閉切片，于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。

1.2.2 免疫組織化學結(jié)果評價標準 Ki-67蛋白陽性表達為腫瘤細胞核內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒，MMP9蛋白陽性表達為腫瘤胞漿內(nèi)有黃色和棕黃色顆粒。隨機選取每個節(jié)段的3個高倍視野(×400)，每個視野再選取100個CSCC細胞。首先根據(jù)染色強度評分，即無色、淡黃色、棕黃色和黑褐色分別用0分、1分、2分、3分表示，再根據(jù)陽性細胞百分率評分，即0分、1分、2分、3分、4分分別代表陰性，陽性細胞百分率≤10%，11%～40%，41%～75%，≥76%。兩項得分之積為最終得分，即0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～7分為陽性(++)，≥8分為強陽性(+++)[6]。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 20.00處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以[n(%)]表示，組間比較使用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，Ki-67、MMP9表達與臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗分析，Ki-67和MMP9相關(guān)性采用非參數(shù)Spearman秩相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67和MMP9在宮頸鱗癌組織及癌旁組織中的表達

Ki-67定位于細胞核內(nèi)，主要表現(xiàn)為黃色或棕褐色顆粒，在癌組織中呈弱陽性至強陽性表達，陽性率達100.0%，在癌旁組織中不表達；MMP9定位于胞漿內(nèi)，主要表現(xiàn)為棕褐色或褐色顆粒，在癌組織中呈弱陽性至強陽性表達，陽性率達100.0%，在癌旁組織中不表達。見圖1。

2.2 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的表達與患者臨床病理特征的關(guān)系

不同F(xiàn)IGO分期、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中Ki-67、MMP9表達情況存在明顯差異(P<0.05)，但不同年齡、組織分級的患者組織中Ki-67、MMP9表達情況無明顯差異(P>0.05)。見表1和表2。

表1 宮頸鱗癌組織中Ki-67的表達與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

表2 宮頸鱗癌組織中MMP9的表達與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的關(guān)系

宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9表達水平呈正相關(guān)(r=0.610，P=0.036)。見表3。

表3 宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9的關(guān)系(例)

3 討論

宮頸鱗癌約占宮頸癌患者總數(shù)的80%[7]。早期宮頸癌患者的生存率高達90%，但浸潤、轉(zhuǎn)移和分化不良仍是宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和死亡的重要原因[8-9]，故早期預(yù)防和治療可有效降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率。

Ki-67是一種與細胞增殖有關(guān)的核蛋白，其由兩條多肽鏈組成，具有非組蛋白特性，其能準確反映細胞增殖的階段[10-11]。Ki-67被認為是反映細胞增殖活性最可靠的標志物之一[12]。大量研究[13-15]表明，Ki-67在多種婦科惡性腫瘤中高表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示Ki-67在宮頸鱗癌組織中呈弱陽性至強陽性表達，陽性率達100.0%。同時發(fā)現(xiàn)不同F(xiàn)IGO分期、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中Ki-67表達情況存在明顯差異(P<0.05)，提示Ki-67的表達增加與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)。周成美等[16]研究發(fā)現(xiàn)， Ki-67水平可影響乳腺癌細胞增殖及遷移水平，而宮頸癌患者體內(nèi) Ki-6水平較高可能也與此相關(guān)。MMP9在腫瘤細胞局部浸潤與轉(zhuǎn)移中起到重要作用，其可以通過降解細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白，幫助腫瘤細胞穿越基底膜，進而發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移[17-18]。最近有研究[19]報道，MMP9還可通過促進血管形成及調(diào)控細胞黏附而參與腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，MMP9定位于胞漿內(nèi)，在宮頸鱗癌組織中呈弱陽性至強陽性表達，陽性率達100.0%，而在癌旁組織中不表達，且不同F(xiàn)IGO分期、組織分級、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者組織中MMP9表達情況存在明顯差異(P<0.05)，提示宮頸鱗癌組織中MMP9蛋白表達水平增加與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度有關(guān)。李勇軍等[20]研究發(fā)現(xiàn)，MMP9與宮頸癌的發(fā)展有關(guān)，其可促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這與本研究結(jié)論相一致。

本研究進一步分析了宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ki-67與MMP9表達水平呈正相關(guān)，推測宮頸鱗癌組織中Ki-67與MMP9表達水平越高，患者的預(yù)后可能也越差。

綜上所述，宮頸鱗癌組織中Ki-67和MMP9蛋白表達水平增加，并與宮頸鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度有關(guān)。