◎ 王 堯,劉倩倩,劉修辰,王鵬功
(1.中國(guó)檢驗(yàn)認(rèn)證集團(tuán)山東檢測(cè)有限公司,山東 青島 266000;2.中國(guó)檢驗(yàn)認(rèn)證集團(tuán)山東有限公司,山東 青島 266000)
農(nóng)藥除草劑的大規(guī)模使用在提高了農(nóng)作物產(chǎn)量的同時(shí),也對(duì)其他生物產(chǎn)生了一定量的危害。農(nóng)田中噴灑的農(nóng)藥,僅有10%~30%作用在作物上,其余進(jìn)入空氣中,或者隨水循環(huán)進(jìn)入江河湖海,很多國(guó)內(nèi)外研究表明海水中存在除草劑[1-2]。貝類為過濾性生物,而除草劑具有親脂性,所以貝類對(duì)除草劑有富集作用,除草劑在貝類體內(nèi)的積累對(duì)貝類的食用安全性產(chǎn)生一定的風(fēng)險(xiǎn)。因此,貝類中不同種類除草劑分析方法的研究具有現(xiàn)實(shí)意義。
本研究將貝類樣品用乙酸乙酯-二氯甲烷提取后,經(jīng)弗羅里硅土固相萃取柱凈化,C18色譜柱分離,采用電噴霧正離子源(ESI+)電離,經(jīng)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)進(jìn)行定性和定量分析。對(duì)6中除草劑的分析方法、檢出限、線性、回收率進(jìn)行研究,以期為貝類中除草劑的檢測(cè)和食用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供技術(shù)支持。
Utra 3000型高效色譜儀,TSQ Quantiva型三重四極桿質(zhì)譜儀,賽默飛世爾科技公司生產(chǎn);弗羅里硅土固相萃取柱(1 g/6 mL),德國(guó)Simon公司生產(chǎn);高速離心機(jī),賽默飛世爾科技公司生產(chǎn);旋蒸蒸發(fā)儀,德國(guó)Heidolph公司生產(chǎn);氮吹儀,南京海能儀器有限公司生產(chǎn);超純水制備儀,賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)。
混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:氟噠嗪草酯(99.6%)、嘧菌腙(1 000 mg·L-1)、磺草唑胺(1 000 mg·L-1)、丙嗪嘧磺?。?00 mg·L-1)、雙唑草腈(1 000 mg·L-1)及吡唑特(98.8%)用乙腈配制成濃度為10 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,4 ℃避光保存,使用時(shí)用乙腈稀釋至所需要的質(zhì)量濃度。
乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、乙腈均為色譜純,美國(guó)Merck公司生產(chǎn);實(shí)驗(yàn)用水為超純水
1.2.1 色譜條件
C18反相色譜柱:(10 mm×2 mm,3 μm),柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:2 μL;流速:0.2 mL·min-1。流動(dòng)相:A(水+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨),B(99%的乙腈水溶液+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨),從A∶B(9∶1)的混合液到A∶B(1∶9)的混合液,進(jìn)行10 min濃度均配之后,保持10 min。
1.2.2 質(zhì)譜條件
電噴霧正離子源(ESI+);多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描;噴霧電壓3 500 V;毛細(xì)管溫度350 ℃,鞘氣240 kPa,碰撞氣0.2 Pa,6種除草劑質(zhì)譜參數(shù)見表1。
表1 質(zhì)譜參數(shù)表
1.3.1 樣品制備
取可食用部分,充分?jǐn)囁?,混勻?18 ℃保存。
1.3.2 提取
稱取混勻的樣品5.00 g,置于50 mL離心管中,加入25 mL乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1)溶液。渦旋1 min。超聲提取20 min。以4 000 r·min-1的速度離心10 min。取上清液,減壓濃縮至盡干。加入2 mL乙酸乙酯-正己烷(1∶1),待凈化。
1.3.3 凈化
將1.3.2待凈化液轉(zhuǎn)入用5 mL乙酸乙酯-正己烷(1∶1)溶液活化過的弗羅里硅土固相萃取柱,用15 mL乙酸乙酯-正己烷(1∶1)溶液分3次洗脫,洗脫液收集到濃縮瓶中,于40 ℃水浴下旋蒸濃縮至干,用1 mL乙腈復(fù)溶,供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析??瞻兹芤簠⒄丈鲜鎏幚聿襟E得到空白基質(zhì)溶液。
50 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖和提取離子流圖見圖1。
配置1 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和500 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定,以濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo)繪制6種除草劑的工作曲線。在1~500 μg·L-1的線性范圍內(nèi),線性方程及相關(guān)性系數(shù)R2結(jié)果詳見表2。各除草劑的檢出限見表2。
取某市場(chǎng)采購(gòu)的牡蠣樣品,按照1.3方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)牡蠣樣品進(jìn)行10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1的3個(gè)水平添加。各水平添加回收率詳見表3。六種除草劑的添加回收率為75.4%~115.0%,本方法具有一定可靠性。
圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖
表2 線性參數(shù)及檢測(cè)限表
表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果表
本研究建立的固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定貝類樣品中氟噠嗪草酯、嘧菌腙、磺草唑胺、丙嗪嘧磺隆、雙唑草腈及吡唑特6種除草劑的方法,預(yù)處理所需要的有機(jī)溶劑用量少,質(zhì)譜分析基質(zhì)干擾少,方法檢出限低,線性關(guān)系良好,對(duì)貝類中除草劑含量的測(cè)定有重要的意義。