氣相色譜法測(cè)定蔬菜中4種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

◎ 蔣居瓊

（北海市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 北海 536000）

有機(jī)磷農(nóng)藥是一種含磷有機(jī)化合物農(nóng)藥，是一種廣譜高效的化學(xué)殺蟲劑[1]，主要用于植物病、蟲、草害的防治，廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，在農(nóng)作物產(chǎn)品中會(huì)有不同程度的殘留。有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)人、牲畜毒性很大，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不遵守規(guī)定的方法、劑量使用，可能會(huì)超標(biāo)，危害人體健康?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）結(jié)合實(shí)驗(yàn)室農(nóng)藥殘留分析，設(shè)定了農(nóng)產(chǎn)品中多種農(nóng)藥的最大殘留限值，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)提供了技術(shù)支持[2]。作為通用型方法的標(biāo)準(zhǔn)，NY/T 761—2008[3]方法可適用于54種有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定。在日常測(cè)試中，實(shí)驗(yàn)人員通常使用標(biāo)準(zhǔn)建議的分組模型來(lái)提高檢測(cè)效率，同時(shí)檢測(cè)多種農(nóng)藥。檢測(cè)部門常用氣相色譜[4-5]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[6-7]、液相色譜[8]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[9-10]進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)殘檢測(cè)，其中氣相色譜分析是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，與其他方法相比，該方法具有高選擇性、高分離效率、高靈敏度和高分析速度等特點(diǎn)[11]，廣泛用于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)，同時(shí)氣相色譜分析法在應(yīng)用中對(duì)參與其中的人員也提出了嚴(yán)格要求，檢驗(yàn)人員自身需要具有良好的工作素質(zhì)，并結(jié)合實(shí)際情況合理應(yīng)用氣相色譜分析法[12-13]，對(duì)蔬菜的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而對(duì)蔬菜進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，確保農(nóng)產(chǎn)品的綠色安全化種植。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

7890A氣相色譜儀（FPD檢測(cè)器，安捷倫科技有限公司）、MS204S電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）、熱高速冷凍離心機(jī)、渦旋混合器、氮吹儀及九陽(yáng)家用破壁機(jī)（九陽(yáng)股份有限公司）。

1.2 主要試劑

4種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：氧樂果、敵敵畏、三唑磷、毒死蜱，標(biāo)準(zhǔn)樣品全部由中國(guó)農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究監(jiān)測(cè)所處購(gòu)買，標(biāo)準(zhǔn)品全部為100 μg·mL-1濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。4種有機(jī)磷農(nóng)藥由丙酮試劑配成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，每組濃度為10.0 μg·mL-1，置于2 ℃條件下保存。測(cè)試用水是GB/T 6682—2008指定的I類水；丙酮，色譜純；乙腈，分析純；氯化鈉，分析純。

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

將裝有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100 μg·mL-1）氧樂果、敵敵畏、三唑醇和毒死蜱的安瓿瓶從冰箱中取出，置于室溫下，然后分別從各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)取1 mL全部轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，用丙酮調(diào)節(jié)體積至刻度，得到10 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)原液。將10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)原液用分步稀釋法配制成0.500 μg·mL-1、0.400 μg·mL-1、0.300 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1和0.050 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 方法

1.4.1 樣品前處理

將蔬菜樣品切碎，用破壁機(jī)研磨成勻漿。準(zhǔn)確稱取10.0 g制備好的試樣于帶塞塑料瓶中，加入乙腈20 mL，加入2 g氯化鈉，在旋渦混合器渦旋1 min，將離心管置于離心機(jī)中，于4 000 r·min-1轉(zhuǎn)速條件下離心5 min，收集上層提取液在45 ℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸餾至近干，加入2.0 mL丙酮后在渦旋混勻器上充分混勻，用0.2 μm過(guò)濾器過(guò)濾，轉(zhuǎn)移到自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中進(jìn)行測(cè)量。

1.4.2 儀器條件

色譜柱：DB-17彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×530 μm×1 μm）；編號(hào)：125-1732；升溫程序：150 ℃，保持2 min，升溫20 ℃·min-1至250 ℃，保持5 min；恒流：8 mL·min-1；檢測(cè)器溫度：250 ℃；氫氣：75 mL·min-1；空氣：100 mL·min-1；尾吹氣流量：10 mL·min-1；進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣法；進(jìn)樣體積：1.0 μL；進(jìn)樣口溫度：220.0 ℃。

2 結(jié)果和分析

2.1 提取方式的選擇

用破壁機(jī)攪碎樣品，代替NY/T 761—2008中用勻漿機(jī)處理樣品，破壁機(jī)可以破壞蔬菜樣品的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使殘留的有機(jī)磷農(nóng)殘更充分的被乙腈提取出來(lái)[14]。

2.2 提取試劑的選擇

大部分有機(jī)磷農(nóng)藥具有中等極性或弱極性，依據(jù)相似相溶原理，可以選擇乙腈、丙酮、石油醚等作為提取溶劑。蔬菜和水果含水量較高，丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑與水互溶；丙酮沸點(diǎn)低易揮發(fā)而且會(huì)過(guò)多提取水分；石油醚具有麻醉作用，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員具有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)；乙腈對(duì)大多數(shù)農(nóng)藥溶解性好，易與水相分離，穿透力大，對(duì)脂肪、色素等雜質(zhì)的提取能力小，可直接用氣相色譜法測(cè)定提取物。因此，選擇乙腈作為提取液。

2.3 定性分析

在相同氣相色譜條件下檢測(cè)4種有機(jī)氯農(nóng)藥的單獨(dú)標(biāo)準(zhǔn)品，記錄每種農(nóng)藥的色譜峰保留時(shí)間，作為定性依據(jù)。然后用丙酮稀釋上述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，使各成分濃度達(dá)到1.0 μg·mL-1，制備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按1.4.2氣相色譜條件進(jìn)行測(cè)定。使混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰與各有機(jī)氯農(nóng)藥的色譜峰保持時(shí)間相對(duì)應(yīng)，4種有機(jī)磷類農(nóng)藥的出峰順序依次為敵敵畏、氧樂果、毒死蜱、三唑磷，如圖1所示，保留時(shí)間分別為2.53 min、5.83 min、7.21 min、11.61 min。

2.4 定量分析

采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)四種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行定量分析。將準(zhǔn)確配制的0.050～0.500 μg·mL-1的各種有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品的工作溶液，通過(guò)峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸分析，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合線性方程和線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表1。從表1可以看出，敵敵畏、氧樂果、毒死蜱、三唑磷4種有機(jī)磷農(nóng)在0.050～0.500 μg·mL-1線性關(guān)系良好，解釋了峰值面積和濃度之間存在良好的相關(guān)性，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室的快速測(cè)試要求，滿足蔬菜農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)的要求。

圖1 農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表1 待測(cè)農(nóng)藥的線性方程及相關(guān)系數(shù)表

2.5 加標(biāo)回收率和精密度測(cè)定

為考察該方法的回收率和精密度，選擇已經(jīng)測(cè)定不含該4種農(nóng)殘的蔬菜樣品番茄、青椒、黃瓜、芹菜為背景，分別加入4種有機(jī)磷類農(nóng)殘濃度為0.05 mg·mk-1、0.20 mg·mk-1、0.40 mg·mk-1的混合工作液，充分混合后，按上述方法處理，每個(gè)濃度水平平行測(cè)6次。按照“1.4.1”方法進(jìn)行提取、濃縮和測(cè)定，并計(jì)算各待測(cè)成分的回收率和精密度。測(cè)定結(jié)果如表2所示，4種有機(jī)磷類農(nóng)藥的加標(biāo)回收率為81.0%～115.8%，精密度（RSD）為1.0%～8.7%，回收率和精密度均符合痕量分析要求，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)蔬菜有機(jī)磷農(nóng)殘的檢測(cè)需求。

表2 4種有機(jī)磷農(nóng)藥的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表

2.6 樣品檢測(cè)

采用上述方法，筆者所在的實(shí)驗(yàn)室2020年全年抽測(cè)蔬菜水果品種共1 787批，對(duì)實(shí)驗(yàn)室常檢樣品芹菜、黃瓜、番茄、油菜、韭菜、青椒、菠菜、苦瓜和茄子中4種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示油菜和菠菜中毒死蜱有檢出，其他3種農(nóng)藥殘留無(wú)檢出。多種葉類蔬菜農(nóng)殘超標(biāo)與農(nóng)藥進(jìn)入蔬菜的途徑有關(guān)，一方面是農(nóng)藥附著在蔬菜和水果表面，另一方面是植物在生長(zhǎng)過(guò)程中農(nóng)藥直接進(jìn)入蔬菜和水果。葉菜類的比表面積大，容易吸附化學(xué)分子。

3 結(jié)論

氣相色譜分析作為檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，在測(cè)定蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)，必須注重兩個(gè)方面：①在降低樣品中雜質(zhì)干擾的同時(shí)，必須從不同樣品中充分提取殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥，因此提取必須充分，保證提取步驟的有效性。②必須選擇與樣品相容的色譜柱，以保持樣品的有效分離。本文以乙腈為溶劑提取有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，由于樣品稱樣量小，整個(gè)過(guò)程的溶劑消耗也相應(yīng)減少，提取、混合、濃縮、測(cè)定和分析農(nóng)藥殘留的時(shí)間也大大縮短。方法操作簡(jiǎn)單，提取效果好，快速節(jié)能，可同時(shí)處理多組樣品，顯著提高樣品預(yù)處理效率，進(jìn)一步提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)效率，適用于蔬菜水果中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。