平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平對難治性癲癇大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp表達的影響

安運佳 王強 錢憶家 薛紅 李若照 婁金波 劉運權

摘要：目的 探討平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平對難治性癲癇模型大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)多藥耐藥相關蛋白1（MRP1）、P糖蛋白（P-gp）表達的影響。方法 選擇Wistar大鼠，采用顱內(nèi)注射海人酸建立難治性癲癇大鼠模型，隨機分為假手術組、模型組、卡馬西平組（0.03 g/kg），平肝止癇復方組（4.80 g/kg），高、中、低劑量平肝止癇復方+卡馬西平組（9.60+0.03 g/kg，4.80+0.03 g/kg，2.40+0.03 g/kg）。假手術組、模型組采用等體積蒸餾水灌胃，各組連續(xù)給藥4周，RT-PCR檢測海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp mRNA 的表達;Western Blot檢測（WB檢測）海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp蛋白的表達。結果 與假手術組比較，模型組海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)的MRP1、P-gp mRNA含量及蛋白的表達均明顯升高（P<0.01）;與模型組比較，平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平用藥均能顯著降低海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp mRNA含量及蛋白的表達（P<0.01，P<0.05）;與卡馬西平組比較，平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平用藥較好，其作用效果與給藥劑量高低呈正相關。結論 平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平能夠顯著降低難治性癲癇大鼠MRP1、P-gp表達水平，逆轉和降低海馬區(qū)MRP1、P-gp蛋白的表達可能是平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平抗耐藥性癲癇作用機制之一。

關鍵詞：平肝止癇復方;卡馬西平;難治性癲癇大鼠;耐藥性蛋白

中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2021）04-0067-06

Effect of Pinggan Zhixian Compound Combined with Carbamazepine on the Expression of MRP1 and P-gp in Hippocampus and Temporal Lobe Cortex of Refractory Epilepsy Rats

AN Yun-jia1， WANG Qiang1， QIAN Yi-jia1， XUE Hong2， LI Ruo-zhao2， LOU Jin-bo2， LIU Yunquan1， 2

（1. Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550003， China， 2. The Second Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， China）

【Abstract】Objective： To Study the effect of Pinggan Zhixian Compound combined with carbamazepine on the expression of multi-drug resistance related protein 1 （MRP1） and P-glycoprotein （P-gp） in the hippocampus and temporal lobe cortex of refractory epilepsy model rats. Methods： Wistar rats were selected and intracranial injection of kainic acid was used to establish a refractory epilepsy rat model. The rats were randomly divided into sham operation group， model group， carbamazepine group （0.03 g/kg）， and Pinggan Zhixian Compound group （4.80 g/kg）， high， medium， and low-dose Pinggan Zhi-epilepsy compound+carbamazepine group （9.60+0.03 g/kg， 4.80+0.03 g/kg， 2.40+0.03 g/kg）. The sham operation group and the model group were given intragastric administration with equal volume of distilled water. Each group was given continuous administration for 4 weeks. RT-PCR was used to detect the expression of MRP1 and P-gp mRNA in the hippocampus and temporal lobe cortex and Western Blot used to detect the hippocampus and temporal Expression of MRP1 and P-gp protein in temporal cortex. Results： Compared with those of the sham operation group， the MRP1， P-gp mRNA content and protein expression in the hippocampus and temporal lobe cortex of the model group were significantly increased （P<0.01）. Compared with those of the model group， the Pinggan Zhixian Compound combined with carbamazepine group could significantly reduce the MRP1， P-gp mRNA content and protein expression in the hippocampus and temporal lobe cortex areas （P<0.01， P<0.05）. Compared with the carbamazepine group， the Pinggan Zhixian Compound combined with carbamazepine group had a better drug effect， and its effect was positively correlated with the level of administration dose. Conclusion： Pinggan Zhixian Compound combined with carbamazepine can significantly reduce the expression levels of MRP1 and P-gp in refractory epilepsy rats. Reversing and reducing the expression of MRP1 and P-gp protein in hippocampus may be one of the mechanisms of anti-drug-resistant epilepsy of the combination of Pinggan Zhixian Compound and carbamazepine.

【Key words】Pinggan Zhixian Compound;carbamazepine;refractory epilepsy rats;drug resistance protein

癲癇是以腦神經(jīng)元異常放電引起反復癇性發(fā)作為特征的一種慢性腦部疾病，全球癲癇患者高達6500萬人，少部分患者進展成難治性癲癇[1-2]。臨床上大約有三分之一的患者對抗癲癇藥物（antiepileptic drug，AED）不敏感而使得癲癇發(fā)作不能得到有效控制，反復的癲癇發(fā)作導致神經(jīng)元的壞死與凋亡、突觸重塑，從而成為難治性癲癇（intractable epilepsy，IE）[3-5]。目前，闡明難治性癲癇的發(fā)病機制，預防和降低癲癇發(fā)作一直是癲癇研究的熱點。

卡馬西平作為癲癇的經(jīng)典治療藥物，廣泛的運用于臨床及基礎研究，課題組前期研究表明，平肝止癇復方對難治性大鼠具有顯著的治療效果[6-7]。在此基礎上本次研究將探討平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平及單用卡馬西平對難治性癲癇大鼠的治療效果，觀察中藥復方是否顯著增強療效。本實驗通過顱內(nèi)注射海人酸建立難治性癲癇動物模型，探討平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平對難治性癲癇模型大鼠海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp表達的影響。為進一步從耐藥性蛋白表達的角度探討其作用機制奠定了一定的研究基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 平肝止癇復方藥物組成：天麻、石菖蒲、全蝎、郁金、膽南星，均購于貴陽中醫(yī)二附院中藥免煎顆粒沖劑配方，來自四川省綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司。天麻，產(chǎn)品批號：1008072，每袋1.5 g，相當于飲片3 g;石菖蒲，產(chǎn)品批號：1009044，每袋1.1 g，相當于飲片6 g;全蝎，產(chǎn)品批號：1108023，每袋0.6 g，相當于飲片3 g;郁金，產(chǎn)品批號：1009018，每袋1.5 g，相當于飲片3 g;膽南星，產(chǎn)品批號：1002036，每袋1.5 g，相當于飲片3 g;丙戊酸鈉片（湖南湘中制藥有限公司，批號：120402）;海人酸（美國Sigma公司，貨號：K0250），卡馬西平（江蘇恩華藥業(yè)，生產(chǎn)批號：H321502）;兔單抗 GAPDH（杭州賢至生物有限公司，批號：AB-P-R 001）、兔單抗 MRP1（Invitrogen，批號：PA5-78694）、兔單抗P-gp（Abcam，批號：Ab170904）。

1.2 動物 健康Wistar大鼠100只，雄性。體重230～270 g，從長沙市天勤技術有限公司購買，飼養(yǎng)于貴州中醫(yī)藥大學動物實驗中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2014-0011。術前每組均以大鼠標準飼料喂養(yǎng)，自由飲水，適應性喂養(yǎng)至體重（250±20 g）后進行實驗研究，室溫18～22℃，濕度為60%～70%。

1.3 試劑 BCA蛋白濃度檢測試劑盒（批號：C1090、P0011，上海碧云天生物公司）;TAKARA熒光定量試劑盒（批號：RR036Q、RR820A，寶生物工程（大連）有限公司）;蛋白Marker（批號：DM131-02，北京全式金生物技術有限公司）;TRIzol試劑（批號：Lot：252250AX，北京艾德萊生物科技有限公司）;RNA反轉錄試劑盒，兔單抗P-gp、兔多抗MRP1（批號：ab170904、pa5-78694，Abcam）。

1.4 儀器 水平電泳儀、紫外分析儀（型號：JY300、JY02S，北京君意東方電泳設備有限公司）;電轉儀、垂直電泳槽（型號：DYCZ-40、DYCZ-24DN，北京六一儀器廠）;實時熒光定量PCR儀（型號：QuantStudio 6，ABI）;PCR儀（型號：EDC-810，北京東勝創(chuàng)新生物科技有限公司）;離心機（型號：HI650，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）;分光光度計（型號：752，舜宇恒平科學儀器有限公司（上海））;超級純水儀（型號：AJY-0501，Aquapro）;電熱恒溫鼓風干燥箱（型號：DHG 9203A，上海精宏實驗設備有限公司）;電熱恒溫水浴鍋（型號：HW-SY11-K P2，北京市長風儀器儀表有限公司）;酶標儀（Thermo，型號：mμlISKANMK3）;移液器（規(guī)格：0.5 μL，10 μL，100 μL，1000 μL，大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）股份公司）。

1.5 方法

1.5.1 分組及給藥 將100只大鼠適應性飼養(yǎng)7 d后進行造模，采用Racine評分法進行分級評分：I級，咀嚼、眨眼、立須等面部肌肉的抽搐;II級，以點頭運動為主的頸部肌肉抽搐;Ⅲ級，單側前肢陣攣、抽搐;Ⅳ級，雙側前肢陣攣、抽搐伴身體立起;V級，雙側后肢強直，身體背曲強直，跌倒伴全身陣攣。造模后出現(xiàn)Ⅳ級以上發(fā)視為癲癇造模成功，未達到Ⅳ級發(fā)作的歸入造模不成功組棄用。最終有48只大鼠造模成功，成功率為48%。將制備成功的難治性癲癇模型大鼠隨機分為：①模型組，②卡馬西平組，③平肝止癇復方組，④平肝止癇復方（高劑量）+卡馬西平組，⑤平肝止癇復方（中劑量）+卡馬西平組，⑥平肝止癇復方（低劑量）+卡馬西平組，每組8只，另設假手術組8只。模型組與假手術組常規(guī)飼養(yǎng)，給予生理鹽水2 mL/d灌胃，每天早上9點給藥，剩余各組每天一次給予藥物干預。按照實驗動物學人與大鼠用藥劑量換算方法進行轉換：卡馬西平用量為0.03 g/（kg·d），每天1次;平肝止癇復方組用量分別取免煎顆粒各成分的中劑量相加為4.80 g/（kg·d），以此類推平肝止癇復方組高、中、低劑量為9.60 g/（kg·d），4.80 g/（kg·d），2.40 g/（kg·d）;平肝止癇復方（高、中、低劑量）+卡馬西平組用量為：9.60+0.03 g/（kg·d），4.80+0.03 g/（kg·d），2.40+0.03 g/（kg·d），每天1次。各組大鼠統(tǒng)一灌胃給藥，連續(xù)灌胃給藥4周后分別取材。

1.5.2 難治性癲癇大鼠模型制備 10%水合氯醛4 mL/kg腹腔注射Wistar大鼠，麻醉后，將其頭部置于顱腦立體定位儀上，剃毛備皮，75%酒精消毒，沿矢狀線剪開約2 cm皮膚，暴露顱骨，在頭部背側中部作縱行切口，依次切開皮膚、皮下組織，鈍性分離骨筋膜拉鉤暴露手術視野，按大鼠腦立體定位圖譜，選擇右側海馬腹后部CA3區(qū)的三維坐標：X=-5.3 mm，Y=4.0 mm，Z=-6.0 mm，即注藥點，調(diào)整X軸和Y軸的坐標確定H點（X=-5.3 mm，Y=4.0 mm，Z=0.0 mm）并在H點顱骨鉆孔，在微量注射內(nèi)抽入1 μg/μL的海人酸2 μL，向下進針-6.0 mm達CA3中心點，在10 min內(nèi)緩慢勻速地注射完畢，留置5～>10 min后緩慢拔出注射器后鐘表螺絲封口，在對應左側上鐘表螺絲，用牙科水泥封口，將電極接在鐘表螺絲上面，縫合頭皮。假手術組在同樣解剖定位下予2 μL生理鹽水。

1.5.3 難治性癲癇大鼠造模成功標準 結合近年來的相關文獻研究，海人酸癲癇大鼠模型的成功標準判定為：海人酸海馬區(qū)注射后，觀察大鼠癲癇發(fā)作情況，若4h內(nèi)連續(xù)出現(xiàn)3次IV-V級發(fā)作，同時在慢性期內(nèi)觀察出現(xiàn)自發(fā)性癇性發(fā)作的大鼠作為制作成功的難治性癲癇大鼠模型[8]。本實驗結合以上判斷標準及前期課題組研究情況進一步完善后制定難治性癲癇模型成功標準為：（1）KA海馬CA3區(qū)注射后Racine分級出現(xiàn)IV級以上癲癇持續(xù)狀態(tài)時間（>30min）。（2）在經(jīng)過苯妥英鈉藥物篩選后的慢性自發(fā)發(fā)作期內(nèi)出現(xiàn)自發(fā)性癇性發(fā)作超過3次Racine分級達III級以上發(fā)作。（3）腦電圖監(jiān)測顯示有明顯癲癇波3次以上者，作為難治性癲癇成功的標志。（4）慢性自發(fā)發(fā)作期內(nèi)無癇性自發(fā)發(fā)作的及腦電圖記錄過程未出現(xiàn)明顯癲癇波的大鼠予棄用。

1.5.4 腦組織標本制作 將Wistar大鼠快速處死，置于冰盤上，開顱迅速取出腦組織，將大鼠腦干及小腦切除，小心沿矢狀面切開腦半球，剝離注射側，將海馬與顳葉皮質(zhì)區(qū)分別裝入EP管中，做好標記，采用4%多聚甲醛進行固定，并放入-80℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?。腦組織標本常規(guī)脫水及石蠟包埋操作，相關染色步驟按照檢測試劑盒說明書記錄進行染色操作。

1.5.5 QPCR法檢測大鼠海馬組織及海馬神經(jīng)元細胞中MRP1、P-gp的mRNA表達 設計并合成大鼠MRP1、P-gp及GAPDH基因的QPCR 檢測引物（表1）。首先嚴格按照TRIzol試劑盒說明書要求，分別取海馬組織提取總RNA。其次，按照逆轉錄試劑盒操作要求，把RNA逆轉錄成 cDNA。QPCR的總反應體系為20 μL，其中包含了實時PCR預混液10 μL，左、右引物各0.8 μL，超純水7.4 μL以及模板1.0 μL。 然后QPCR分三步進行：30 s 95℃預變性，5 s 95℃變性，20 s 60℃退火及20 s 72℃延伸，共進行40個循環(huán)，每個樣品均檢測3次。最后采用2-Ct法分析目的基因的相對表達情況。

1.5.6 WB檢測大鼠海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp的變化 取出凍存的海馬及顳葉皮質(zhì)組織，加入蛋白裂解溶液600 μL，于冰上裂解15 min，于4 °C下離心10 min，轉速為12000 r/min，收集上清液。于4°C下經(jīng)一抗MRP1、P-gp、內(nèi)參GAPDH等過夜靜置孵育，在37°C條件下，通過標記二抗辣根過氧化酶搖床孵育2 h后，進行ECL化學發(fā)光增強顯影后掃描膠片，將成像所得圖片Image J圖像分析軟件灰度分析，以GAPDH為內(nèi)參，對目的蛋白、內(nèi)參蛋白條帶光密度值進行統(tǒng)計分析，目的蛋白的表達量以兩者光密度比值（目的蛋白/內(nèi)參蛋白）表示。

1.5.7 統(tǒng)計學方法 將本實驗數(shù)據(jù)錄入EXCEL建立數(shù)據(jù)庫，使用SPSS 20.0進行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)以平均值±標準差（x±s）來表達，滿足正態(tài)分布與差齊性檢驗的數(shù)據(jù)，多組間比較使用單因素方差分析（One-way ANOVA），2組間比較用LSD-t檢驗，對不滿足方差齊性者采用Kruskal-Wallis（K-W）檢驗。

2 結果

2.1 MRP1、P-gp及GAPDH mRNA的RT PCR表達結果 各實驗組大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)中MRP1及P-gp mRNA表達情況如表2、圖1所示。與假手術組比較，模型組大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1及P-gp 表達均有顯著性增加（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1表達均有顯著性降低（P<0.01），除單純中藥復方組以外，卡馬西平組、不同劑量平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平組大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)P-gp表達均顯著性降低（P<0.05），表明藥物干預后，能逆轉下調(diào)在海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1及P-gp 表達水平;與卡馬西平組比較，不同劑量平肝止癇復方+卡馬西平組能顯著降低MRP1的表達（P<0.05），但P-gp的表達無明顯差異。見表2、圖1。

2.2 腦組織MRP1及P-gp Western Blot檢測 大鼠海馬及顳葉皮質(zhì)區(qū)的MRP1及P-gp蛋白表達見圖4，與假手術組比較，模型組大鼠腦組織中MRP1及P-gp蛋白表達極顯著增強（P<0.01），與模型組比較，平肝止癇復方低、中、高劑量聯(lián)合卡馬西平組大鼠腦組織MRP1及P-gP蛋白表達顯著減?。≒<0.05）。見圖2。

3 討論

癲癇是一種病因十分復雜的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，癲癇發(fā)作是大腦異常過度神經(jīng)元放電的結果，近年來，癲癇的耐藥機制成為研究的重點，研究發(fā)現(xiàn)，多藥耐藥相關蛋白，如MRP1、P-gp等表達上調(diào)與難治性癲癇耐藥性的產(chǎn)生密切相關[9-10]，故通過本試驗的研究，為進一步從多藥耐藥相關蛋白的表達探討其作用機制提供一定的實驗依據(jù)。近年來，難治性癲癇的耐藥機制成為研究的突破，研究發(fā)現(xiàn)，耐藥性蛋白MRP1、P-gp等表達上調(diào)與難治性癲癇耐藥性的產(chǎn)生密切相關[10-11]。P-gp和MRP1是兩種具有“藥物泵”功能的蛋白，兩者均能主動把疏水化合物和藥物從細胞內(nèi)轉運到細胞外。目前發(fā)現(xiàn)大多數(shù)抗癲癇藥物具有很好的脂溶性，能夠通過被動擴散透過血腦屏障，MRP1和P-gp是它們的底物，但若腦內(nèi)多藥耐藥蛋白表達增高，抗癲癇藥物在透過血腦屏障（BBB）時可被P-gp和MRP1等泵回血中，限制脂溶性藥物進入腦內(nèi)，使抗癲癇藥物濃度降低[12]。難治性癲癇患者中，因為P-gp和MRP1等蛋白在腦組織的過量表達，參與了多種抗癲癇藥物的轉運，降低了腦組織內(nèi)的血藥濃度，導致癲癇反復發(fā)作，成為難治性癲癇患者。

癲癇的治療原則是基于該病的發(fā)病方式及不同的癥狀體征來選擇藥物治療。臨床顳葉癲癇發(fā)作類型類似于在海馬區(qū)局部注射海人酸引起的SE后慢性特發(fā)性癲癇模型，表現(xiàn)為癲癇綜合征和復雜部分性癲癇發(fā)作?？R西平是復雜部分性癲癇發(fā)作在臨床用藥中的首選，故本實驗陽性對照藥物選用卡馬西平?？R西平系廣譜抗癲癇藥物，主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別適用于癲癇復雜部分性發(fā)作、亦稱精神運動性發(fā)作或顳葉癲癇，對大發(fā)作、局限性發(fā)作、和混合型癲癇也有效。實驗藥理發(fā)現(xiàn)卡馬西平無論是對全身性的癲癇模型還是對部分性的癲癇模型都具有良好的抗驚厥效果?？R西平的主要作用機制可能與降低神經(jīng)細胞膜對Ca2+和Na+的滲透性，以此減輕細胞的興奮性，延長神經(jīng)細胞的不應期有關。同時也與增加γ-氨基丁酸的濃度，促進GABA突觸之間的傳遞功能有關?？R西平在臨床應用中有諸多不良反應，如肝功能損害、皮疹、造血功能受損、共濟失調(diào)等，嚴重的副作用是剝脫性皮炎。本實驗研究中觀察到卡馬西平治療的大鼠未發(fā)現(xiàn)明顯皮疹及共濟失調(diào)，但本實驗未檢測肝功能及造血系統(tǒng)的變化。

癲癇屬于中醫(yī)癇證的范疇，早在兩千多年前，中醫(yī)就已經(jīng)認識到癲癇與肝風內(nèi)動密切相關，如《素問·風論篇》：“風者，善行而數(shù)變”。另有“善行者，無處不到，數(shù)變者，證不一端。風之為邪氣，其厲矣哉”、“風通氣于肝，肝主筋，故風傷筋”的理論。中醫(yī)學認為癲癇是一種發(fā)作性的神志異常性疾病，其病機為肝風內(nèi)動，風痰上擾，心神被蒙;肝火素旺，火動生風，煎熬津液，結而為痰，風動痰升，阻塞心竅。主要病理乃風、痰、氣、火、瘀，膠結不解，其病變臟腑雖為心、肝、脾、腎，但總離不開肝主疏泄、藏血功能失常;心主藏神，肝血充盈，則心有所藏，肝血不足，則心脈不充而神志失常;脾主運化，氣機不暢，脾運失職，則痰濁內(nèi)生，蔽竅致癇;腎主藏精生髓，髓充于腦，精血同源，肝血不足，髓元不充則腦?？仗摗⑸裰臼С?。而肝臟升發(fā)太過和不及，肝腎陰虧而陽生無制，陰血不足，虛風內(nèi)動都可致癇證發(fā)生，因而平肝止癇是癇證中醫(yī)治療的關鍵。

平肝止癇復方是長期臨床經(jīng)驗總結而得，其以天麻為君藥，全蝎、膽南星、郁金為臣藥，石菖蒲、冰片為佐使藥的復方藥。天麻熄風止痙、平肝潛陽、祛風通絡;全蝎祛風止痙;郁金行氣化瘀、清心解郁;膽南星清熱化痰，熄風定驚;石菖蒲開竅化濁、鎮(zhèn)驚定癇。諸藥合用，達到清散肝熱、祛風止痙、開竅化痰、鎮(zhèn)驚定癇功效。

根據(jù)研究結果，成功造模后的難治性癲癇大鼠海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp mRNA及蛋白的表達均明顯增加，通過卡馬西平、平肝止癇復方及平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平用藥干預處理后。結果，以MRP1、P-gp為目標蛋白，與模型組比較，各給藥組大鼠海馬區(qū)灰度比值及陽性細胞數(shù)與顳葉皮質(zhì)區(qū)陽性細胞數(shù)均降低（P<0.01，P<0.05），而單用平肝止癇復方對海馬區(qū)灰度比值無影響;PCR顯示MRP1及P-gp mRNA表達均顯著下調(diào);WB檢測MRP1及P-gp蛋白均顯著減少，這些表明藥物干預后，聯(lián)合用藥能逆轉下調(diào)在海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1及P-gp表達水平;與卡馬西平組比較，不同劑量平肝止癇復方+卡馬西平組能顯著降低海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)陽性細胞數(shù)（P<0.01，P<0.05），PCR顯示MRP1 mRNA表達均顯著下調(diào)，P-gp mRNA 表達均有下調(diào)，但差異無顯著性;WB檢測MRP1及P-gp蛋白均顯著減少，結合聯(lián)合用藥不同劑量組均值對比分析，表明隨著劑量變化，作用結果與給藥劑量高低呈正相關，下調(diào)趨勢較單用卡馬西平要好。

4 小結

難治性癲癇會產(chǎn)生不同程度的耐藥性，逆轉和下調(diào)相關耐藥蛋白的異常表達，提高抗癲癇藥物在腦組織中的濃度，可為耐藥性癲癇的治療提供新的途徑和思路，通過本試驗的研究，發(fā)現(xiàn)平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平治療難治性癲癇大鼠，中西藥合用，可進一步提高藥物透過血腦屏障，提高腦組織中血藥濃度，對大鼠海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp的作用效果與給藥劑量的高低呈正相關，下調(diào)趨勢較單用平肝止癇復方或卡馬西平要好，故抑制海馬區(qū)及顳葉皮質(zhì)區(qū)MRP1、P-gp的異常表達，可能是平肝止癇復方聯(lián)合卡馬西平抗耐藥性癲癇的作用機制之一。

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（收稿日期：2020-11-23）