T細(xì)胞亞群、IL-6及IL-10在支氣管哮喘患兒治療中的變化

黃國(guó)玲 陳紅兵 譚忠友

支氣管哮喘是一種氣道慢性炎癥發(fā)應(yīng)，常伴有廣泛而多變的氣流阻塞，該病在兒童中發(fā)病率較高，是常見(jiàn)的小兒呼吸道疾病，目前該病發(fā)病的機(jī)制尚不明確，可能與兒童過(guò)敏體質(zhì)、肥胖以及遺傳等因素有關(guān)［1］?；純喊l(fā)病時(shí)主要表現(xiàn)為反復(fù)的喘息、咳嗽、氣促、胸悶，常在夜間或凌晨發(fā)作或加重，危重時(shí)還可表現(xiàn)出端坐呼吸的狀態(tài)。支氣管哮喘患兒的病情若長(zhǎng)期未得到有效的治療予控制會(huì)影響兒童的生長(zhǎng)發(fā)育和肺功能發(fā)育，形成慢性阻塞性肺疾病、肺動(dòng)脈高壓、慢性肺源性心臟病等［2］。支氣管哮喘的治療應(yīng)及早開(kāi)始，并堅(jiān)持長(zhǎng)期、持續(xù)、規(guī)范的治療，多數(shù)患兒經(jīng)過(guò)正規(guī)的治療后，能夠完全控制病情，對(duì)患兒的生長(zhǎng)發(fā)育影響不大，因此為患兒選擇能夠有效治療并長(zhǎng)期安全控制病情的治療方案是治療的要點(diǎn)［3］。本研究就孟魯司特聯(lián)合布地奈德治療對(duì)支氣管哮喘患兒T 淋巴細(xì)胞亞群、IL-6 及IL-10 水平的影響展開(kāi)探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年8月至2020年1月本院收治的102 例支氣管哮喘患兒。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患兒均符合《支氣管哮喘防治指南（2016年版）》［4］中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②未合并重要器官嚴(yán)重疾??；③此次入院前4 周內(nèi)未經(jīng)過(guò)相關(guān)治療；④患兒臨床資料完整，患兒及家長(zhǎng)對(duì)研究知情且自愿參加。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡>14 歲；②既往長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑；③合并全身感染性疾病；④既往有相關(guān)藥物過(guò)敏史或者過(guò)敏體質(zhì)者。

根據(jù)治療方法不同分為研究組（n=52）和基礎(chǔ)組（n=50）。研究組：男37 例，女15 例，年齡平均（7.23±2.10）歲，病程平均（1.72±0.88）年?；A(chǔ)組：男36 例，女14 例，年齡平均（7.05±1.96）歲，病程平均（1.69±0.85）年；兩組患兒年齡、性別、病程等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患兒家屬均知情同意。

表1 兩組基線資料比較（±s）Table 1 Comparison of baseline data between 2 groups（±s）

表1 兩組基線資料比較（±s）Table 1 Comparison of baseline data between 2 groups（±s）

組別研究組基礎(chǔ)組t/χ2值P 值n 52 50--平均年齡（歲）7.23±2.10 7.05±1.96 0.447 0.656平均病程（年）1.72±0.88 1.69±0.85 0.175 0.861性別（男/女）37/15 36/14 0.009 0.925

1.2 方法

兩組患兒入院后均予常規(guī)解痙、平喘、化痰、吸氧、補(bǔ)液等對(duì)癥支持治療。在此基礎(chǔ)上，予研究組患者孟魯司特聯(lián)合布地奈德治療，具體用藥方法如下：布地奈德吸入氣霧劑（Chiesi Farmaceutici S.p.A。公司生產(chǎn)；H20120320；每瓶200 撳，每撳含布地奈德200 μg）經(jīng)口吸入，3～6 歲的患兒：200 μg 每次，2 次每天；7～13 歲的患兒：400 μg 每次，2 次每天；再予患兒孟魯司特鈉咀嚼片（四川大冢制藥有限公司生產(chǎn)；國(guó)藥準(zhǔn)字H20064828）口服，于睡前服用，4～5 歲的患兒：4 mg 每次，1 次每天；6～13 歲的患兒：5 mg 每次，1 次每天。予基礎(chǔ)組患者布地奈德治療，用藥方法同研究組。兩組患兒均以連續(xù)用藥4 周為一個(gè)周期，治療2 個(gè)周期，用藥過(guò)程中觀察患兒的用藥反應(yīng)，若出現(xiàn)不良反應(yīng)可減少用藥劑量，若出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)立即停止用藥并予治療。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 臨床療效［5］

根據(jù)患者治療后臨床癥狀緩解情況作為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。臨床控制：治療后患兒相關(guān)癥狀體征極肺部哮鳴音完全消失；顯效：治療后患兒相關(guān)癥狀體征及肺部哮鳴音明顯改善；有效：較治療前，患兒相關(guān)癥狀體征及肺部哮鳴音有一定的改善；無(wú)效：治療后，患兒相關(guān)癥狀體征及肺部哮鳴音無(wú)改善甚至有加重者?？傆行?（臨床控制+顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3.2 T 淋巴細(xì)胞亞群

于治療前1 天和治療結(jié)束后2 天進(jìn)行檢測(cè)，所有受檢者抽取外周靜脈血5 mL，使用熒光標(biāo)記全血溶血法對(duì)熒光抗體進(jìn)行標(biāo)記，使用流式細(xì)胞儀Flow Cytometry System 進(jìn)行檢測(cè)，20 μL CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP 與同型對(duì)照熒光單抗加入檢測(cè)管，再各加入100 μL EDTA-K2 抗凝全血，將其混合均勻之后室溫放置15～20 min，上COUL-TERQ-PREP 自動(dòng)溶血儀溶血35 s，置入流式細(xì)胞儀檢測(cè)，使用CyView 軟件分析CD3+、CD4+、CD8+等T 細(xì)胞亞群的百分比。

1.3.3 IL-6、IL-10 水平

分別于治療前1 天和治療結(jié)束后2 天檢測(cè)患者白介素-6（interleukin 6，IL-6），白介素-10（interleu-kin 10，IL-10）的水平。采用雙抗體夾心ELISA 法進(jìn)行檢測(cè)，所有試劑盒均由上海江萊生物科技有限公司提供，相關(guān)操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.4 肺功能

于治療前1 天和治療結(jié)束后2 天分別測(cè)定兩組患兒的用力肺活量（forced vital capacity，F(xiàn)VC）、第一秒用力呼氣容積（Forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1）以及最大呼氣流量（peak expi-ratory flow，PEF）等肺功能指標(biāo)的水平。采用肺功能測(cè)定儀（北京領(lǐng)鋒創(chuàng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)）進(jìn)行測(cè)定并記錄。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（）描述，行t檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療效果的比較

研究組治療總有效率（96.15%）高于基礎(chǔ)組治療總有效率（84.00%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組治療效果比較［n（%）］Table 2 Comparison of treatment effect between 2 groups［n（%）］

2.2 兩組治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群水平的比較

治療前，兩組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平升高，CD8+水平下降，研究組變化程度明顯高于基礎(chǔ)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets before and after treatment between the two groups（±s）

表3 兩組治療前后T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets before and after treatment between the two groups（±s）

注：與同組用藥前比較，aP<0.05。

組別研究組基礎(chǔ)組t 值P 值CD3+（%）用藥前66.25±7.36 66.92±8.08 0.438 0.662用藥后92.23±12.24a 80.10±11.78a 5.096<0.001 CD4+（%）用藥前28.27±5.12 28.86±5.31 0.571 0.569用藥后51.42±12.26a 36.86±8.32a 6.991<0.001 CD8+（%）用藥前39.16±4.58 39.65±4.41 0.550 0.584用藥后24.10±3.87a 31.18±3.69a 9.449<0.001 CD4+/CD8+用藥前0.59±0.21 0.60±0.20 0.246 0.806用藥后1.80±0.22a 1.10±0.12a 19.837<0.001

2.3 兩組用藥前后IL-6、IL-10 水平的比較

用藥前，兩組IL-6、IL-10 含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。用藥后，兩組IL-6 含量下降，IL-10 含量上升，研究組IL-6、IL-10 變化水平較基礎(chǔ)組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4。

表4 兩組用藥前后IL-6、IL-10 水平比較（±s）Table 4 Comparison of IL-6 and IL-10 levels between the two groups before and after treatment（±s）

表4 兩組用藥前后IL-6、IL-10 水平比較（±s）Table 4 Comparison of IL-6 and IL-10 levels between the two groups before and after treatment（±s）

注：與同組用藥前比較，aP<0.05。

組別研究組基礎(chǔ)組t 值P 值n 52 50--IL-6（pg/mL）用藥前11.96±2.88 12.02±2.86 0.106 0.916用藥后6.23±3.12a 8.86±3.65a 3.917<0.001 IL-10（pg/mL）用藥前35.62±5.12 36.24±4.89 1.096 0.748用藥后22.86±5.87a 28.82±6.13a 5.016<0.001

2.4 兩組用藥前后肺功能變化的比較

用藥前，兩組FVC、PEF、FEV1 等肺功能指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。用藥后，兩組各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)值均有不同程度的上升，研究組上升幅度明顯高于基礎(chǔ)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表5。

表5 兩組用藥前后肺功能變化比較（±s）Table 5 Comparison of lung function changes between the two groups before and after treatment（±s）

表5 兩組用藥前后肺功能變化比較（±s）Table 5 Comparison of lung function changes between the two groups before and after treatment（±s）

注：與同組用藥前比較，aP<0.05。

組別研究組基礎(chǔ)組t 值P 值n 52 50--FVC（L）用藥前2.65±0.52 2.70±0.50 0.495 0.622用藥后4.20±0.73a 3.51±0.66a 5.001<0.001 PEF（L/s）用藥前2.72±0.41 2.75±0.42 0.365 0.716用藥后4.51±0.60a 3.81±0.51a 6.337<0.001 FEV1（L）用藥前1.59±0.28 1.60±0.26 0.187 0.852用藥后2.81±0.40a 2.42±0.36a 5.169<0.001

3 討論

小兒支氣管哮喘是常見(jiàn)的小兒呼吸道慢性炎性疾病，哮喘的發(fā)病機(jī)制尚未有明確的定論，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為哮喘是一種涉及多種炎癥細(xì)胞、介質(zhì)與細(xì)胞因子參與的炎癥疾病，主要表現(xiàn)為多種炎性因子在氣道的浸潤(rùn)和聚集，使氣道反應(yīng)增高、氣道收縮、粘液分泌增加［6-7］。

白三烯以及IL-6 等炎性因子是誘發(fā)小兒哮喘的重要炎性因子。白三烯是鼻炎的主要致病因子，有研究發(fā)現(xiàn)，其在上下呼吸道的炎癥中起到了重要的作用，哮喘患者白三烯釋放的數(shù)量要明顯高于正常人，其能夠與其他炎性因子互相作用使機(jī)體分泌更多炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子，加重病情［8］。IL-6 是一種多效細(xì)胞因子，正常人血清中該因子的水平含量較低，但當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)某些疾病時(shí)，其含量會(huì)急劇上升，是判斷機(jī)體是否存在炎癥的重要指標(biāo)［9］。IL-10 是一種以抑制炎癥反應(yīng)為主的細(xì)胞因子，但部分哮喘患者存在IL-10 的合成障礙，導(dǎo)致體內(nèi)該因子水平降低，對(duì)氣道炎癥的的抑制力下降，使哮喘患者的氣道炎癥長(zhǎng)期存在［10］。針對(duì)哮喘患者存在的長(zhǎng)期炎癥發(fā)應(yīng)，臨床主要治療原則是急性期抗炎、平喘以緩解癥狀，慢性持續(xù)其長(zhǎng)期抗炎以控制病情［11］。布地奈德是一種糖皮質(zhì)激素藥物，能夠減輕全身的炎癥反應(yīng)，其局部應(yīng)用能夠起到更高效的抗炎作用。有研究發(fā)現(xiàn)布地奈德能夠促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生IL-10 共同發(fā)揮抗炎作用，但其對(duì)白三烯的合成與分泌無(wú)明顯的抑制作用，因此單獨(dú)使用該藥物治療小兒支氣管哮喘的療效并不能達(dá)到預(yù)期的效果［12］。孟魯司特是一種白三烯受體拮抗劑，其主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性與半胱氨酸白三烯受體結(jié)合而阻斷白三烯的活性而發(fā)揮作用，能夠抑制白三烯對(duì)氣道的致炎作用從而起到抑制炎癥反應(yīng)、病情進(jìn)展、改善肺功能的作用［13］。本研究結(jié)果這表明孟魯司特與布地奈德聯(lián)合能夠協(xié)同發(fā)揮抗炎的作用，改善患者的癥狀體征，從而達(dá)到控制病情發(fā)展、改善患兒肺功能以提高治療的效果。

相關(guān)研究表明，T 淋巴細(xì)胞亞群的異常變化亦參與了支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，CD4+誘導(dǎo)和增強(qiáng)T 細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的免疫應(yīng)答［14］。CD8+是一種細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞，具有抑制CD4+及誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡的作用。正常時(shí)這兩類細(xì)胞保持一定的比例，功能上相互影響，相互拮抗，共同維持機(jī)體免疫系統(tǒng)功能平衡。CD3+是T 細(xì)胞成熟的標(biāo)志，其降低通常提示機(jī)體可能存在炎癥反應(yīng)［15］。有研究發(fā)現(xiàn)，哮喘急性發(fā)作期患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平下降，而CD8+水平升高，表現(xiàn)出免疫功能受損［16］。本研究結(jié)果表明聯(lián)合用藥治療能夠改善患兒的免疫功能。

綜上所述，孟魯司特聯(lián)合布地奈德治療支氣管哮喘臨床療效顯著，能夠有效改善患兒肺功能肺功能，提高CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以及IL-10 水平，降低CD8+、IL-6 水平。