血清IGFBP3、ERCC1與NSCLC患者一線化療敏感性的關(guān)系

張秀芳 張軍營 王 培

放化療治療在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的治療過程中具有重要的作用，其能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，降低癌細(xì)胞活性，進(jìn)而降低肺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[1]。臨床上的流行病學(xué)隨訪分析發(fā)現(xiàn)，NSCLC化療后耐藥的發(fā)生率可超過15%以上，同時(shí)隨著化療次數(shù)的增多，NSCLC化療耐藥的風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步上升[2]。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBP)是胰島素生長因子，其對(duì)于癌細(xì)胞膜上膜蛋白受體的結(jié)合，能夠降低癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的激活程度，抑制腫瘤細(xì)胞的活化[3]；核苷酸切除修復(fù)交錯(cuò)互補(bǔ)基因1(ERCC1)是基因調(diào)控修復(fù)因子，其對(duì)于癌基因的切除修復(fù)作用，能夠避免癌基因激活導(dǎo)致的腫瘤異常轉(zhuǎn)錄的增強(qiáng)[4]。為了揭示IGFBP3、ERCC1的表達(dá)與NSCLC患者化療的關(guān)系，從而為臨床上NSCLC的診療提供參考，本次研究選取2017年8月至2020年2月我科實(shí)施一線化療的NSCLC患者107例，探討了IGFBP3、ERCC1在不同化療結(jié)局患者中的表達(dá)情況，并分析了IGFBP3、ERCC1對(duì)于化療敏感性的影響。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

選取2017年8月至2020年2月我科實(shí)施一線化療的NSCLC患者107例，所有患者符合中華呼吸學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，在完成4～6個(gè)療程后，根據(jù)WHO實(shí)體瘤療效評(píng)估結(jié)果分為敏感組77例、不敏感組30例。敏感組77例，年齡44～72歲，平均(58.7±8.2)歲；男性44例、女性33例。不敏感組30例，年齡42～75歲，平均(59.4±9.4)歲；男性21例、女性9例。兩組患者就上述一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡在19～75歲以內(nèi)；②均為初次診斷的NSCLC患者，既往無放化療病史；③患者不愿意接受手術(shù)或不能采取手術(shù)治療：④具有影像學(xué)可測(cè)定的實(shí)體瘤；⑤本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)方面的規(guī)定，研究對(duì)象知情并同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肺結(jié)核、哮喘、慢阻肺、肺部纖維化等疾病；②長期使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑；③既往手術(shù)后復(fù)發(fā)的患者、具有放化療病史；④合并其他部位的惡性腫瘤。

1.2 方法

1.2.1 一線化療方案 吉西他濱(江蘇紅豆杉藥業(yè)有限公司 批號(hào)TFJ20130101 )化療，1 000 mg/m2，第1、8天，順鉑注射液(南京揚(yáng)子江藥業(yè) 批號(hào)20150312)，20 mg/m2，第1～5 d，連續(xù)治療28 d為一個(gè)周期，連續(xù)治療3個(gè)周期。

1.2.2 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 近期療效判定依據(jù)WHO實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，共分為四個(gè)等級(jí)：1為完全緩解(CR)、2為部分緩解(PR)、3為疾病穩(wěn)定(SD)、4為疾病進(jìn)展(PD)；CR+PR患者為化療敏感。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)方法 取患者肘部靜脈血5 ml，并進(jìn)行1 000 r/min離心10 min后，取其上清液待測(cè)。從密封袋中取出實(shí)驗(yàn)的板條，然后將空白孔中加入樣品或者100 μl/孔的稀釋液，在檢測(cè)孔中加入100 μl/孔的標(biāo)本，并用膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，放置于36 ℃條件下進(jìn)行孵育60～90 min，用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行5次清洗，在空白對(duì)照孔中加入100 μl的生物素抗體稀釋液，檢測(cè)孔中加入100 μl的生物素抗體檢測(cè)液，然后再次用膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，放置于36 ℃條件下孵育30～60 min，空白對(duì)照孔中加入酶結(jié)合100 μl的稀釋液，檢測(cè)孔中加入酶結(jié)合100 μl的檢測(cè)液，再用膠紙封閉實(shí)驗(yàn)表?xiàng)l孔，用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行5次清洗，加入有湖州英創(chuàng)生物科技公司生產(chǎn)的YSRIBIO的TMB顯色底液，避光36 ℃孵育15 min，加入終止液100 μl，并在3 min內(nèi)檢測(cè)OD450值，BioTek酶標(biāo)儀由美國伯騰儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 二組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平比較

經(jīng)過4～6個(gè)周期的化療，其中CR 22例、PR 55例、SD 24例、PD 6例；化療敏感組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平顯著的高于不敏感組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 二組患者化療前血清IGFBP3、ERCC1水平比較

2.2 二組患者臨床病理學(xué)特征比較

化療敏感組患者與不敏感組患者TNM分期、腫瘤分化程度比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組年齡、性別、吸煙、病理類型、病灶直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 二組患者臨床病理學(xué)特征比較(例，%)

2.3 對(duì)NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

經(jīng)Logistic回歸分析，TNM分期增高、分化程度降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)；血清IGFBP3水平升高、ERCC1水平升高可提高NSCLC患者一線化療的敏感性(P<0.05)，見表3。

表3 NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

3 討論

NSCLC的發(fā)生，能夠?qū)е路伟┗颊呖傮w生存時(shí)間的縮短，影響到肺癌患者的病情進(jìn)展速度[6-7]。在中晚期NSCLC患者中，靜脈化療治療能夠在NSCLC生存時(shí)間的獲益或者生存率的改善方面發(fā)揮作用。不同的因素均能夠影響到NSCLC的化療結(jié)局，其中越來越多的研究關(guān)注到，分子生物學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)蛋白改變，能夠在癌基因的修復(fù)、細(xì)胞內(nèi)化療藥物的代謝及ATP泵的調(diào)控方面發(fā)揮作用，最終影響到一線化療方案的耐藥。鱗狀上皮癌抗原或者癌胚抗原能夠在NSCLC的診療過程中發(fā)揮作用，但鱗狀上皮細(xì)胞抗原或者癌胚抗原與NSCLC化療敏感性并無明確的關(guān)系[8]。臨床上尋找可靠而有效的復(fù)制化療評(píng)估指標(biāo)，能夠在NSCLC的化療結(jié)局的預(yù)測(cè)、化療方案的制定等方面發(fā)揮作用。本次研究通過對(duì)于NSCLC患者血清中IGFBP3、ERCC1的表達(dá)分析，能夠在揭示NSCLC病情進(jìn)展機(jī)理的同時(shí)，為臨床上NSCLC的診療提供定量化指標(biāo)。

IGFBP3是胰島素生長調(diào)控結(jié)合蛋白家族成員，其對(duì)于癌細(xì)胞膜上糖蛋白配體的阻斷作用，能夠避免癌細(xì)胞內(nèi)第二信使的激活，降低癌細(xì)胞的增殖活性。IGFBP3對(duì)于癌細(xì)胞周期的調(diào)控，能夠避免G1/S期細(xì)胞比例的紊亂，降低癌細(xì)胞的異常分裂的風(fēng)險(xiǎn)[9-10]；ERCC1是癌基因錯(cuò)配修復(fù)相關(guān)成員，其對(duì)于癌基因的切除過程，能夠避免癌基因累積誘導(dǎo)的癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增。ERCC1對(duì)于癌細(xì)胞內(nèi)囊泡體系的激活，能夠提高靜脈化療藥物的作用時(shí)間[11]。有部分研究者探討了IGFBP在肺癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為在肺癌患者中IGFBP蛋白的表達(dá)陽性率明顯上升[12]，但缺乏對(duì)于IGFBP3、ERCC1的表達(dá)與肺癌化療結(jié)局的關(guān)系分析。

對(duì)于肺癌患者外周血中IGFBP3、ERCC1蛋白的表達(dá)分析研究，發(fā)現(xiàn)在化療敏感組患者中，IGFBP3、ERCC1蛋白的表達(dá)濃度明顯高于化療不敏感組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，表明IGFBP3、ERCC1的高表達(dá)均能夠改善肺癌的化療結(jié)局，提高化療敏感性。這分析其原因，主要由于IGFBP3、ERCC1能夠影響到化療藥物的代謝半衰期，干預(yù)到化療藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)的時(shí)間，影響到了癌細(xì)胞膜上ATP泵的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程，最終影響到了化療敏感性[13-14]。有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺癌采用順鉑為基礎(chǔ)的化療過程中，ERCC1高表達(dá)的患者，其化療后病情部分緩解率或者完全緩解率可超過55%以上，同時(shí)患者病程越短、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比例越低，化療后肺癌病情改善的敏感程度越高[15]。在其他臨床病理特征的影響中，可以發(fā)現(xiàn)臨床分期的增加或者癌細(xì)胞的低分化，均能夠影響到NSCLC的化療敏感性，提示了一般性臨床特征對(duì)于NSCLC的化療結(jié)局的影響。這主要由于臨床分期的增加或者癌細(xì)胞低分化行為，能夠?qū)е掳┘?xì)胞生物學(xué)行為的惡化，加劇癌細(xì)胞對(duì)于化療藥物的排泄速度，影響到了一線靜脈化療方案的敏感性。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者腫瘤病理類型對(duì)于肺癌化療結(jié)局的影響，排除了癌細(xì)胞發(fā)生來源對(duì)于化療結(jié)局的影響。危險(xiǎn)因素分析也可見，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臨床上對(duì)于具有相關(guān)高危因素的患者，或者合并化療前IGFBP3、ERCC1明顯上升的患者，可以通過聯(lián)合二線化療方案或者靶向治療，從而改善NSCLC的化療結(jié)局。

綜上所述，IGFBP3、ERCC1蛋白水平的上升，能夠提高NSCLC一線化療方案的敏感性，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。