橙皮素調(diào)控miR‐182‐5p對口腔鱗癌BcaCD885細(xì)胞遷移和分泌IL‐6、IL‐8的影響

王超 馬旭亮 程瑞卿 張晶晶 楊莉（河北省眼科醫(yī)院口腔種植科，邢臺 054001）

口腔鱗癌是常見頭頸部惡性腫瘤，患病人群趨于年輕化，給人類的生命健康帶來巨大危害，雖然近些年關(guān)于口腔鱗癌的研究越來越多，但口腔鱗癌患者的生存率卻沒有得到明顯改善［1］?？谇击[癌的發(fā)生除了與癌細(xì)胞惡性生長、轉(zhuǎn)移有關(guān)以外，還與腫瘤微環(huán)境有關(guān)，腫瘤細(xì)胞能夠分泌炎癥因子，加快腫瘤進(jìn)程［2］。橙皮素是一種黃酮類的化合物，在花卉、水果、食品等物質(zhì)中廣泛存在，具有生物及藥理學(xué)活性［3］。橙皮素具有降低膽固醇、改善糖尿病腎病、治療痤瘡、保護(hù)神經(jīng)等功能［4］。有研究發(fā)現(xiàn)，橙皮素還具有抗腫瘤功效，體外能夠抑制結(jié)直腸癌、食管癌、前列腺癌等腫瘤細(xì)胞生長，對腫瘤細(xì)胞EMT、遷移和侵襲能力有抑制作用［5‐7］。對舌癌的研究顯示，橙皮素處理后的舌癌細(xì)胞增殖能力降低，細(xì)胞周期被阻滯［8］。目前尚不明確橙皮素對口腔鱗癌細(xì)胞遷移、侵襲、EMT以及分泌IL‐6、IL‐8的作用。miR‐182‐5p是一個與腫瘤有關(guān)的小分子RNA，在人體組織中具有多種生物學(xué)作用，其在口腔癌中表達(dá)上調(diào)，能夠誘導(dǎo)腫瘤進(jìn)展，miR‐182‐5p被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生過程中的促進(jìn)因子［9］。本次實驗探討橙皮素調(diào)控miR‐182‐5p對口腔鱗癌細(xì)胞遷移、侵襲、EMT以及分泌IL‐6、IL‐8的影響，為橙皮素治療口腔鱗癌的臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料橙皮素購自成都德思特生物技術(shù)有限公司；E‐cadherin抗體購自武漢艾美捷科技有限公司；N‐cadherin抗體購自美國Proteintech；IL‐8含量測定試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司；Vi-mentin抗體購自美國Santa Cruz Biotechnology；miR‐182‐5p mimics、mimics control購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；IL‐6含量測定試劑盒購自杭州賽基生物科技有限公司；MMP‐9抗體購自美國GeneTex。

1.2 方法

1.2.1 CCK‐8檢測橙皮素對口腔鱗癌BcaCD885細(xì)胞增殖的影響口腔鱗癌BcaCD885細(xì)胞接種到96孔板，接種密度為3 000個細(xì)胞/孔，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，將上清溶液棄掉，細(xì)胞分成2組，分別為Control組和Hesperidin組，Control組為0μmol/L橙皮素作用組，Hesperidin組又分成4個濃度梯度，分別為20、40、80、160 μmol/L橙皮素作用組，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)板取出，將孔中的液體吸棄，添加100 μl的細(xì)胞培養(yǎng)液和10 μl的CCK‐8溶液，均勻混合，置于37℃培養(yǎng)4 h。將酶標(biāo)儀波長調(diào)整為450 nm，檢測每個孔的OD值。常規(guī)方法計算細(xì)胞存活率。

1.2.2 Transwell小室檢測橙皮素對BcaCD885細(xì)胞遷移和侵襲的影響將Control組和Hesperidin組（40、80、160 μmol/L）BcaCD885細(xì)胞懸浮在不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中備用。細(xì)胞侵襲實驗前以基質(zhì)膠濕化小室，步驟如下：將基質(zhì)膠4℃融化，用不含血清的DMEM稀釋，每孔中加入100μl稀釋后的基質(zhì)膠，37℃孵育2 h。其余實驗步驟均相同，簡述如下：吸取細(xì)胞溶液添加到小室的上室中，每孔200μl，在下室中添加含有10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液500μl。置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。用棉簽把沒有穿膜的細(xì)胞擦掉，用4%的多聚甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色。在顯微鏡下計數(shù)細(xì)胞穿膜數(shù)目。

1.2.3 Western blot檢 測 橙 皮 素 對BcaCD885細(xì) 胞中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白表達(dá)的影響分別取培養(yǎng)24 h后的Control組和Hes-peridin組（40、80、160 μmol/L）BcaCD885細(xì)胞，用PBS洗滌，添加RIPA溶液（按照1∶100比例添加PMSF），置于冰上反應(yīng)5 min，快速振蕩10 s，重復(fù)該過程5次。4℃，10 000 g離心10 min。吸取上清溶液，分裝備用。按照BCA方法對蛋白濃度進(jìn)行分析。此次實驗選擇10%的分離膠和5%的濃縮膠進(jìn)行SDS‐PAGE電泳。在蛋白樣品中添加2×Loading Buffer溶液，放在100℃孵育5 min。每孔中添加40μg的蛋白樣品，首先以70 V的電壓電泳30 min，然后換成100 V繼續(xù)電泳1.5 h。將NC膜按照凝膠的大小進(jìn)行裁剪，以300 mA的恒流轉(zhuǎn)膜90 min。將NC膜放在5%牛血清白蛋白溶液中，室溫結(jié)合2 h。將NC膜放在1∶1 000稀釋后的一抗溶液中，4℃環(huán)境中結(jié)合過夜。再將NC膜放在1∶4 000稀釋后的二抗溶液中，室溫結(jié)合1 h。采用ECL化學(xué)發(fā)光顯色液進(jìn)行顯影。Im-age J分析條帶的灰度值，以β‐actin作為內(nèi)參，分析目的蛋白相對表達(dá)變化。

1.2.4 ELⅠSA法檢測橙皮素對BcaCD885細(xì)胞分泌ⅠL‐6、ⅠL‐8的影響分別取培養(yǎng)24 h后的Control組和Hesperidin組（40、80、160μmol/L）BcaCD885細(xì)胞培養(yǎng)液上清，以ELISA法檢測IL‐6、IL‐8水平，步驟分別參照IL‐6、IL‐8含量測定試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.5 qRT‐PCR法檢測橙皮素對BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p表達(dá)的影響分別取培養(yǎng)24 h后的Control組 和Hesperidin組（40、80、160 μmol/L）BcaCD885細(xì)胞，按照107個細(xì)胞中添加1 ml的Trizol試劑分別提取細(xì)胞中的總RNA。用滅菌的雙蒸水調(diào)節(jié)紫外分光光度計的準(zhǔn)確性，添加樣品，檢測OD260/OD280的比值（在1.8～2.0之間）。利用PrimeScript RT reagent Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，取1 μg的RNA，加 入2 μl的gDNA Eraser Buffer、1 μl的gDNA Eraser，最后添加RNase Free water至10 μl，42℃孵育2 min，4℃孵育5 min，繼續(xù)在上述溶液中加入1 μl的PrimeScript RT Enzyme mixⅠ、4 μl的5×PrimeScript Buffer 2、1 μl的RT Primer mix、10 μl的Reaction solution，最后添加RNase Free water至30μl，放在37℃孵育15 min，85℃孵育5 s，4℃?zhèn)溆谩Ｒ許YBR Premix Ex TaqⅡ進(jìn)行PCR反應(yīng)，取2 μl的cDNA，加 入0.5 μl的Reverse primer和Forward primer、5 μl的SYBR Green PCR Master mix，添 加RNase Free water至10 μl，95℃孵育10 s，55℃孵育30 s，72℃孵育30 s。U6為內(nèi)參，按照2-ΔΔCT法計算miR‐182‐5p的表達(dá)水平。miR‐182‐5p F：5′‐GGGT‐TTGGCAATGGTAGAACTCA‐3′，R：5′‐CCAGTGA‐CGGGTCCGAGGT‐3′；U6 F：5′‐CTCGCTTCGAGCG-CACA‐3′，R：5′‐AACGTTTCACGAATTTGCGT‐3′。

1.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及逆轉(zhuǎn)作用BcaCD885細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染miR‐182‐5p mimics、mimics control（轉(zhuǎn)染步驟參照轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000進(jìn)行），然后用含80 μmol/L橙皮素細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，記為Hes-peridin+miR‐182‐5p和Hesperidin+miR‐NC組，分別測定細(xì)胞增殖（步驟參照1.2.1中CCK‐8法）、遷移、侵襲（步驟參照1.2.2中Transwell小室法）和E‐cad-herin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白表達(dá)（步驟參照1.2.3中Western blot法）以及細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8水平（步驟參照1.2.4中ELISA法）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS21.0分析統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)，以±s表示，兩組數(shù)據(jù)間比較使用t檢驗，多組差異比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 橙皮素對BcaCD885細(xì)胞增殖的影響與0 μmol/L橙皮素處理的Control組比較，20 μmol/L橙皮素處理后的BcaCD885細(xì)胞存活沒有變化，而40、80、160 μmol/L橙皮素處理后的細(xì)胞存活率降低，選擇40、80、160 μmol/L橙皮素進(jìn)行后續(xù)實驗。見表1。

2.2 橙皮素對BcaCD885細(xì)胞遷移、侵襲和EMT的影響與0μmol/L橙皮素處理的Control組比較，40、80、160 μmol/L橙皮素處理后的細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目依次降低，細(xì)胞中E‐cadherin蛋白表達(dá)水平依次升高，細(xì)胞中Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白水平依次降低。橙皮素抑制口腔鱗癌BcaCD885細(xì)胞遷移、侵襲和EMT。見圖1和表2。

2.3 橙皮素對BcaCD885細(xì)胞分泌ⅠL‐6、ⅠL‐8的影響與0 μmol/L橙皮素處理的Control組比較，40、80、160μmol/L橙皮素處理后的細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8依次減少。橙皮素抑制BcaCD885細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8。見表3。

2.4 橙皮素對BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p表達(dá)的影響與0μmol/L橙皮素處理的Control組比較，40、80、160μmol/L橙皮素處理后的細(xì)胞中miR‐182‐5p水平依次減少。橙皮素下調(diào)BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p的表達(dá)水平。見表4。

表1 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞存活率(±s)Tab.1 Survival rate of BcaCD885 cells treated with hes-peretin(±s)

表1 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞存活率(±s)Tab.1 Survival rate of BcaCD885 cells treated with hes-peretin(±s)

Note：Compared with Control，1）P＜0.05.

Groups Survival rate（%）100.00±9.52 96.32±8.21 80.23±6.941）68.52±5.111）50.31±4.281）20.068＜0.001 Control Hesperidin Hesperetin concentra-tion（μmol/L）0 20 40 80 160 F P

圖1 Western blot檢測橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白水平Fig.1 Western blot detection of E‐cadherin，Vimentin，N‐cadherin and MMP‐9 protein levels in BcaCD885 cells treated with hesperetin

表2 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞遷移數(shù)目、侵襲數(shù)目和E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白水平(±s)Tab.2 Number of migration，invasion and protein levels of E‐cadherin，Vimentin，N‐cadherin and MMP‐9 of CD885 cells after hesperetin treatment(±s)

Note：Compared with Control，1）P＜0.05；compared with 40μmol/L，2）P＜0.05；compared with 80μmol/L，3）P＜0.05.

Groups Number of migrations Number of invasion E‐cadherin Vimentin N‐cadherin MMP‐9 0.68±0.08 0.50±0.061）0.36±0.031）2）0.24±0.041）2）3）103.200＜0.001 Control Hesperidin Hesperetin concentration（μmol/L）0 40 80 160 F P 186.63±17.45 163.22±14.171）126.89±10.201）2）90.10±8.851）2）3）93.600＜0.001 152.32±13.56 127.41±10.131）88.39±7.551）2）63.11±3.261）2）3）160.641＜0.001 0.23±0.02 0.30±0.031）0.42±0.041）2）0.53±0.041）2）3）140.267＜0.001 0.60±0.06 0.49±0.051）0.35±0.031）2）0.22±0.021）2）3）133.135＜0.001 0.55±0.04 0.38±0.031）0.30±0.021）2）0.20±0.031）2）3）207.395＜0.001

表3 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8水平(±s)Tab.3 Levels of IL‐6 and IL‐8 secreted by BcaCD885 cells after hesperetin treatment(±s)

表3 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8水平(±s)Tab.3 Levels of IL‐6 and IL‐8 secreted by BcaCD885 cells after hesperetin treatment(±s)

Note：Compared with Control，1）P＜0.05；compared with 40 μmol/L，2）P＜0.05；Compared with 80μmol/L，3）P＜0.05.

Groups IL‐6（ng/ml）IL‐8（ng/ml）0.56±0.05 0.43±0.031）0.34±0.041）2）0.26±0.031）2）3）101.034＜0.001 Control Hesperidin Hesperetin con-centration（μmol/L）0 40 80 160 F P 0.42±0.05 0.34±0.031）0.27±0.021）2）0.22±0.021）2）3）74.786＜0.001

表4 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p的水平(±s)Tab.4 Level of miR‐182‐5p BcaCD885 cells after hesper-etin treatment(±s)

表4 橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p的水平(±s)Tab.4 Level of miR‐182‐5p BcaCD885 cells after hesper-etin treatment(±s)

Note：Compared with Control，1）P＜0.05；compared with 40μmol/L，2）P＜0.05；compared with 80μmol/L，3）P＜0.05.

miR‐182‐5p level 1.00±0.11 0.68±0.051）0.50±0.041）2）0.41±0.031）2）3）142.789＜0.001 Groups Control Hesperidin Hesperetin concentra-tion（μmol/L）0 40 80 160 F P

表5 miR‐182‐5p mimics轉(zhuǎn)染和橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p水平、細(xì)胞存活率、遷移數(shù)目、侵襲數(shù)目和E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白水平以及細(xì)胞分泌的IL‐6、IL‐8水平(±s)Tab.5 miR‐182‐5p level，cell survival rate，migration number，invasion number and E‐cadherin，Vimentin，N‐cadherin，MMP‐9 in BcaCD885 cells after miR‐182‐5p mimics transfection and hesperetin treatment protein level and IL‐6 and IL‐8 levels secreted by cells(±s)

表5 miR‐182‐5p mimics轉(zhuǎn)染和橙皮素處理后BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p水平、細(xì)胞存活率、遷移數(shù)目、侵襲數(shù)目和E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白水平以及細(xì)胞分泌的IL‐6、IL‐8水平(±s)Tab.5 miR‐182‐5p level，cell survival rate，migration number，invasion number and E‐cadherin，Vimentin，N‐cadherin，MMP‐9 in BcaCD885 cells after miR‐182‐5p mimics transfection and hesperetin treatment protein level and IL‐6 and IL‐8 levels secreted by cells(±s)

Note：Compared with Hesperidin+miR‐NC，1）P＜0.05.

Groups E‐cadherin Vimentin N‐cadherin MMP‐9 Hesperidin+miR‐NC Hesperidin+miR‐182‐5p t P miR‐182‐5p level 1.00±0.12 2.15±0.251）12.441＜0.001 Survival rate（%）100.00±11.63 186.94±17.491）12.418＜0.001 Number of migrations 125.42±11.36 147.20±10.021）4.314＜0.001 Number of invasion 87.96±6.33 114.85±9.621）7.005＜0.001 0.40±0.05 0.29±0.021）6.128＜0.001 0.32±0.02 0.41±0.041）6.037＜0.001 0.31±0.03 0.46±0.051）7.717＜0.001 0.35±0.04 0.51±0.071）5.954＜0.001 IL‐6（ng/ml）0.24±0.03 0.30±0.021）4.992＜0.001 IL‐8（ng/ml）0.32±0.03 0.40±0.041）4.800＜0.001

2.5 上調(diào)miR‐182‐5p對橙皮素調(diào)控BcaCD885細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、EMT和分泌ⅠL‐6、ⅠL‐8的影響與Hesperidin+miR‐NC組比較，Hesperidin+miR‐182‐5p組BcaCD885細(xì)胞中miR‐182‐5p水平升高，細(xì)胞存活率、遷移數(shù)目、侵襲數(shù)目均升高，細(xì)胞中E‐cad-herin蛋白表達(dá)水平減少，Vimentin、N‐cadherin、MMP‐9蛋白表達(dá)水平升高，細(xì)胞分泌的IL‐6、IL‐8增多。見表5和圖2。

圖2 Western blot檢 測BcaCD885細(xì) 胞E‐cadherin、Vi-mentin、N‐cadherin和MMP‐9蛋白水平Fig.2 Western blot detection of E‐cadherin，Vimentin，N‐cadherin and MMP‐9 protein level in BcaCD885 cells

3 討論

橙皮素廣泛存在于自然界中的多種物質(zhì)如水果、花卉，具有抗氧化、消炎、降血壓等功效，對動脈粥樣硬化、肺組織損傷等具有治療作用［10］。有研究顯示，橙皮素具有抗腫瘤作用，對結(jié)腸癌細(xì)胞遷移和侵襲有抑制作用，橙皮素治療后的宮頸癌細(xì)胞EMT水平降低，細(xì)胞增殖能力降低［5，11］。在舌癌研究中發(fā)現(xiàn)橙皮素能夠體外抑制舌癌細(xì)胞增殖，具有抗舌癌作用［8］。本實驗顯示，橙皮素處理后的口腔鱗癌細(xì)胞的增殖能力降低，說明橙皮素能夠在體外抑制口腔鱗癌細(xì)胞的生長，這與之前的研究結(jié)果相一致。

腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個十分復(fù)雜的過程，不僅與細(xì)胞內(nèi)多種基因的異常表達(dá)調(diào)控有關(guān)，還與腫瘤微環(huán)境有關(guān)［12‐13］。腫瘤細(xì)胞從原來的位置脫落以后，通過降解細(xì)胞外基質(zhì)，遷移、侵襲至新的組織，形成新的病發(fā)灶，腫瘤細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)依賴于細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，其中基質(zhì)金屬蛋白酶的作用極為關(guān)鍵，MMP‐9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，其在腫瘤中表達(dá)上調(diào)，能夠促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移［14］。EMT是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的早期標(biāo)志，EMT是指上皮細(xì)胞特征逐漸消失而表現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞特征的過程［15］。Vimen-tin、N‐cadherin是間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白，在腫瘤中過度表達(dá)；E‐cadherin是上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白，在腫瘤中表達(dá)下調(diào)；Vimentin、N‐cadherin表達(dá)水平升高而E‐cadherin表達(dá)水平降低被認(rèn)為是EMT的標(biāo)志［16‐17］。腫瘤微環(huán)境是近年來的研究熱點，包括眾多細(xì)胞因子、免疫因子等，IL‐6、IL‐8是在口腔鱗癌中表達(dá)上調(diào)的促炎因子，口腔鱗癌細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8增多能夠促進(jìn)癌癥轉(zhuǎn)移［18‐19］。研究顯示，橙皮素處理后的結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞遷移和侵襲能力降低，細(xì)胞中的MMP‐9水平下降［5］。在宮頸癌中亦發(fā)現(xiàn)，橙皮素提高腫瘤細(xì)胞中E‐cadherin表達(dá)水平，抑制細(xì)胞EMT［8］。本實驗發(fā)現(xiàn)，橙皮素處理后的口腔鱗癌細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目減少，細(xì)胞中Vimentin、N‐cad-herin、MMP‐9蛋白表達(dá)水平降低，E‐cadherin蛋白表達(dá)水平升高，說明橙皮素抑制口腔鱗癌細(xì)胞遷移、侵襲和EMT，這與其他研究結(jié)果相符，均說明橙皮素在腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為中的抑制功效。同時本研究還顯示，橙皮素能通過減少細(xì)胞分泌IL‐6、IL‐8而發(fā)揮抑制口腔鱗癌轉(zhuǎn)移的功能。

雖然已經(jīng)有很多研究發(fā)現(xiàn)橙皮素具有抗腫瘤作用，但目前對橙皮素抗腫瘤的作用機(jī)制尚不明確。本實驗發(fā)現(xiàn)，橙皮素處理后的口腔鱗癌細(xì)胞中miR‐182‐5p表達(dá)水平降低，橙皮素作用機(jī)制可能與miR‐182‐5p有關(guān)。miR‐182‐5p定位在人類第7號染色體上，其首次發(fā)現(xiàn)于小鼠眼組織，參與視力、聽力的發(fā)育，與脂肪肝、腫瘤等病理過程有關(guān)［20‐22］。miR‐182‐5p在腫瘤中表達(dá)上調(diào)，并且參與腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移過程。在口腔鱗癌中的實驗發(fā)現(xiàn)，miR‐182‐5p表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，反 之，下 調(diào)miR‐182‐5p能 抑 制 腫 瘤 細(xì) 胞惡 性 表型［9，23］。本實驗顯示，上調(diào)miR‐182‐5p能夠逆轉(zhuǎn)橙皮素對口腔鱗癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、EMT和分泌IL‐6、IL‐8的影響，這說明橙皮素通過下調(diào)miR‐182‐5p參與口腔鱗癌進(jìn)展。

綜上所述，橙皮素通過下調(diào)miR‐182‐5p表達(dá)而抑制口腔鱗癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、EMT和分泌IL‐6、IL‐8，這為橙皮素治療口腔鱗癌的臨床應(yīng)用提供了理論資料，為研究橙皮素抗腫瘤分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。本研究尚未分析橙皮素通過何種靶向機(jī)制影響口腔鱗癌進(jìn)展，且沒有在多株口腔鱗癌細(xì)胞中進(jìn)行驗證，我們將在后續(xù)實驗中對這部分內(nèi)容進(jìn)行探討。