不同廠家前列地爾注射液質量比較研究

周 楊，曾 輝

前列地爾（PGE1）系外源性前列腺素E1，存在于不同種屬哺乳動物的組織和體液中，對血管、呼吸道、 消化道和生殖器官平滑肌具有明顯的作用，對血小板、中樞和外周神經系統也有顯著的影響［1-3］。PGE1通過直接擴張血管和抑制血小板聚集，增加血流量，改善微循環(huán)。 該藥臨床應用以注射液為主，靜脈注射用于擴張動脈血管時，30 min 起效， 在血漿中主要與白蛋白結合， 流經肺部一次， 即有70%～90%被代謝， 母體化合物消除半衰期為5～10 min，代謝產物在24 h 內完全隨尿排出［4-8］。 因其最初凍干粉型半衰期短，經肺循環(huán)迅速代謝，臨床給藥方式主要為靜脈滴注，但是滴注持續(xù)時間長，不良反應明顯，包括：頭痛、食欲減退、注射局部紅腫熱痛。隨著藥物制劑新技術與新劑型的發(fā)展，微載體藥物遞送技術廣泛應用于藥物劑型開發(fā)中，提高了藥物的穩(wěn)定性，使藥物濃集于靶區(qū)，提高療效，降低了不良反應［9，10］。 目前市售的前列地爾注射液有脂質乳和脂微球兩種。 其中一個廠家（F 廠）生產前列地爾脂質乳，另五個廠家生產前列地爾脂微球。 參考國家藥品標準［WS1-（X-041）-2002Z-2008］，對市售的六廠家前列地爾注射液進行對比分析（表1），考察其質量差異，為臨床安全用藥提供數據支持。

1 材 料

1.1 試劑 前列地爾對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號140659-201704）；前列腺素A1（Sigma，批號178k1721）； 磷 脂 酰 膽 堿 對 照 品 （SIGMAALDRICH，批 號：SLBH3672V）；β-萘酚（Fluka，批號：STBB9766V），乙腈、甲醇和無水乙醇均為色譜純（Merck）；其余試劑均為分析純。

表1 六種市售前列地爾注射液樣品信息表

1.2 儀器 高效液相色譜儀（LC-10ATVP）；動態(tài)光散射粒度分析儀 （Nicomp 380）； 高速離心機（Eppendorf，centrifuge 5804R）；DU730 紫外可見分光光度計（美國 Beckman），Stratos 高速離心機（美國Thermo），BS21S 分析天平（德國Sartorius）。

2 方 法

2.1 性狀 外觀目視檢查：注射液外包裝、顏色及是否存在變質或其他物理變化的跡象。

2.2 pH 值 參照 《中國藥典》2015 版四部通則0631 測定。

2.3 乳粒 取各個廠家的前列地爾供試品0.1 ml于100 ml 容量瓶中，加水（預先使用0.22 μm 濾膜過濾），搖勻，取出1 ml 于50 ml 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線， 用動態(tài)激光散射粒徑測定法測定。

2.4 過氧化值 取前列地爾供試品溶液5.00 ml，參照2015 版《中國藥典》四部通則0713 檢查。

2.5 游離脂肪酸 參照2015 版《中國藥典》四部通則0701 電位滴定法測定。

2.6 溶血磷脂酰膽堿 參照2015 版《中國藥典》四部通則0512 高效液相色譜法測定。 精密量取本品1 ml，置25 ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（配 制后2 h 內進樣）；精密稱取溶血磷脂酰膽堿對照品適量，加甲醇溶解制成每1 ml 中含0.18 mg 的溶液，精密量取5 ml，置于25 ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取上述對照品溶液與供試品溶液各20 μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

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2.7 前列腺素A1（PGA1） 稱取前列腺素A12.50 mg于25 ml 棕色容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，得前列腺素A1對照品貯備液。 取貯備液5.00 ml，于25 ml 容量瓶中，加流動相稀釋定容，取5.00 ml 與內標貯備液5.00 ml，加流動相定容至50 ml，得前列腺素A1對照品溶液。 取“2.10.1”項下的供試品溶液，照“2.10.2”項下的方法測定，按內標法以峰面積計算前列腺素A1含量。

2.8 可見異物 參照2015 版《中國藥典》四部通則0904 可見異物檢測。

2.9 不溶性微粒 參照2015 版《中國藥典》四部通則0903 不溶性微粒檢查法測定。

2.1 0 含量測定

2.1 0 .1 溶液的制備 稱取β-奈酚25.21 mg 于50 ml容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，精密量取5.00 ml于50 ml 量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，搖勻，作為內標貯備液。 貯備液稀釋10 倍得內標溶液。

稱取前列地爾對照品10.24 mg， 置50 ml 棕色容量瓶中，加無水乙醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液5 ml 于50 ml 棕色容量瓶，加流動相定容至刻度線，搖勻，得對照品儲備液。 取對照品儲備液1.00 ml 置10 ml 棕色容量瓶中，加無水乙醇定容，量取5.00 ml 與內標貯備液5.00 ml，置50 ml 容量瓶中，加流動相稀釋定容，得對照品溶液。

精密量取注射液0.5 ml 置于20 ml 棕色容量瓶中，加入四氫呋喃2.50 ml，混勻，加15.00 ml 磷酸溶液（1∶1000），混勻。 采用Merck LiChroCART○RRP-18e 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）為預處理柱，供試品容量瓶用10 ml 水沖洗并通過預處理柱， 用甲醇1.5 ml/min 進行洗脫， 收集洗脫液于棕色蒸餾瓶中，減壓（50 ℃）蒸餾，蒸干溶劑，殘渣加1.00 ml 內標溶液溶解，搖勻，得供試品溶液。

2.1 0 .2 色譜條件 采用Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）為分析柱，流動相為6.7 mmol/L 磷酸二氫鉀緩沖液（取磷酸二氫鉀9.07 g，加水1.0 L，用0.05 mol/L 氫氧化鈉溶解調節(jié)pH=6.3）－乙腈（3∶1），流速1.0 ml/min，λ=278 nm，柱溫60 ℃。 柱后反應液為1 mol/L 氫氧化鉀溶液， 流速0.5 ml/min，柱后反應管為聚四氟乙烯管（φ0.5 mm×10 m）；進樣量20 μl。 按內標法以峰面積計算含量。 （系統適用性見圖1、圖2）

圖1 前列地爾對照品溶液

圖2 供試品溶液

3 結 果

3.2 pH 六廠家樣品pH 均在5.0～6.0。

3.3 乳粒 粒徑檢查標準，平均粒徑（mean particle size，MPS）為0.12~0.28 μm 和90%乳粒粒徑（cumulative particle size，CPS） 應<0.35 μm。 檢查結果顯示，六種產品的平均粒徑以及<0.35 μm 乳粒例子數都符合限度要求，但F 廠家的平均粒徑顯著低于其他五廠家。

3.4 過氧化值 六廠家產品過氧化值均符合規(guī)定，其中F 廠家的過氧化值最低，其次是A，B 和D 廠。

3.5 溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺 六廠家前列地爾平均溶血磷脂酰膽堿（lysophosphatidylch-oline，LPC）F 廠家LPC 最低，B 廠家LPC 相對較低；平均溶血磷脂酰乙醇胺（lysophosphatidyl ethanolamine，LPE）F 廠家LPE 最低。 見表2。

3.6 其他檢測項 六廠家產品的性狀、pH 值、游離脂肪酸、可見異物和不溶性微粒均符合規(guī)定，詳見表2。

表2 6 種市售前列地爾注射液質量對比結果

4 討 論

前列地爾為國家第一批重點監(jiān)控藥品品種，臨床運用廣泛，在心血管方面，治療冠心病、心絞痛、心肌和腦梗死等疾?。辉谙到y方面，運用于重癥肝炎、慢性胃炎、急性胰腺炎和缺血性腸炎等；在泌尿系統方面，治療腎病和勃起功能障礙；在呼吸系統方面，運用于支氣管哮喘、肺心病和肺動脈高壓；還用于治療糖尿病并發(fā)癥、提高斷指再植的成活率和圍術期心腦肺保護等［11-14］。 因臨床上該品種使用量大， 市面上售出的前列地爾制劑品種也多。該文就四川藥品采購平臺銷售的六種具有靶向作用的前列地爾注射液作為研究對象，對其質量進行分析比較。

脂肪乳乳粒的粒徑在0.12~0.28 μm 范圍內，乳?？梢员３州^好的物理穩(wěn)定性，便于吸收。 乳粒大小不均勻， 容易導致乳滴合并，>3.5 μm 的粒子過多，還可能被內皮系統的免疫細胞吞噬，造成氧化反應和組織損傷［15-18］。因此在質量檢測中，乳粒大小和比例與穩(wěn)定性和安全性息息相關，直接反映廠家的乳化工藝。 從實驗結果來看，F 廠家乳粒粒徑最小， 而其中乳粒粒徑>3.5 μm 的粒子數各廠家差異不大。F 廠家粒徑比其他廠家的小，可能與F 廠家注射液為脂質乳有關，其結構為乳狀囊泡結構，而其余五廠家的脂微球具有較強的膜結構， 膜邊界清晰，兩者的處方中卵磷脂含量不同［19，20］。

游離脂肪酸通常由原材料（油酸、磷脂等）引入和產品制備 （高溫滅菌過程）、 存儲過程中三酰甘油、磷脂水解引入，不過對于產品配方不同，游離脂肪酸的起始值差異大［20］。 脂質乳處方大豆油和油酸含量較高，一方面能夠提高載藥量，另一方面，由于其油酸帶有負電荷， 有利于增加乳滴間的靜電斥力，使乳劑不容易聚集和絮凝，從而提高乳劑的穩(wěn)定性。

前列地爾注射液處方中含有卵磷脂，在產品的制備和貯藏過程中，磷脂會發(fā)生部分分解生成溶血LPC 和LPE，在機體內溶血磷脂酶D（lysophosphatidase，LPD）的作用下產生溶血磷脂酸（lysophosphatidicacid，LPA），該物質會引起紅細胞及其他細胞膜破裂，引起溶血或細胞壞死［10］。 因此，對前列地爾注射液的LPC 和LPE 進行嚴格的控制， 保證產品質量。 實驗結果發(fā)現，LPC 含量：F 廠

綜上所述， 該研究對不同廠家前列地爾制劑LPC、含量及有關物質等各指標對比研究，六個廠家生產的前列地爾注射液性狀、pH 值、粒徑、過氧化值、游離脂肪酸、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、可見異物、不溶性微粒、PGA1 和PGE1 的含量均符合規(guī)定。 但在粒徑和LPC、LPE 含量等安全性方面存在一定差異，需要繼續(xù)在原輔料、處方和制劑工藝等方面進行改進，滿足臨床安全用藥的要求。