乳腺癌超聲征象與CRP、VEGF-C、CD34表達(dá)的相關(guān)性研究

張愛(ài)紅，趙曉歡，申國(guó)升

(衡水市中醫(yī)醫(yī)院功能科，河北 衡水 053000)

近年來(lái)，乳腺癌患者的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)[1]。有研究報(bào)道，乳腺癌的發(fā)病率在全球腫瘤疾病中居首位[2]。目前認(rèn)為乳腺癌的危險(xiǎn)因素主要包括家族史、遺傳、生殖因素、不良生活習(xí)慣以及乳腺增生性疾病[3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015年中國(guó)乳腺癌發(fā)病病例約有26.9萬(wàn)，死亡病例7.0萬(wàn)，分別占女性腫瘤發(fā)病的15%和死亡的7%，嚴(yán)重威脅著女性的健康[4]。乳腺癌患者的臨床分型主要包括團(tuán)塊型、結(jié)節(jié)型、導(dǎo)管型、囊腫型、彌漫型等。多普勒超聲檢查是臨床診斷乳腺癌的重要方法之一，不同的乳腺癌類型具有特異的超聲影像學(xué)特征[5-6]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)與腫瘤患者的淋巴管生成以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)在炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[7]。免疫組織化學(xué)分子CD34對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)具有一定提示作用[8]。本研究主要分析乳腺癌超聲征象與CRP、VEGF-C、CD34表達(dá)的相關(guān)性，為乳腺癌的診斷以及預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2019年5月于衡水市中醫(yī)醫(yī)院就診的120例乳腺癌患者為乳腺癌組，年齡35～49歲，平均(42.9±2.3)歲；體質(zhì)指數(shù)23～24 kg/m2，平均(23.7±3.0)kg/m2；腫瘤類型：浸潤(rùn)性小葉癌16例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌89例，黏液腺癌15例；腫瘤轉(zhuǎn)移情況：腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，未轉(zhuǎn)移61例；腫瘤最大徑≥2 cm 62例，最大徑<2 cm 58例。選取同期健康體檢者120例作為正常對(duì)照組，年齡34～48歲，平均(42.4±2.1)歲；體質(zhì)指數(shù)23～25 kg/m2，平均(23.4±3.5)kg/m2。兩組受試者的年齡、體質(zhì)指數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲得衡水市中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①乳腺癌患者均經(jīng)病理學(xué)診斷符合《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)》[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②乳腺癌患者為首次發(fā)??；③正常對(duì)照組的血細(xì)胞計(jì)數(shù)、肝腎功能、血脂等均正常；④乳腺癌患者的病理分期為Ⅱ～Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)?fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者；②乳腺急性炎癥期患者；③具有精神疾病或存在認(rèn)知功能障礙者；④合并其他類型惡性腫瘤者。

1.3方法

1.3.1超聲檢查 兩組患者分別進(jìn)行乳腺超聲檢查，采用超聲儀(荷蘭PHILIP，HDI3000)進(jìn)行掃描，超聲頻率設(shè)定為5～12 MHz，囑患者取平臥位，首先對(duì)患者的乳頭、乳暈進(jìn)行掃描，其次按照由內(nèi)而外、自上而下的順序進(jìn)行乳腺掃描，觀察乳腺病灶部位的大小、邊界、鈣化以及血流情況。同時(shí)分析血流分級(jí)以及動(dòng)力學(xué)參數(shù)最大流速(maximum velocity，Vmax)和阻力指數(shù)(resistance index，RI)。依據(jù)Adler半定量方法進(jìn)行血流特征分級(jí)：病灶內(nèi)未發(fā)現(xiàn)血流信號(hào)為0級(jí)；病灶部位有1～2處點(diǎn)狀出血點(diǎn)為Ⅰ級(jí)；病灶部位發(fā)現(xiàn)1條主要血管，2～3條小血管，中量血流信號(hào)為Ⅱ級(jí)；患者病灶內(nèi)發(fā)現(xiàn)4條以上血管并相互貫通為Ⅲ級(jí)[10]。超聲分別由兩名高年資住院醫(yī)共同檢測(cè)。

超聲造影檢查：完成以上超聲檢查后，切換為低機(jī)械指數(shù)造影模式，在患者平靜呼吸狀態(tài)下，經(jīng)肘靜脈注射1.5 mL微泡混懸液，在120 s內(nèi)完成超聲影像獲取。分別計(jì)算峰值強(qiáng)度(maximum intensity，Imax)、達(dá)峰時(shí)間(time to peak，TTP)、平均渡越時(shí)間(mean transfer time，mTT)、Imax/TTP以及流出時(shí)間(washout time，WT)。

1.3.2CRP、VEGF-C、CD34檢測(cè) 兩組患者均采集肘靜脈血4 mL，以離心半徑15 cm，3 500 r/min離心15 min，離心溫度設(shè)定為18～26 ℃，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)CRP水平，CRP試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)免疫生物有限公司(批號(hào)：20160322)，操作流程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。

對(duì)乳腺癌患者的病灶部位以及病灶2～3 cm外的癌旁組織進(jìn)行活組織檢查，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF-C以及CD34，人VEGF-C以及CD34多克隆抗體試劑購(gòu)自上海羅氏制藥有限公司(批號(hào)：20160311、20160103)，腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒物質(zhì)，且染色細(xì)胞比例5%～50%為VEGF-C、CD34陽(yáng)性，染色細(xì)胞比例50%以上為VEGF-C、CD34強(qiáng)陽(yáng)性[8]。

1.4觀察指標(biāo) ①分析乳腺癌患者的超聲特征，包括邊界清晰程度、內(nèi)部鈣化情況以及內(nèi)部血流信號(hào)。②比較兩組Imax、TTP、mTT、Imax/TTP、WT及CRP水平的差異。③比較乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34的陽(yáng)性表達(dá)情況。④分析乳腺癌患者超聲特征指標(biāo)與CRP、VEGF-C、CD34表達(dá)的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1乳腺癌患者的超聲特征分析 乳腺癌患者的超聲影像學(xué)特征分析顯示，邊界清晰54例，邊界不清或存在毛刺66例，內(nèi)部鈣化49例。乳腺癌患者血流信號(hào)主要以Ⅱ～Ⅲ級(jí)為主，見(jiàn)圖1。

圖1 乳腺癌患者的超聲特征(1a為超聲模式，1b為血流模式)

2.2兩組超聲特征和CRP水平比較 乳腺癌組患者血流分級(jí)Ⅱ～Ⅲ級(jí)的比例、Vmax、Imax及CRP水平高于正常對(duì)照組，RI、Imax/TTP、WT低于正常對(duì)照組(P<0.01)；兩組mTT、TTP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34陽(yáng)性表達(dá)的比較 乳腺癌患者癌組織VEGF-C、CD34陽(yáng)性表達(dá)比例顯著高于癌旁組織(P<0.01)，見(jiàn)圖2、表2。

VEGF-C：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C:2a：癌組織VEGF-C陽(yáng)性；2b:癌旁組織VEGF-C陽(yáng)性；2c:癌組織CD34陽(yáng)性;2d:癌旁組織CD34陽(yáng)性

表2 乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34陽(yáng)性表達(dá)的比較 [例(%)]

2.4乳腺癌患者超聲指標(biāo)與CRP、VEGF-C、CD34的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，乳腺癌患者超聲血流分級(jí)、Vmax、Imax與CRP、VEGF-C、CD34的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)，超聲RI、Imax/TTP、WT與CRP、VEGF-C、CD34的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 乳腺癌患者超聲指標(biāo)與CRP、VEGF-C、CD34的相關(guān)性分析

3 討 論

乳腺癌早期癥狀不典型，當(dāng)患者因臨床癥狀就診時(shí)，多數(shù)已失去最佳治療機(jī)會(huì)，所以進(jìn)行早期識(shí)別、早期干預(yù)、早期治療具有重要的臨床意義，且早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌的惡變對(duì)于患者的治愈具有重要影響。早期識(shí)別干預(yù)乳腺癌患者的良惡性可以提高患者的生命質(zhì)量，顯著降低50～69歲女性患者的死亡率。研究顯示，腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展與新生血管的形成密切相關(guān)[11]。有研究顯示，腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展主要取決于腫瘤細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的獲取量[12-13]。

以往研究顯示，CD34主要存在于內(nèi)皮細(xì)胞，與內(nèi)皮細(xì)胞有效結(jié)合后，可顯著增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的化學(xué)趨化性[14]。CD34通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂與出芽生長(zhǎng)，使新生血管形成，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。在乳腺癌的進(jìn)展過(guò)程中，VEGF-C水平較低提示腫瘤組織的血供較差，腫瘤組織的生長(zhǎng)速度減緩或出現(xiàn)壞死；在乳腺組織的增殖過(guò)程中，腫瘤的血供受多種因子以及環(huán)境因素的影響[15]。對(duì)乳腺癌組織分子水平的研究顯示，乳腺癌組織的微血管變化與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、Tat作用蛋白30、Toll樣受體4、缺氧誘導(dǎo)因子-1α顯著相關(guān)[16]；乳腺癌的疾病進(jìn)展除受微血管的影響外，還與病灶部位的炎癥反應(yīng)水平有關(guān)，而腫瘤細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用間接影響CPR水平[17-18]。

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，乳腺癌組血流分級(jí)Ⅱ～Ⅲ級(jí)的比例、Vmax、Imax及CRP水平升高，RI、Imax/TTP、WT降低。有研究認(rèn)為，在乳腺癌病灶部位，隨著患者的局部毛細(xì)血管密度的降低，其血流速度以及血流分級(jí)情況顯著下降，血供不足，對(duì)病灶部位的腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、增殖以及分化有顯著抑制作用，提示腫瘤病灶部位血供不足對(duì)治療效果的評(píng)價(jià)具有重要作用[19]。有研究報(bào)道，乳腺癌患者血流信號(hào)與治療效果顯著相關(guān)，隨著病灶部位血流信號(hào)的顯著下降，治療效果顯著提升，腫瘤的遠(yuǎn)處播散風(fēng)險(xiǎn)也隨之下降[20]。

VEGF-C主要反映患者病灶部位的血管密集程度。有研究指出，乳腺癌患者病灶部位腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移甚至惡化均與血管密度顯著相關(guān)[21]。隨著病灶部位血管密度的增加，其惡化程度以及遷移風(fēng)險(xiǎn)顯著增加[22]。而CD34陽(yáng)性水平與乳腺癌患者的腫瘤浸潤(rùn)情況顯著相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者癌組織VEGF-C、CD34陽(yáng)性表達(dá)比例高于癌旁組織；乳腺癌患者的超聲特征與CRP、VEGF-C、CD34顯著相關(guān)(P<0.05)。而VEGF-C、CD34在病理學(xué)中對(duì)乳腺癌患者的診斷已得到明確的證實(shí)[23]。但本研究也存在一定的局限性，如樣本量較少，在組織學(xué)診斷過(guò)程中存在采樣的差異性，還有待大樣本深入研究。

綜上所述，乳腺癌患者的超聲影像特征與CRP、VEGF-C、CD34顯著相關(guān)，超聲對(duì)乳腺癌患者的疾病進(jìn)展具有重要的輔助診斷意義。