膠質瘤患者組織中microRNA-211 的水平及預后評估的價值

胡 骕，張 順，黃順騁，羅冬冬，趙海林，李 丹，彭 彪（通訊作者）

（廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科 廣東 廣州 510000）

在顱腦腫瘤中神經(jīng)膠質瘤約占46%的比例，因神經(jīng)膠質瘤的細胞侵襲性、增值性均較強，生長呈浸潤性，極易對正常腦組織實施侵犯，生長較為迅速，極難全部切除，術后存在較高的復發(fā)率，死亡率高、生存時間短、預后極差[1]?，F(xiàn)階段雖聯(lián)合手術、放化療取得了一定進展，但效果仍不甚理想。診療膠質瘤的難點在于目前缺乏早期有效的診斷、治療靶點。近幾年，探尋膠質瘤預后相關標志物、治療有效靶點的研究工作成為熱點。miRNA 在真核生物中廣泛存在，為內(nèi)源性非編碼的小RNA，常結合靶基因mRNA 對靶基因的表達實施調控。最近幾年，相關研究指出，表達異常的miRNA 會對抑癌或促癌基因功能產(chǎn)生影響，進而對其形成和進展發(fā)揮抑制或促進作用。有關資料證實[2]，miR-21l 可對口腔癌、黑色素瘤、肝癌等發(fā)生、發(fā)展起到抑制作用。但尚未明確膠質瘤中miR-21l 的表達及其評估預后的價值[3]。本文經(jīng)對膠質瘤不同級別組織、正常腦組織中miR-21l 的表達實施檢測，對其病理特征展開分析，并明確其評估預后的價值，詳細如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

2016 年1 月—2020 年5 月，在我院就診的神經(jīng)膠質瘤患者中選取70 例，其中男42 例，女28 例，年齡27 ～77 歲，平均57 歲，其中11 例I 級，15 例Ⅱ級，26 例Ⅲ級，18 例Ⅳ級。另取因顱腦重型損傷行減壓術患者的正常腦組織20 例。院倫理委員審核批準。術前患者或家屬均知曉，并簽署了同意書。

納入標準：70 例患者術后均具備5 年完整的隨訪資料；患者均以手術將腫瘤組織切除，術前未接受放化療；腫瘤組織切除后將其標本置于-80℃液氮中儲存，便于RNA 的分離提取[3]。

1.2 檢測miR-211

借助Trizol 法完成正常腦組織、膠質瘤組織內(nèi)的RNA 的提取，后以紫外分光光度計測定其濃度、純度，在260 nm、280 nm 波長處時測定其吸光度比值，并將OD260／OD280 值計算出來，保證OD 值在1.8 ～2.1 間。以qRT—PCR 對miR-211 對兩種標本中的表達水平實施檢測，內(nèi)參為RNU6B。樣品操作重復最少3 次[4]。

1.3 隨訪

術后每3 個月，以電話、入院、門診復查等方式對患者實施隨訪，并同步更新隨訪資料。

1.4 統(tǒng)計學方法

2.結果

2.1 microRNA-211 表達

檢測qRT.PCR 結果顯示，microRNA-211 在膠質瘤組織內(nèi)表達水平為（0.40±0.25），相較與正常腦組織,顯著為低（P＜0.05）。膠質瘤WHO 分級增高，而miR-211 表達水平降低，表明miR-211 表達水平和WHO 分級趨勢為負相關性。

2.2 分析病理特征

在膠質瘤的病理組織全部樣本中miR-211 表達平均水平為0.40±0.25,以此為截點分70 例患者為兩組，28例高表達、42 例低表達。對其表達水平與病理特征間關系分析顯示，高組織學分級、KPS 評分密切關系到低表達miR-211 的水平，而腫瘤直徑、位置、患者性別、年齡等與其無關。見表1。

表1 膠質瘤腦組織病理特征分析（例，%）

2.3 預后

經(jīng)分析K a p l a n.M e i e r 的結果顯示，對比生存率，m i R-211 高表達組較低表達組高（P＜0.05）。為進一步明確膠質瘤患者中miR-211 表達評估預后的價值，本文分析了單因素，結果可見，高組織學分級、KPS 評分＜80 分、miR-211 低表達為預后的不良指標，見表2。

表2 腦膠質瘤患者分析單因素COX 分析

為進一步明確miR-211表達是否為預后獨立的因素，經(jīng)分析多因素比例可見，高組織學分級、KPS 平評分＜80 分、miR-211 低表達均為影響預后獨立的危險因素，見表3。

表3 腦膠質瘤患者分析多因素COX 分析

3.討論

在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中腦膠質瘤最常見，其具備較高的惡性程度、預后較差、易復發(fā)。手術切除、放化療為治療該癥主要的手段，其預后較差，其中高級別膠質母細胞瘤較為特別，12 ～15 個月為其生存時間?，F(xiàn)階段，臨床尚無膠質瘤預后預測生物學有效的標志物。大量資料雖指出[5]，多種因素與其預后有關，如K P S 評分、W H O 分級等，但因患者異質性作用影響其評估的精準性。所以，對發(fā)生膠質瘤及其發(fā)展機制展開深入研究，尋求一種可準確預測其預后的標準物，進而早期診斷、治療該癥，并對其預后展開評估十分關鍵。

最近幾年，有資料指出[6]，轉錄后的miRNA 水平對目標靶基因表達實施調節(jié)，對腫瘤細胞各項生理過程產(chǎn)生影響，如增殖、遷移、分化、凋亡等，進而發(fā)揮其抑制或促進的效果。部分文獻指出[7]，腫瘤組織中miRNAs表達的水平直接關系到患者生存率，可將其作為指標預后的評價。本文主要調查了膠質瘤患者病理特征、預后與miR-211 表達間關系。

本文結果可見，miR-211 表達水平分析，膠質瘤組織較正常腦組織低，對其表達水平與膠質瘤病理特征關系展開分析顯示，KPS 評分、WHO 分級與其表達水平間關系密切，而腫瘤的直徑、位置、患者性別、年齡等與之無關。最后經(jīng)隨訪結果可見，對比5 年生存率，高表達組較低表達組高，表明腫瘤組織內(nèi)miR-211 低表達可作為獨立因素，用于患者預后的評價。

綜上所述，在膠質瘤組織中miR-211 為低表達，其表達水平直接關系到患者預后，可作為獨立危險因素，用于預后的預測。