文/秦燕飛
艾滋病稱之為獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),其病原體為人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV),又稱之為艾滋病病毒。艾滋病作為一類傳染性疾病,威脅我國(guó)群眾健康安全[1]。至2005年我國(guó)制定第一版艾滋病診斷指南,隨后2011年和2015年、2018年分別進(jìn)行更新,對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行完善。目前艾滋病病毒1型(HIV-1)為目前艾滋病感染常見病原型,占據(jù)總發(fā)病人群95%以上[2]。當(dāng)人體感染艾滋病病毒后,其潛伏時(shí)限為8~9年,患者感染后臨床癥狀表現(xiàn)不顯著,其外表與常人相比較無(wú)差異,但HIV感染后會(huì)對(duì)人體免疫系統(tǒng)攻擊,侵犯并進(jìn)入機(jī)體細(xì)胞后,清除率偏低,造成T4淋巴組織細(xì)胞受損,人體因免疫系統(tǒng)偏低并感染各類疾病,成為艾滋病患者死亡重要因素。而對(duì)感染者及其潛伏者診斷常見措施為體液病毒抗原及抗體檢測(cè),優(yōu)勢(shì)為操作簡(jiǎn)便,應(yīng)用普遍,以抗體檢測(cè)多見[3-4]。但HIV P24抗原及病毒基因測(cè)定在HIV感染檢測(cè)地位和重要性受到重視。文章就艾滋病實(shí)驗(yàn)室診斷情況如下分析,現(xiàn)報(bào)道如下。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)為一類方便篩查方式,目前應(yīng)用方便且范圍廣泛,而間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中血清樣本中HIV抗原被固相載體包裹并相互反應(yīng),酶標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體,與底物顯色反應(yīng),可作為樣本是否存在HIV抗體方式。目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中,其試劑發(fā)展至第4代[5]。完全病毒裂解產(chǎn)物歸為第1代試劑抗原,實(shí)施間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)后,可判斷是否存在抗體,因內(nèi)部檢測(cè)中雜質(zhì)較多存在敏感性、特異性限制,結(jié)果呈現(xiàn)假陽(yáng)性。第2代則作為重組、合成多肽抗原,依舊選擇間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行抗體檢測(cè),并對(duì)HIV-1、HIV-2水平檢測(cè),提升敏感性、特異性[6]。由于第2代試劑基于基因工程抗原,以重組抗原載體組成部分問(wèn)題,檢測(cè)期間假陽(yáng)性偏高。第3代試劑抗原人工合成中,HIV抗原決定簇多肽,基于雙抗原夾心法檢測(cè),分析優(yōu)勢(shì)上能檢測(cè)HIV抗原相關(guān)抗體亞型,檢測(cè)敏感性顯著提升,但仍然存在漏檢情況[7]。第4代則基于HIV抗原以及抗體聯(lián)合試劑,檢測(cè)P24抗原、HIV-1及HIV-2抗體,敏感度高,縮短HIV感染后檢測(cè)窗口期。目前常見為第3代試劑,第4代試劑被作為國(guó)家血源篩查。
基于HIV特性,對(duì)檢測(cè)手段要求上不僅僅具有高度特異性及靈敏度,需要具備方便快捷。HIV檢測(cè)中應(yīng)用膠體金快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)可短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果,被廣泛用于急診檢測(cè)?;诎籋IV抗原顆粒凝集檢測(cè)抗體存在,依據(jù)凝集反應(yīng)判斷結(jié)果[8]。對(duì)該類方法結(jié)果判讀上,檢測(cè)區(qū)與質(zhì)控區(qū)同時(shí)顯示出一條紅線,則HIV抗體陽(yáng)性,僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線,則為HIV抗體陰性。此時(shí)檢測(cè)區(qū)與質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紅色條帶表明本次試驗(yàn)開展無(wú)效。選擇膠體金快速檢測(cè)試驗(yàn)干預(yù),優(yōu)勢(shì)為操作簡(jiǎn)便及結(jié)果易判定,可適用于單份標(biāo)本檢測(cè)。
HIV-1核心蛋白為P24抗原,當(dāng)HIV侵入機(jī)體后,此時(shí)機(jī)體內(nèi)P24水平會(huì)隨著病毒復(fù)制發(fā)展,患者早期樣本中,HIV-1P24抗原可被檢測(cè),對(duì)樣本檢測(cè)期間,其時(shí)間早于HIV抗體,為此,臨床早期感染可應(yīng)用P24抗原判斷,縮短窗口期[9]。當(dāng)感染2~3周后可檢測(cè)出P24,抗體中和則減少游離抗原,造成抗原檢測(cè)結(jié)果影響,且機(jī)體并進(jìn)入無(wú)癥狀感染期。疾病后期時(shí),病毒復(fù)制能力增強(qiáng),P24水平隨之上升,為此,對(duì)HIV早期診斷可選擇P24抗原檢測(cè),其濃度變化可反應(yīng)患者病情進(jìn)展。目前常見診斷方法包括放射免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等有效手段[10]。但仍然存在假陽(yáng)性可能,仍需進(jìn)一步開展確證試驗(yàn)。研究指出[11],第四代酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中聯(lián)合P24抗原檢測(cè)系統(tǒng),結(jié)果顯示,其準(zhǔn)確性顯著高于單獨(dú)第四代酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、P24抗原。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展,隨著抗原檢測(cè)新方法不斷更新、應(yīng)用,如免疫復(fù)合物裂解檢測(cè)法、超敏感酶免疫測(cè)定法等。
HIV病毒研究、血液篩查中常見且廣泛定量核酸方式之一為反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)。對(duì)其原理分析:基于血漿中HIVRNA,基于病毒基因組幾個(gè)保守長(zhǎng)末端重復(fù)序列、gag、int 和 pol區(qū)域設(shè)計(jì)HIV特異性引物,將亞型范圍擴(kuò)大且覆蓋,經(jīng)PCR擴(kuò)增后,并得到cDNA,基于序列特異性熒光探針,對(duì)每個(gè)擴(kuò)增周期新生DNA均開展實(shí)時(shí)定量檢測(cè)。而目前最為廣泛兩種檢測(cè)方法為雅培Real time HIV-1 PCR 和羅氏 Cobas Taq-Man[12]。核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)為目標(biāo)核酸擴(kuò)增法,為一類等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng),對(duì)其原理分析上,系統(tǒng)內(nèi)混合酶系統(tǒng)體外模擬反轉(zhuǎn)錄病毒,可在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制過(guò)程,如Bio Mérieux Nucli Sens Easy Q HIV-1 v2.0和Hologic Aptima HIV-1。對(duì)其檢測(cè)范圍為40~107拷貝/ml[13]。上述方式應(yīng)用上對(duì)A~G各亞型均起到較好反應(yīng),對(duì)各種生物樣品測(cè)定,且各類抗凝劑均適用,對(duì)樣本提取、測(cè)定反應(yīng)上,仍需大量手工操作。
T淋巴細(xì)胞分類中,CD4+代表輔助T細(xì)胞,CD8+代表抑制細(xì)胞、殺傷T細(xì)胞。當(dāng)HIV感染后,人體共計(jì)靶細(xì)胞以CD4+淋巴細(xì)胞為主,此時(shí)細(xì)胞減少,CD8+水平上升,造成CD4+/ CD8+細(xì)胞比值倒置,以細(xì)胞免疫功能受損為表現(xiàn)[14]。當(dāng)HIV感染后,CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)反應(yīng)人體免疫狀態(tài)及其病程進(jìn)展,并明確疾病分期及治療效果判斷、HIV感染者臨床并發(fā)癥。目前常用流式細(xì)胞數(shù)獲取CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)絕對(duì)值[15]。因此,CD4+/ CD8+比值能評(píng)估患者病情嚴(yán)重程度、治療時(shí)機(jī)及預(yù)后情況,當(dāng)比值越低,則表明細(xì)胞免疫缺陷越嚴(yán)重。
HIV實(shí)驗(yàn)室技術(shù)被用于HIV感染診斷、流行病學(xué)調(diào)查及血液篩查等多個(gè)方面,對(duì)HIV感染預(yù)防控制、艾滋病臨床治療起著重要輔助作用。隨著現(xiàn)代醫(yī)療科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展,HIV實(shí)驗(yàn)室診斷逐漸向早期、快速、敏感及準(zhǔn)確方向發(fā)展,后續(xù)不斷發(fā)展一些新的技術(shù)可逐步應(yīng)用于上述領(lǐng)域,此時(shí)HIV診斷及治療技術(shù)上一個(gè)新的臺(tái)階。