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    固態(tài)發(fā)酵技術(shù)研究分析及應(yīng)用

    2020-11-03 13:10:24周衛(wèi)強湯維濤盧宗梅王曉健
    工業(yè)微生物 2020年5期
    關(guān)鍵詞:床層菌體固態(tài)

    唐 堂, 王 琪, 周衛(wèi)強, 湯維濤, 陳 博, 盧宗梅, 李 義,4, 王曉健, 彭 超*, 佟 毅,4*

    1.中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司,北京 102209;2.營養(yǎng)健康與食品安全北京市重點實驗室,北京 102209; 3.中糧生物科技股份有限公司,安徽 蚌埠 233010;4.玉米深加工國家工程研究中心,吉林 長春 130033

    固態(tài)發(fā)酵(Solid-state fermentation, SSF)是一種應(yīng)用早但研究較晚的生物發(fā)酵技術(shù)。早在數(shù)千年前,世界各地的酒類、乳制品等制作工藝中可以見其端倪。近代,人們開始系統(tǒng)研究固態(tài)發(fā)酵也要追溯到20世紀(jì)70年代中期。近年來,成規(guī)模的固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器研發(fā)有了十分顯著的進(jìn)展[1],其在提升固體原料利用價值、生產(chǎn)高值產(chǎn)品[2]方面有著突出的貢獻(xiàn)。

    固態(tài)發(fā)酵主要指微生物在濕潤固體表面或顆粒間隙中生長,同時伴有少量水和一定量的通氣。顆粒間的水主要附著在其表面,顆粒間隙被菌絲體、水和氣體所填滿,這些氣體既有為了保證發(fā)酵進(jìn)行而通入的空氣,也有菌體生長產(chǎn)生的廢氣。正是由于缺少流動的水,因此固態(tài)發(fā)酵與深層液體發(fā)酵相比,其對反應(yīng)體系的均一性要求也就尤為迫切。如何讓反應(yīng)體系均勻地動起來,也是固態(tài)發(fā)酵研究和反應(yīng)器研發(fā)時所要面臨的主要問題。影響固態(tài)發(fā)酵的因素較多,一方面取決于微生物類型的選取和規(guī)模,此外溫度、水活度、基粒攪拌等因素對其也有很大影響。固態(tài)發(fā)酵應(yīng)用廣泛,在食品生產(chǎn)、飼料加工、生物能源、酒業(yè)釀造和生物防治等領(lǐng)域均有涉獵。近年來隨著固態(tài)發(fā)酵的新設(shè)備及工藝不斷研發(fā),固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)能大幅提高,酒業(yè)巨頭五糧液集團(tuán)計劃在2020年新增12萬噸純能固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)能,總產(chǎn)能將達(dá)到22萬噸。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)和檢測手段的不斷進(jìn)步,固態(tài)發(fā)酵在技術(shù)應(yīng)用和設(shè)備等方面都得到了進(jìn)一步發(fā)展,固態(tài)發(fā)酵常見設(shè)備類型及其優(yōu)缺點如表1所示。

    1 影響固態(tài)發(fā)酵的因素

    固態(tài)發(fā)酵一般會受到溫度、通風(fēng)、攪拌等多種因素影響[3]。這些影響因素相互關(guān)聯(lián),但又相互制約。例如一味地追求充分?jǐn)嚢钑谝欢ǔ潭壬暇徑馔獠蛔愫蛡髻|(zhì)不均的問題,但是對于一些真菌發(fā)酵來說,高頻攪拌會導(dǎo)致顆粒間的菌絲斷裂,影響發(fā)酵水平。本文列舉了幾個在固態(tài)發(fā)酵過程中較為重要的影響因素,以期研究人員對固態(tài)發(fā)酵有更好的理解和認(rèn)識。

    表1 固態(tài)發(fā)酵的設(shè)備及其優(yōu)缺點

    1.1 固態(tài)發(fā)酵的能量交換

    大多數(shù)固態(tài)發(fā)酵案例都是在有氧條件下進(jìn)行,而氧氣主要來源于連續(xù)的氣相,能耗較低[4]。實驗室和工業(yè)生產(chǎn)一般都使用潔凈空氣作為氧源。菌體消耗氧氣并產(chǎn)生CO2等尾氣,所通入的空氣穿過基質(zhì)后減少了氧氣,增加了廢氣,同時帶走了基質(zhì)中的水汽和熱量。一般而言,在尾氣口排出的氣體溫度會比進(jìn)入時高,并且尾氣口處受溫差影響也會有較多的冷凝水。

    氣體通過基質(zhì)時受到基質(zhì)內(nèi)部熱量的影響,會形成一定流速的熱風(fēng)。這些熱風(fēng)會使基質(zhì)中的水分慢慢蒸干,導(dǎo)致水活度降低。發(fā)酵床層含水量過大,芽孢、晶體游離晚,極易限制營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,還會影響通風(fēng)效果,導(dǎo)致發(fā)酵周期延長;如果含水量過低,則會影響培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)和水分的吸收利用,會使發(fā)酵受抑制[5]。在固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器設(shè)計的時候,需要考慮補水和有效的熱交換。固態(tài)發(fā)酵底物基質(zhì)顆粒中的水平衡機理如圖1所示。底物水解所需的水量、代謝水的產(chǎn)生量、微生物的吸水量和水分蒸發(fā)的損失量四者共同維持內(nèi)部水的動態(tài)平衡[6]。蒸發(fā)到菌體外的水分需要得到補充,補水一般可以使用噴淋無菌水或提高通氣的濕度來進(jìn)行,而溫度的調(diào)節(jié)一般通過反應(yīng)器壁面與環(huán)境之間進(jìn)行交換,如果反應(yīng)器外壁直接與空氣接觸,則依靠自由對流的方式進(jìn)行熱交換;如果有夾套,那么反應(yīng)器內(nèi)的熱量會通過夾套水或氣體的強制對流帶走。值得注意的是,蒸發(fā)冷卻也會產(chǎn)生水分的損失,在控溫的同時也需要時刻關(guān)注水分補充[7]。

    圖1 生物反應(yīng)器中底物顆粒固態(tài)發(fā)酵過程中有助于水平衡的不同機理示意圖

    1.2 固態(tài)發(fā)酵的攪拌類型

    攪拌是調(diào)節(jié)基質(zhì)溫度、濕度和氧含量的重要措施之一。固態(tài)發(fā)酵中有連續(xù)攪拌和間歇式攪拌,選取何種攪拌類型取決于菌體對發(fā)酵環(huán)境的要求。固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)一般會持續(xù)放熱,過高的溫度會嚴(yán)重影響菌體的生長速率。為了解決熱交換的問題,在均勻混合型的固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器中配有矩形攪拌環(huán)式攪拌槳。通過夾套水和攪拌槳的攪拌使床層溫度與外界進(jìn)行交換從而達(dá)到控溫的效果。但是在實際生產(chǎn)中,基質(zhì)會附著在反應(yīng)器內(nèi)壁而很難被攪拌帶動,而這些靜止的顆粒層會過度的冷卻形成絕緣層。因此,均勻混合型固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器如何克服此類問題,將會是發(fā)酵成功的關(guān)鍵。

    為了克服攪拌不均的情況,轉(zhuǎn)鼓生物反應(yīng)器應(yīng)運而生,罐體沿軸線轉(zhuǎn)動,罐內(nèi)設(shè)有擋板以促進(jìn)軸向混合。目前,很多轉(zhuǎn)鼓式反應(yīng)器都把通風(fēng)與攪拌進(jìn)行耦合[8],空氣主要存在于床層上方至轉(zhuǎn)鼓頂部這一空間。在翻轉(zhuǎn)床層的過程中空氣會帶走熱量,不同部位的床層和罐壁接觸也可以進(jìn)行熱交換。為了克服水分蒸發(fā),罐內(nèi)會設(shè)有噴淋裝置。但是,該類反應(yīng)器在大規(guī)模生產(chǎn)時由于轉(zhuǎn)鼓表面積和床層體積比的減小,會導(dǎo)致散熱效果變差。因此,該類反應(yīng)器在設(shè)計時需要根據(jù)實際生產(chǎn)需求來控制長徑比,以獲取更好的發(fā)酵結(jié)果。

    1.3 固態(tài)發(fā)酵中的基質(zhì)

    基質(zhì)是菌體附著的部分,也是提供營養(yǎng)成分的場所[9]。我們可以將基質(zhì)中的每一個顆粒作為一個獨立模型來研究。菌絲由顆粒表面向內(nèi)部延伸,菌體對顆粒深層營養(yǎng)的利用程度受到顆粒尺寸的限制,一般來說菌體能夠越多接觸基質(zhì)表面,其對基質(zhì)的降解利用也就越充分,整體發(fā)酵效率就會更高[10]。因此,在發(fā)酵時選擇最為合適的粒徑是尤為重要的。傳統(tǒng)填充床式生物反應(yīng)器發(fā)酵原理見圖2,顆粒大小也會影響床層的填充效果,進(jìn)而影響通風(fēng)效果,對同一種基質(zhì)而言,顆粒越小的床層通氣效果越差。

    圖2 傳統(tǒng)填充床生物反應(yīng)器的示意圖

    反應(yīng)器中,床層填充的質(zhì)量和體積決定了床層的密度。不同原料和菌體對床層密度有各不相同的影響和需求,因此針對每種類型的基質(zhì)和菌種都要測試其最佳的床層密度。但是在反應(yīng)過程中,菌體、水分、溫度都會對基質(zhì)中顆粒的形態(tài)產(chǎn)生影響,有的可能會收縮也有的會膨脹。因此,可以肯定的是床層密度在整體發(fā)酵過程中是一個動態(tài)的變化,這也極大地阻礙了固態(tài)發(fā)酵理論研究模型的建立。在研究相關(guān)問題時,更多的研究工作是借助公式并結(jié)合實際發(fā)酵結(jié)果來分析、篩選出最優(yōu)的顆粒大小和裝料量。

    2 固態(tài)發(fā)酵專業(yè)化設(shè)備

    固態(tài)發(fā)酵不僅常用于酒類及傳統(tǒng)食品的釀造,在生物轉(zhuǎn)化、生物燃料及生物防治等領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。近年來,隨著對固態(tài)發(fā)酵相關(guān)理論認(rèn)識的不斷深入及發(fā)酵模型不斷建立,一大批能夠應(yīng)用于生物化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域,具有較高生產(chǎn)水平的專業(yè)化新型固態(tài)發(fā)酵設(shè)備被研發(fā)出來(見表2)。

    2.1 酒類固態(tài)發(fā)酵設(shè)備示例

    鄭國祥等[11]在調(diào)研了現(xiàn)有酒精發(fā)酵工藝后,發(fā)現(xiàn)CO2這一資源沒有被充分的利用,為此其團(tuán)隊研發(fā)出一種依靠CO2氣體“呼吸”作用帶動攪拌的新型釀酒固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器。這種反應(yīng)器將物料置于密封箱內(nèi)的支架上,其內(nèi)部配有經(jīng)由螺旋角大于55°的螺紋連接驅(qū)動軸的攪拌槳。密封箱置于水槽中并帶有夾層,可以將發(fā)酵產(chǎn)生的CO2引入夾層中。隨著CO2的增加密封箱隨之膨脹,體積增大。依靠浮力密封箱被提升,當(dāng)氣體壓力增大到到一定數(shù)值后,將自動打開泄壓閥釋放氣體,密封箱體積減小,浮力隨之減小而下沉。氣壓降低到一定限度泄壓閥關(guān)閉并再次充氣,由此往復(fù)進(jìn)行充放氣過程。密封箱的沉浮帶動攪拌槳轉(zhuǎn)動達(dá)到了攪拌的作用,排出的CO2和其攜帶的酒精氣體則溶于水中。此釀酒固態(tài)發(fā)酵裝置在保證固態(tài)發(fā)酵效果的基礎(chǔ)上,相比傳統(tǒng)發(fā)酵裝置更加高效的利用CO2,解決了CO2過度排放的問題。此外,利用產(chǎn)生的氣壓來帶動攪拌也大大節(jié)約了生產(chǎn)成本,為實現(xiàn)酒精的機械化生產(chǎn)提供了新的思路。

    表2 應(yīng)用于孢子,抗生素,化學(xué)藥品,乙醇和色素生產(chǎn)的固態(tài)發(fā)酵生物反應(yīng)器的最新實例

    2.2 生物飼料固態(tài)發(fā)酵設(shè)備示例

    劉曉燕等[12]為了克服原料體積較大不易攪拌均勻等問題,設(shè)計了一款集原料粉碎、微生物發(fā)酵和制劑于一體的固態(tài)發(fā)酵設(shè)備。該設(shè)備為垂直設(shè)計,頂部為進(jìn)料口,原料掉入特別設(shè)計的彈板上因震動均勻攤開,經(jīng)由垂直于攪拌軸水平旋轉(zhuǎn)的粉碎系統(tǒng)磨碎。研磨部分配有氣體吹掃功能,一方面依靠空氣擠壓研磨齒輪增加研磨力度,另一方面吹掃附著在研磨齒輪上殘留的原料,使其充分進(jìn)入罐內(nèi)增加物料利用率。罐內(nèi)設(shè)有上、中、下三部分?jǐn)嚢璋?,其中最下層攪拌板開設(shè)曝氣孔,使氧氣更均勻地分布在溶液中。在上、中、下三部分?jǐn)嚢璋鍏f(xié)同作用下,使原料與罐內(nèi)發(fā)酵液充分均勻混合,加快發(fā)酵速度,防止物料沉淀和消除攪拌死角。除了攪拌板外,在罐內(nèi)還配備了攪拌環(huán)在靠近罐體內(nèi)壁處平行于軸向攪拌,加強了內(nèi)部基質(zhì)的運動。同時,攪拌環(huán)間歇性的和通氣口相連,使氧氣間斷地通入罐內(nèi),為發(fā)酵提供適宜的環(huán)境。

    此設(shè)計工藝是對飼料類固態(tài)發(fā)酵設(shè)備的改良,大大克服了因物料體積過大造成的攪拌不均勻問題。此外,由于氣吹掃功能和攪拌板的特殊設(shè)計,很大程度上減小了攪拌死角和物料沉淀。因此提高了物料利用率,為工業(yè)大規(guī)模批量生產(chǎn)節(jié)約了成本。

    2.3 連續(xù)固態(tài)發(fā)酵設(shè)備示例

    徐親民等[13]研發(fā)了一款可以連續(xù)發(fā)酵并滅菌的固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器。該反應(yīng)器為圓形長柱狀,每一套反應(yīng)器外表面包裹水冷夾套控制溫度,內(nèi)有螺桿作為攪拌和推進(jìn)器,螺桿軸上設(shè)有出風(fēng)孔和彎曲的進(jìn)風(fēng)管,可以通入空氣或者蒸汽提供適宜的發(fā)酵環(huán)境并進(jìn)行高溫滅菌,通風(fēng)彎管亦可以輔助攪拌。如果作為連續(xù)滅菌和發(fā)酵的反應(yīng)器來使用,初始原料進(jìn)入罐體,由螺桿推進(jìn)填滿空間,通入蒸汽滅菌后接種攪拌,此時該反應(yīng)器下游還可以連接另一相同反應(yīng)器來提供充足的發(fā)酵反應(yīng)時間和空間。當(dāng)攪拌均勻的基質(zhì)完全離開前一反應(yīng)器后,該反應(yīng)器可以再次進(jìn)料、滅菌、接種,已達(dá)到連續(xù)滅菌和發(fā)酵的效果。如果直接填入已滅菌并混合好菌體的原料,則可以直接利用反應(yīng)器可相互連接的特點,控制不同發(fā)酵時間和過程,使發(fā)酵在適宜環(huán)境中充分進(jìn)行直至達(dá)到要求后卸料。

    此設(shè)計實現(xiàn)了固態(tài)發(fā)酵的連續(xù)生產(chǎn),保證了發(fā)酵過程的密封和無菌,很大程度上降低了系統(tǒng)的能耗,此外可以隨意連接額外的反應(yīng)器且可以無縫對接發(fā)酵產(chǎn)物的下游處理環(huán)節(jié),不但節(jié)約了時間,同時提升了發(fā)酵過程的可操控性。

    3 對固態(tài)發(fā)酵的展望

    近幾年,固態(tài)發(fā)酵越來越多的受到關(guān)注,其理論研究也隨之深入,開辟了固態(tài)發(fā)酵領(lǐng)域新的篇章。在未來的固態(tài)發(fā)酵領(lǐng)域,優(yōu)化反應(yīng)器內(nèi)部基質(zhì)的傳質(zhì)過程仍然是提升發(fā)酵品質(zhì)的關(guān)鍵,設(shè)計出合理高效的反應(yīng)器也會是固態(tài)發(fā)酵研究的主要方向。但是,隨著數(shù)學(xué)模型的不斷建立與完善,固態(tài)發(fā)酵的研究將會更為便利。許多以前只能依靠實際經(jīng)驗,用一批批發(fā)酵獲得的研究結(jié)果,現(xiàn)在可以很方便的利用數(shù)學(xué)建模在電腦上進(jìn)行多次相關(guān)測試。因此,數(shù)學(xué)建模會在該研究領(lǐng)域扮演越來越重要的角色。

    固態(tài)發(fā)酵技術(shù)的研發(fā)和應(yīng)用有著淵源的歷史,而且相對于深層液體發(fā)酵來說,目前的固態(tài)發(fā)酵成本十分低廉、原料簡單易取,極少有廢水排放,起到了指導(dǎo)和帶動相關(guān)發(fā)酵工業(yè)清潔生產(chǎn)的作用[14]。只要研究人員不斷地探索和揭示固態(tài)發(fā)酵的規(guī)律,不斷完善固態(tài)發(fā)酵技術(shù),固態(tài)發(fā)酵就一定會有更為廣闊的應(yīng)用前景和發(fā)展空間。

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