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    傳統(tǒng)方法與分子生物檢測(cè)結(jié)核病的比較研究

    2021-05-18 13:34:48王茂全
    健康之家 2021年14期
    關(guān)鍵詞:比較結(jié)核病

    王茂全

    摘要:目的:比較傳統(tǒng)方法與分子生物檢測(cè)結(jié)核病的有效性。方法:選擇2016年~2017年在醫(yī)院就診的疑似結(jié)核患者90例。檢測(cè)方法采用分子生物檢測(cè)方法與傳統(tǒng)方法,比較兩種方法的有效性。結(jié)果:傳統(tǒng)方法檢出率為62.2%,生物檢測(cè)方法檢出率為82.2%。傳統(tǒng)方法檢出率低于分子生物檢測(cè)法檢出率(P < 0.05) ,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩方法檢測(cè)陽(yáng)性符合率為75.6%。結(jié)論:在結(jié)核病檢測(cè)中,生物檢測(cè)方法比傳統(tǒng)方法有更多的優(yōu)點(diǎn),例如較為方便、速度快、出錯(cuò)率低等,具有良好的診斷價(jià)值,適合臨床醫(yī)療在診療活動(dòng)中使用。

    關(guān)鍵詞:傳統(tǒng)方法;分子生物檢測(cè)方法;結(jié)核病;比較

    結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌所引起的一類傳染性疾病,是由單一病原體傳染而引發(fā)的死亡數(shù)最多的疾病[1~2]。在2010年,我國(guó)進(jìn)行了一次結(jié)核病流行病學(xué)篩選,流調(diào)結(jié)果表明,我國(guó)每年有超過(guò)130萬(wàn)的結(jié)核病病人,在全世界的結(jié)核病患者中,占比約13.2%,位居全球第二[3~4]。經(jīng)過(guò)過(guò)去很長(zhǎng)時(shí)間的努力,我國(guó)結(jié)核病的發(fā)病率在一定程度上得到了控制,結(jié)核病的發(fā)病情況趨于平穩(wěn)。但最近這些年[5~6],我國(guó)部分地區(qū)結(jié)核病再次增多,使得研究人員對(duì)此現(xiàn)象十分重視。結(jié)核病的初步預(yù)防很關(guān)鍵,重點(diǎn)依靠實(shí)驗(yàn)室診斷、結(jié)核病的鑒定、診療的實(shí)施。當(dāng)下結(jié)核病檢測(cè)方法需要的時(shí)間比較長(zhǎng),不符合臨床的實(shí)際需求,因此,必須研究一種新的方法[7]。文章選擇2016年~2017年來(lái)醫(yī)院就診的90例疑似患者,對(duì)傳統(tǒng)方法與分子生物檢測(cè)法進(jìn)行對(duì)比,對(duì)所獲得的結(jié)果進(jìn)行分析?,F(xiàn)報(bào)道如下:

    1 對(duì)象與方法

    1.1 一般資料

    本研究選擇2016年~2017年來(lái)醫(yī)院就診的90例疑似患者,其中男性占比5/9,女性占比4/9,所有患者的年齡30~73歲,年齡的均值與標(biāo)準(zhǔn)差分別是45.4歲、3.6歲,所有選定的患者都被告知本研究的科學(xué)目的,同時(shí)簽署了知情書(shū)。

    1.2 方法

    儀器:PCR儀器所采用的是宏石SLAN-96P。

    標(biāo)本采集液:在采集到的痰液標(biāo)準(zhǔn)樣板中加入4%NaOH飽和溶液,加至4倍痰液體積,混勻,室溫放置30 min使其液化,取1 mL置于離心管中。離心機(jī)12000 rpm,離心5min,除去上清,沉淀后加入1 mL無(wú)菌試驗(yàn)生理鹽水,攪拌均勻,12000 rpm重復(fù)離心5 min,洗滌兩次[8~9]。沉淀后加入50 μDNA提取液,充分?jǐn)嚢璧玫斤柡腿芤褐械乃蝗苄猿煞?,采集過(guò)程中應(yīng)使用進(jìn)樣器充分混合均勻平衡[10]。如果移液器吸頭太細(xì)而無(wú)法消化吸收或堵塞吸頭,使用未受污染的吸頭將其從移液器吸頭頂部取出并切成塊,然后置于金屬浴中10 min,離心5 min,12000 rpm。

    檢驗(yàn)方法:所有標(biāo)本均通過(guò)提取病原載玻片、抗酸染色光學(xué)顯微鏡和熒光定量PCR檢查采集。取一個(gè)PCR反應(yīng)管,插入已解析的質(zhì)量保險(xiǎn)單,8 000 rpm離心5秒,將反應(yīng)管置于PCR檢測(cè)器中,增加至93℃預(yù)旋2 min,然后93℃45 s,55℃120 s,30個(gè)循環(huán)后,置于33℃條件下;PCR反應(yīng)后檢測(cè)熒光,將PCR管充分冷藏至33℃,擴(kuò)增后的反應(yīng)管迅速放入熒光中,檢測(cè)儀讀取并記下數(shù)據(jù),熒光激發(fā)波長(zhǎng)487 mm,檢測(cè)波長(zhǎng)525 mm。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    統(tǒng)計(jì)分析軟件采用SPSS ,計(jì)量資料用均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用百分比表示,兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)。P < 0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    傳統(tǒng)方法檢測(cè)陽(yáng)性56例,檢出率62.2%;分子生物檢測(cè)方法檢測(cè)陽(yáng)性74例,檢出率82.2%。傳統(tǒng)方法陽(yáng)性檢出率低于分子生物學(xué)檢測(cè)方法(P < 0.05) ,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2 = 8.792) 。兩方法檢測(cè)陽(yáng)性符合率為75.6%(56/74) ,見(jiàn)表1

    3 討論

    結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌所引起的,近年來(lái)流行率再次持續(xù)上升。結(jié)核病檢測(cè)是診斷結(jié)核病最特異的方法,痰涂片是肺結(jié)核患者診療、判斷、開(kāi)具治療計(jì)劃、評(píng)估治療結(jié)果的常用方式或方法。涂片抗酸染色迅速方便,同時(shí)因?yàn)榉堑湫头种U菌在中國(guó)基本上看不到,如果分枝桿菌出現(xiàn)陽(yáng)性,那么大體上能夠判斷結(jié)核病。樣品在體外聚合,采用鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 方法,擴(kuò)增出結(jié)核桿菌中所含的DNA,并通過(guò)電泳進(jìn)行檢測(cè)。該方法不用體外預(yù)培養(yǎng),2d就可以獲得報(bào)告,節(jié)省時(shí)間并且很方便,可識(shí)別細(xì)菌種類,但不足之處是可能存在假陽(yáng)性或假陰性的情況。 PCR技術(shù)的應(yīng)用對(duì)于臨床療效評(píng)價(jià)、傳染病控制和發(fā)病機(jī)制調(diào)查具有重要意義。因?yàn)楸唤Y(jié)核桿菌所感染后并不會(huì)出現(xiàn)任何顯著的癥狀,只是PPD檢測(cè)結(jié)果是陽(yáng)性,所以結(jié)核病的判斷是臨床科研以及結(jié)核病預(yù)防的關(guān)鍵。過(guò)去,肺結(jié)核的臨床判斷大多數(shù)是按照就診病人的臨床體征,再加上相應(yīng)的檢測(cè)化驗(yàn)數(shù)據(jù),但由于很多的就診病人并未存在明顯的癥狀,所以臨床診斷困難。實(shí)驗(yàn)室結(jié)核病的判斷大體上是以細(xì)菌涂片與痰培養(yǎng)為核心。痰涂片檢查法能夠判斷出結(jié)核病的傳染源,價(jià)格便宜,適合我國(guó)國(guó)情,然而檢測(cè)陽(yáng)性率不高,進(jìn)而使得對(duì)結(jié)核病的判斷不夠準(zhǔn)確。然而在當(dāng)下的結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室測(cè)試中,痰培養(yǎng)診斷還是金標(biāo)準(zhǔn),尤其是針對(duì)藥敏檢測(cè),在患者臨床用藥和耐藥性檢測(cè)等方面有著十分關(guān)鍵的價(jià)值,但檢測(cè)周期還是比較長(zhǎng),所以需要進(jìn)行更新。

    在治療結(jié)核病領(lǐng)域,生物技術(shù)逐漸獲得了廣泛的應(yīng)用,其中便包括PCR熒光技術(shù)的廣泛應(yīng)用 [11~15]。PCR技術(shù)采用結(jié)合分枝桿菌為非特異性引物、非特異性熒光探針、PCR反應(yīng)液、高溫DNA聚合酶、單四多肽鏈等成分,在體外擴(kuò)增的基礎(chǔ)上檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌。

    PCR技術(shù)在生物檢測(cè)法中的實(shí)施是在PCR反射中加入熒光功能基團(tuán),檢測(cè)熒光數(shù)據(jù)信號(hào)的積累,檢測(cè)PCR的全過(guò)程,并對(duì)樣品中DNA確定的過(guò)程。測(cè)試結(jié)果在1d內(nèi)獲得[16~18]。PCR擴(kuò)增在封閉狀態(tài)下進(jìn)行,會(huì)降低環(huán)境的影響,減少陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn),在檢測(cè)靈敏度上確定性很高[19]。

    本研究獲取90份疑似患者痰標(biāo)本,采用傳統(tǒng)方法、生物檢測(cè)法分別進(jìn)行檢測(cè),傳統(tǒng)方法痰涂片陽(yáng)性率為62.2%,生物檢測(cè)方法陽(yáng)性率為82.2%,兩種方法的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。

    總而言之,在結(jié)核病的檢測(cè)過(guò)程中,生物檢測(cè)方法比傳統(tǒng)方法有更多的優(yōu)點(diǎn),例如較為方便、速度快、出錯(cuò)率低等,具有良好的診斷價(jià)值,適用于臨床醫(yī)學(xué)用途。但是,隨著對(duì)結(jié)核分枝桿菌的科學(xué)研究不斷增多,許多新的檢測(cè)方法層出不窮,雖然每一種檢測(cè)方法都有其自身的優(yōu)劣勢(shì),而且部分新研究出來(lái)的檢測(cè)方法還未能在臨床上普及,甚至有一部分還在實(shí)驗(yàn)室階段,但是相信隨著我國(guó)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)以及生物科技的不斷進(jìn)步,研究探索從整體的角度進(jìn)行,從細(xì)菌水平到分子水平,從傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室方法到現(xiàn)代的實(shí)驗(yàn)室方法,并且在各個(gè)層次和深度上不斷進(jìn)化和完善,這樣就可以一個(gè)接一個(gè)地走進(jìn)醫(yī)院,以理想化的方式成功完成結(jié)核病的檢測(cè)[20~22]。作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)人員,每個(gè)人都必須掌握新的專業(yè)知識(shí)和新技術(shù)應(yīng)用,尋找一種高精度、非特異性、高靈敏度、簡(jiǎn)便快捷的結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)新方法。

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