分散固相萃取結(jié)合UPLC-Orbitrap MS聯(lián)用測(cè)定禽蛋中五氯苯酚殘留量

吳劍平, 嚴(yán) 鳳,張 婧, 王 博，潘 娟,貢松松*，達(dá)列亞·阿合買提

(1.上海市獸藥飼料檢測(cè)所, 上海 201103；2.新疆獸藥飼料監(jiān)察所，烏魯木齊 830063)

五氯苯酚又名無氯酚酸(Pentachlorophenol， PCP)，其分子式為C9HCl5O, 結(jié)構(gòu)式如圖1, 是一種有機(jī)氯農(nóng)藥，其作用機(jī)理是將生物代謝過程中的氧化磷酸化解偶聯(lián), 具有廣譜生物殺傷性[1]，常用于殺菌、殺蟲、除草、落葉、木材防腐等。有文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]，我國從1958 年以來主要將五氯苯酚鈉(PCP-Na)用于殺滅釘螺以控制血吸蟲病傳播，在長江中下游11個(gè)省(市)的稻田和池塘使用持續(xù)了幾十年。PCP-Na還可作為觸殺型滅生性除草劑使用于稻田，主要用于除稗草和幼草。其在1988～2000年的產(chǎn)量超過7000 噸，之后維持在每年約3000 噸。PCP在獲得廣泛應(yīng)用的同時(shí), 它所造成的環(huán)境問題也日益受到人們的高度重視, 有關(guān)研究也日益深入。有研究表明，PCP也是一種環(huán)境激素，其可通過食物鏈進(jìn)入人體，經(jīng)血液循環(huán)至全身各組織器官，大約20%可蓄積于體內(nèi)，微量即可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液、肝腎損傷及內(nèi)分泌紊亂，而且還是環(huán)境污染物二噁英的一種來源，具有強(qiáng)烈的致癌、致畸變作用[4-5]。因此，其于1975～1991年先后被科威特、瑞典、印度尼西亞、瑞士、新西蘭和印度全面禁用，1980～1992年陸續(xù)被奧地利(僅限科研)、中國(僅限木材防腐)、伯利茲(僅限持證者防腐) 和歐盟(僅限非公共場所) 所限用，被美國列入環(huán)境激素、優(yōu)先控制污染物列表[3]。

目前,常見的檢測(cè)PCP方法主要檢測(cè)對(duì)象為木材、家具、紡織品、水體及水產(chǎn)品中的五氯苯酚檢測(cè)，其主要采用的儀器方法多為氣相色譜法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[6-7]。由于PCP化學(xué)結(jié)構(gòu)中苯環(huán)上連有5個(gè)氯離子和一個(gè)羥基，其分子極性很強(qiáng)，一般需要衍生化后才能進(jìn)行氣相色譜或氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析[8-10]。也有報(bào)道表明[11-13]，可以使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)PCP，其無需衍生化，不會(huì)因?yàn)檠苌蕩韱栴}。但由于其分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，其需要較高的碰撞能量，且一般只能獲得母離子與氯離子組成的離子對(duì)，在定性時(shí)難以獲取兩個(gè)不同的碎片離子導(dǎo)致其方法特異性不佳。靜電軌道阱質(zhì)譜是一種高分辨率質(zhì)譜，其分辨率一般可以達(dá)到70000以上，這使其獲得的化合物精確質(zhì)荷比和同位素離子豐度比信息具有極強(qiáng)的特征性[14]，可以非常準(zhǔn)確地同時(shí)定性定量PCP。禽蛋中富含蛋白質(zhì)、卵磷脂和脂肪，這些雜質(zhì)不僅降低了目標(biāo)物提取的效率，還極易污染檢測(cè)設(shè)備，選擇分散固相萃取技術(shù)作為前處理步驟可有效防止雜質(zhì)的干擾和污染[15]，有利于更穩(wěn)定、準(zhǔn)確地獲得檢測(cè)結(jié)果。目前在禽蛋中檢測(cè)PCP，能同時(shí)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)識(shí)別與精確定量的方法并未見報(bào)道，而市場中卻有對(duì)禽蛋中PCP的檢測(cè)需求。高分辨質(zhì)譜法能同時(shí)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)識(shí)別與精確定量，具有較高的靈敏度和特異性，適合禽蛋中PCP的檢測(cè)需求。

圖1 五氯苯酚化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig 1 Structure of pentachlorophenol

1 材料和方法

1.1 儀器 Ultimate 3000RS超高效液相色譜、Xcalibur控制軟件、靜電軌道阱質(zhì)譜帶ESI電離噴霧源(Q Exactive)、Xcalibur數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、高速冷凍離心機(jī)(Multifuge X1R，ThermoScientific)；精密電子天平(EX125ZH，OHAUS)。

1.2 材料、藥品與試劑 五氯苯酚對(duì)照品(天津阿爾塔科技有限公司，CAS No: 87-86-5,批號(hào)：S035895，99.9 μg/mL)，上海市定點(diǎn)養(yǎng)殖場(上海軍安特種蛋雞場)采用封閉式管理，以未檢出PCP陽性飼料進(jìn)行飼喂，專門提供的一批禽蛋：雞蛋(批號(hào)：JK20190078-80)，鴨蛋(批號(hào)：JK20190070-72)，鴿蛋(批號(hào)：JK20190067-69)，甲酸、乙腈、甲醇、正己烷、異辛烷(色譜純)；酸性氧化鋁粉末(200目)，去離子水(電阻率≥18 MΩ·cm)。

1.3 色譜條件 色譜柱：反相分析柱(Waters T3 C18 100×2.1 mm，1.8 μm)，柱溫：30 ℃，流速：0.3 mL/min,進(jìn)樣量：5 μL，流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%甲酸，A∶B=75∶25等度洗脫，所得色譜質(zhì)譜圖如圖2所示。

1.4 質(zhì)譜條件 使用ThermoScientific公司的Q Exactive靜電軌道阱質(zhì)譜帶ESI電離噴霧源，條件如下：ESI-模式，源電壓3300 V，鞘氣壓力330 kPa，輔助氣流速4.5 L/min，吹掃氣流速0.25 L/min，離子傳輸管溫度 350 ℃，霧化器溫度350 ℃，檢測(cè)模式為全掃描模式，掃描范圍256～276 Da，分辨率設(shè)為70000，透鏡電壓105 V，質(zhì)量數(shù)提取窗口寬度MEW設(shè)為5 ppm。

1.5 前處理?xiàng)l件 同批次樣品分別取5個(gè)雞蛋、鴨蛋和鴿蛋，分別去殼勻漿后準(zhǔn)確稱取2.00 g樣品置于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，充分震搖3 min，8500 r/min高速離心3 min后，精密量取1.00 mL上清液至試管中，加入1.00 mL 0.1%甲酸溶液，加0.2 g酸性氧化鋁粉末，渦旋混勻后10000 r/min離心，上清液過0.22 μm尼龍濾膜后裝入棕色進(jìn)樣瓶待測(cè)。

1.6 方法靈敏度實(shí)驗(yàn) 分別稱取分別稱取(2.00±0.02) g禽蛋空白樣品去殼后勻漿，各取40份于具塞離心管中，其中20份作為空白基質(zhì)，另外20份依次加入己知濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，制成含PCP藥濃度為0.2 μg/kg的添加樣品。按照1.5項(xiàng)前處理方法處理后，按1.3與1.4項(xiàng)儀器條件進(jìn)樣分析。

1.7 基質(zhì)效應(yīng)實(shí)驗(yàn) 稱取(2.00±0.02) g三種禽蛋空白樣品各5份，按1.5項(xiàng)方法處理后獲得相應(yīng)組織空白基質(zhì)溶液。另精密稱定標(biāo)準(zhǔn)品10±0.5 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL，得100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用0.1%甲酸甲醇稀釋至100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液。取適量標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液用0.1%甲酸溶液稀釋至1 ng/mL溶劑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，另取適量標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液用空白基質(zhì)溶液稀釋至1 ng/mL基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將1 ng/mL的溶劑標(biāo)準(zhǔn)品溶液基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液按1.3與1.4項(xiàng)的儀器條件進(jìn)樣測(cè)試。

1.8 線性定量范圍 將100 μg/mL的PCP標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用0.1%甲酸甲醇溶液稀釋至1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，再以禽蛋樣品按1.5項(xiàng)前處理方法處理所得的空白基質(zhì)溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)中間溶液獲得0.5、1.0、2.5、5.0、10、25、100 μg/kg系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液，按1.3、1.4項(xiàng)儀器條件進(jìn)樣檢測(cè)。

1.9 方法準(zhǔn)確度與精密度 分別取3批空白雞蛋、鴨蛋和鴿蛋中添加定量限(LOQ)0.5 μg/kg，半最大殘留限量25 μg/kg，最大殘留限量50 μg/kg和2倍最大殘留限量(2MRL)100 μg/kg含量水平的PCP，進(jìn)行添加回收率測(cè)定實(shí)驗(yàn)。對(duì)每種禽蛋的同一批次樣品，取5枚去殼后勻漿，分別進(jìn)行上述4個(gè)添加量的添加回收實(shí)驗(yàn)，在一天內(nèi)不同時(shí)間用同一標(biāo)準(zhǔn)曲線和一周內(nèi)不同天不同標(biāo)準(zhǔn)曲線重復(fù)測(cè)定6次，取平均值，分別計(jì)算日內(nèi)和日間精密度(CV%)；對(duì)3個(gè)不同批次同一添加量下的15份樣品的回收率測(cè)得結(jié)果統(tǒng)計(jì)其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差作為批間精密度指標(biāo)(批間RSD%)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液提取效率研究 在4種基質(zhì)中嘗試了多種提取液，包括純異辛烷、正己烷、酸化乙腈(含1%甲酸，V/V)、50%酸化乙腈(含1%甲酸，V/V)、1%甲酸水溶液提取。2 g空白試樣中加入1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液100 μL分別加入上述提取液進(jìn)行振蕩提取，之后采用1.5項(xiàng)中前處理?xiàng)l件進(jìn)行凈化，測(cè)得結(jié)果如表1。測(cè)試結(jié)果表明，五氯苯酚(pKa=4.80，logP=4.74)在酸性環(huán)境下屬于極性中強(qiáng)的化合物，在1%甲酸水溶液中的提取效率幾乎為0，而在酸化乙腈溶液中的提取效率超過80%，在正己烷或異辛烷這類極性小的溶劑中提取效率也低于20%。使用酸化乙腈作為提取劑還可沉淀除去樣品中的大部分蛋白質(zhì)和少部分磷脂，既獲得了較高的提取效率，也能去除一部分雜質(zhì)，因此選擇其作為提取劑。

表1 禽蛋中五氯苯酚提取效率研究(%)Tab 1 Research on extraction rate of pentachlorophenol added in eggs (%)

2.2 分散相基質(zhì)的選擇 禽蛋中的干擾雜質(zhì)主要以蛋白質(zhì)和卵磷脂為主，主要通過無水硫酸鎂和氯化鈉進(jìn)行鹽析，其對(duì)基質(zhì)中的蛋白質(zhì)和磷脂類的生物雜質(zhì)也有一定的破壞和沉降能力。乙腈在提取的同時(shí)也通過改變等電點(diǎn)破壞雜質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成其沉淀。經(jīng)過酸化乙腈提取，無水硫酸鎂和氯化鈉進(jìn)行鹽析后離心所得的提取液顏色偏黃，在使用0.1%甲酸稀釋后會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，表明禽蛋中還含有一定量的核黃素等極性雜質(zhì)會(huì)干擾后續(xù)的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)過程中嘗試使用PSA粉末、C18粉末吸附，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在吸附雜質(zhì)的同時(shí)會(huì)造成提取效率的大幅下降，推測(cè)是PSA粉末或C18粉末對(duì)目標(biāo)化合物也有較強(qiáng)的吸附能力，因此，采用酸性氧化鋁對(duì)其進(jìn)行吸附，發(fā)現(xiàn)其可獲得較高的回收率，其比較結(jié)果見表2。最后，將經(jīng)過處理的提取液通過高速離心可以將蛋白、磷脂、核黃素等沉降至下層，取上層清液即可獲得澄明清澈，雜質(zhì)含量較少，適合上機(jī)分析的樣品溶液。

表2 禽蛋中五氯苯酚分散固相凈化效率研究(%)Tab 2 Research on dispersive solid phasepurify effect of pentachlorophenol added in eggs (%)

2.3 質(zhì)譜條件的選擇 在嘗試使用靜電軌道阱質(zhì)譜前本實(shí)驗(yàn)室也嘗試使用串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜對(duì)禽蛋中的PCP殘留量進(jìn)行檢測(cè)，與本方法使用相同的前處理?xiàng)l件，儀器選用Thermo的TSQ Quantivia，ESI-模式，源電壓3200 V，鞘氣壓力340 kPa，輔助氣流速6 L/min，吹掃氣流速0.4 L/min，離子傳輸管溫度 340 ℃，霧化器溫度340 ℃，檢測(cè)模式為選擇反應(yīng)監(jiān)控模式(SRM)，一級(jí)母離子半峰寬設(shè)為0.4 Da，二級(jí)子離子半峰寬設(shè)為0.7 Da。串聯(lián)質(zhì)譜法所得質(zhì)譜圖如圖2(a)所示。其檢測(cè)限可達(dá)2.5 μg/kg，定量限可達(dá)5 μg/kg，在5～250 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。而本方法使用的Thermo Q Exactive為高分辨質(zhì)譜，其可以通過提取精確質(zhì)荷比來獲得特異性良好的色譜質(zhì)譜圖，采用1.4項(xiàng)中儀器條件，可獲得對(duì)照品和樣品的精確質(zhì)量數(shù)質(zhì)譜圖如圖2(b)，以5 ppm的MEW提取Full Scan所得到的數(shù)據(jù)獲得的EIC圖如圖2(c)。

(a) PCP選擇反應(yīng)監(jiān)控質(zhì)譜圖；(b)含PCP 0.1 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(上)與雞蛋添加0.2 μg/kg(下)中全掃描質(zhì)譜圖；(c)含PCP 0.1 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(上)與雞蛋添加0.2 μg/kg(下)提取離子色譜圖圖2 五氯苯酚質(zhì)譜圖Fig 2 Mass spectrometry of pentachlorophenol

2.4 靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按1.6項(xiàng)相應(yīng)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，方法檢測(cè)限含量添加所得特征離子質(zhì)量色譜如圖3所示，結(jié)果20個(gè)空白禽蛋樣品均未檢出陽性結(jié)果，20個(gè)LOD含量添加樣品均檢出陽性，該結(jié)果表明方法的檢出限可在95%置信區(qū)間內(nèi)達(dá)到0.2 μg/kg，其S/N>3；另根據(jù)信噪比S/N>10得出定量限可達(dá)0.5 μg/kg。目前，我國和歐盟對(duì)PCP的限量標(biāo)準(zhǔn)比較嚴(yán)格，德國政府規(guī)定產(chǎn)品含有PCP的成份不得高于5 mg/kg，這條例應(yīng)用于各種曾受PCP及PCP化合物處理過的產(chǎn)品，所有出口到德國市場出售的產(chǎn)品，必須通過以上測(cè)試。而我國相應(yīng)規(guī)定PCP殘留量不得超過0.5 mg/kg(嬰幼兒用品不得超過 0.05 mg/kg)的限量，本方法靈敏度均能滿足兩者要求。

(a)雞蛋(上)、鴨蛋(中)、鴿蛋(下)空白樣品；(b)雞蛋(上)、鴨蛋(中)、鴿蛋(下)添加0.2 μg/kg圖3 禽蛋中五氯苯酚檢測(cè)限含量添加特征離子質(zhì)量色譜圖Fig 3 EIC of pentachlorophenol LOD added in eggs

2.5 基質(zhì)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)所得面積均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表3所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雞蛋、鴨蛋和鴿蛋的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液與溶劑標(biāo)準(zhǔn)品相比都有不同程度的基質(zhì)抑制作用，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量校正。

表3 禽蛋中檢測(cè)五氯苯酚的基質(zhì)效應(yīng)研究Tab 3 Study of matrix effect in determination of PCPin eggs

2.6 線性定量范圍 將所得定量通道色譜圖積分后面積以Y表示，進(jìn)樣濃度以X表示，所得回歸曲線結(jié)果如表4所示，其線性相關(guān)系數(shù)r≥0.995。實(shí)驗(yàn)表明，該方法檢測(cè)PCP在3種禽蛋中0.5～ 100 μg/kg添加含量范圍內(nèi)線性良好。

表4 禽蛋中添加PCP的標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab 4 Standard curve of PCP added in eggs

2.7 準(zhǔn)確度與精密度 按1.9項(xiàng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。結(jié)果表明，添加回收率在74.43%～96.85%范圍內(nèi)，批(日)內(nèi)與批(日)間變異系數(shù)CV%<10%，表明該方法具有較好的準(zhǔn)確度與精密度。

表5 方法準(zhǔn)確度與精密度Tab 5 Accuracy and precision of the method

樣品添加量/(μg·kg-1)批次回收率/%均值/%批(日)內(nèi)CV/%批(日)間CV/%鵝蛋0.52550100Ⅰ85.9684.1980.5984.0676.9383.4082.34.4Ⅱ80.2085.0579.4579.1676.2076.9880.04.0Ⅲ78.0586.7274.8979.6182.6480.5480.45.6IV84.4282.7084.2277.2276.9274.9481.14.6V83.9675.4479.2684.7385.3981.9281.85.2VI77.4374.7978.9481.8076.7677.3577.93.4Ⅰ79.5881.8088.1486.4188.9079.7185.04.8Ⅱ81.3481.0189.8386.4589.0184.0585.54.9Ⅲ79.6188.7084.7787.8682.1683.4884.64.5IV81.4483.9682.7684.6784.1184.2983.41.5V79.6186.7484.2783.4584.0589.1783.63.1VI79.5880.9589.0884.4180.5184.1582.94.7Ⅰ83.6589.0485.7790.1984.9392.8286.73.2Ⅱ91.9091.4485.6691.0587.1084.3089.43.2Ⅲ86.9490.4991.6692.9392.1686.8490.82.6IV92.9190.6887.7990.8988.4285.9490.12.3V83.4491.6292.7888.4687.0984.7888.74.2VI92.9084.7784.8090.2186.1391.2687.84.1Ⅰ94.2193.2596.7694.5391.5896.2194.12.0Ⅱ93.0492.9393.9696.4893.4395.5394.01.6Ⅲ94.7593.0793.2395.0494.5292.2294.11.0IV92.9696.1193.8593.8796.3995.5894.61.6V93.0894.7594.7193.1093.2092.3793.80.9VI92.8992.6793.1991.8393.0791.9092.70.64.53.83.51.5鴿蛋0.52550100Ⅰ85.0879.4976.9984.1083.6382.8081.94.2Ⅱ84.0483.7581.3482.9776.3974.6981.73.9Ⅲ81.4378.7678.3083.9186.9584.0381.94.4IV79.3080.1476.8481.5883.9582.8780.43.3V85.6577.1374.4381.0481.7186.3080.05.4VI82.6277.5179.4181.3785.4182.5481.33.7Ⅰ88.7388.7181.1482.2388.3889.7485.84.4Ⅱ82.6989.7387.2089.0279.7489.7585.75.0Ⅲ84.0583.2679.5188.3581.2688.6583.34.0IV80.5081.3582.1287.1189.7888.4784.24.8V87.4479.6281.5384.7181.6784.2383.03.7VI83.3379.3980.5889.5786.1488.9483.84.9Ⅰ90.9289.5984.7988.5891.3292.8289.02.9Ⅱ83.8992.5291.5489.3989.0385.4889.33.7Ⅲ86.5786.5390.9486.7191.4890.3788.42.9IV90.8885.8688.1988.0384.0190.5787.43.0V84.7888.4788.0389.4791.0686.5388.42.6VI89.3187.6387.1489.7085.4092.5487.82.0Ⅰ93.3495.4491.4694.6295.6692.7394.11.8Ⅱ96.0591.5992.3194.6294.9793.5693.92.0Ⅲ94.6593.8896.3795.9094.9593.3195.21.0IV94.6591.7395.2695.2793.5596.3794.11.6V95.6692.0093.6192.7591.7491.4793.21.7VI94.7295.5992.9795.6294.8096.1894.71.14.04.42.91.7

3 討論與結(jié)論

3.1 高分辨質(zhì)譜檢測(cè)禽蛋中PCP殘留量的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì) 由于五氯苯酚的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在使用ESI源進(jìn)行電離，氬氣進(jìn)行碰撞碎裂時(shí)，其無法在質(zhì)譜中獲得除氯離子以外的碎片，因此，其單個(gè)母離子只能獲得一個(gè)氯離子的特征離子碎片。如果單獨(dú)選取這對(duì)離子對(duì)進(jìn)行分析，其特征性肯定不佳容易受到其他分子量接近的含氯化合物干擾，這也不符合歐盟EC 657/2002中對(duì)于串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜進(jìn)行化合物定性分析的相應(yīng)鑒別點(diǎn)數(shù)最低要求的，其要求串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜定性化合物時(shí)必須滿足擁有一個(gè)母離子和至少兩對(duì)離子對(duì)。在特征碎片離子不易獲取的條件下一般有兩種思路：一是改用其他電離源如EI源，化學(xué)電離源等，但這些源常見于氣相質(zhì)譜，其方法靈敏度難以達(dá)到禽蛋中的PCP殘留檢測(cè)的要求[8-9]；二是改用HRMS，通過獲得精確質(zhì)量數(shù)的分子離子峰來精準(zhǔn)識(shí)別和準(zhǔn)確定量。本方法選用靜電軌道阱質(zhì)譜進(jìn)行分析，其在m/z接近200處分辨率可達(dá)到70000，可以精確識(shí)別PCP的多個(gè)同位素組成的離子簇。通過精確質(zhì)量數(shù)提取m/z =264.83678獲得響應(yīng)最高，特異性最好的選擇離子流色譜圖EIC，其加合物母離子的同位素峰有多個(gè)與基峰響應(yīng)接近的峰，分別選取其與對(duì)照品相應(yīng)離子進(jìn)行質(zhì)量精度比較均小于1 ppm。參照歐盟EC 657/2002中使用高分辨質(zhì)譜(HRMS)定性的判定要求，每個(gè)HRMS獲取的離子可獲得2.5IPs，須2對(duì)以上符合質(zhì)量精度要求的即可符合IPs不小于4的相應(yīng)要求，本方法在難以獲取具有特異性的碎片子離子時(shí)采用了該判斷依據(jù)。因此，本方法在分析禽蛋中的PCP時(shí)相比傳統(tǒng)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有更高的定性準(zhǔn)確性與定量靈敏度。

3.2 靜電軌道阱質(zhì)譜與串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜在禽蛋中檢測(cè)PCP含量的比較 本實(shí)驗(yàn)室同時(shí)也開發(fā)了使用串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜對(duì)禽蛋中PCP進(jìn)行檢測(cè)的方法，該方法采用相同的前處理流程，使用PCP的3對(duì)同位素加合物離子作為母離子，經(jīng)過碰撞碎裂后獲得的氯離子作為子離子，以其中相對(duì)豐度比最高的265>35.5作為定量離子，同時(shí)滿足了定性與定量要求。兩法相比，靜電場軌道阱質(zhì)譜由于是高分辨質(zhì)譜，因此擁有更高的質(zhì)量精度，在使用一級(jí)母離子的精確質(zhì)荷比定量時(shí)相比使用單位分辨質(zhì)譜的離子對(duì)更有優(yōu)勢(shì)，其具有更高的靈敏度和特異性。由于PCP分子結(jié)構(gòu)中只有一個(gè)苯環(huán)為母體，外接5個(gè)氯離子和一個(gè)羥基，其結(jié)構(gòu)導(dǎo)致很難獲取除氯離子外的穩(wěn)定碎片離子，因此串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜在定性準(zhǔn)確性上很容易受到質(zhì)量數(shù)接近的含氯化合物干擾特異性較差，與之相比靜電軌道阱質(zhì)譜在分析禽蛋中的PCP殘留時(shí)通過提取精確質(zhì)量數(shù)來獲得干擾更小，信噪比更高的選擇離子流EIC圖，使其相比串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜具有更高的靈敏度，和同級(jí)別的串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜相比其檢測(cè)限提高了近10倍左右。

本研究建立了檢測(cè)雞蛋、鴨蛋和鴿蛋中五氯苯酚殘留量的超高效液相色譜-靜電軌道阱質(zhì)譜檢測(cè)方法。前處理使用分散固相萃取法，液相部分使用超高效反相色譜柱進(jìn)行分離，靜電軌道阱質(zhì)譜進(jìn)行定性定量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，方法的檢測(cè)限為0.2 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg，在0.5～100 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.995)，添加回收率在74.43%～96.85%，批(日)內(nèi)與批(日)間變異系數(shù)CV%<10%，表明該方法具有較好的靈敏度、準(zhǔn)確度與精密度。