“通督啟神”電針對(duì)SAMP8小鼠認(rèn)知記憶功能及額葉區(qū)炎癥因子表達(dá)的影響*

汪子棟,姜 婧,田會(huì)玲,劉 浩,王 順,楊佳一,任菁鈺,李志剛

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)又稱老年癡呆，是一種以記憶認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)的中樞神經(jīng)退行性疾病，約占癡呆類型的70%[1]，屬最常見(jiàn)的癡呆類型。據(jù)2018世界老年癡呆報(bào)告統(tǒng)計(jì)，全球現(xiàn)有5 000萬(wàn)癡呆癥患者，2/3患有AD，平均每3 s增加1例新患者。到2050年，AD患者可能會(huì)增加到約1.25億[2],已成為當(dāng)今老年人的“流行病”。該病已成為繼心臟病、腫瘤和腦血管疾病之后，致老年人死亡的第4大病因[3]。隨著人口老齡化的加劇，因其高致殘率、高發(fā)病率和高醫(yī)療成本等特點(diǎn)，已成為亟待解決的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一[4]。AD的病理性特點(diǎn)主要以神經(jīng)元外β淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)沉積形成的具有神經(jīng)毒性的老年斑(SP)及神經(jīng)元內(nèi)過(guò)度磷酸化的Tau蛋白導(dǎo)致的神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFTs)為主要病理表現(xiàn)。但近30年來(lái)，以清除上述病理產(chǎn)物為目標(biāo)的臨床藥物實(shí)驗(yàn)不斷失敗[5]。迄今為止，AD的病因及其保護(hù)機(jī)制均未闡釋清楚[6]，尚無(wú)治療AD的特效藥物[7]。越來(lái)越多證據(jù)表明，中樞神經(jīng)炎癥與AD密切相關(guān)，且有研究顯示，中樞炎癥反應(yīng)常伴隨AD的整個(gè)病理過(guò)程中，過(guò)度應(yīng)激免疫炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是加速AD進(jìn)展的重要因素。研究顯示，類固醇、非甾體類抗炎藥物的使用可降低AD罹患率[8]，但也造成患者惡心、嘔吐等胃腸道不良反應(yīng)[9]，限制其廣泛應(yīng)用于AD的治療。而針刺干預(yù)簡(jiǎn)便驗(yàn)廉且無(wú)副作用,已逐步廣泛應(yīng)用于臨床相關(guān)神志疾病的治療?；凇巴ǘ絾⑸瘛?，本研究從行為學(xué)、形態(tài)學(xué)和細(xì)胞分子學(xué)等不同角度，探討“通督啟神”電針?lè)▽?duì)SAMP8小鼠的治療作用，意在初步闡明“通督啟神”針?lè)▽?duì)SAMP8小鼠的額葉區(qū)炎癥反應(yīng)的內(nèi)在作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 日齡220 d，SPF級(jí)雄性，快速老化小鼠(Senescence-accelerated prone mouse 8， SAMP8)30只。SPF級(jí)同源雄性抗衰老小鼠(Senescence-accelerated resistant mouse 1，SAMR1)10只，由北京中科澤晟科技有限公司提供[SCXK(京)2014-0003]。體質(zhì)量約為(22±2)g，均在屏障環(huán)境動(dòng)物室單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、進(jìn)水。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。室溫(20±2)℃，濕度40%～70%，溫度為(23±1)℃，12 h光照，排除飲食及環(huán)境等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的影響。

1.1.2 儀器 鹽酸多奈哌齊(5 mg，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20050978);電針儀(SDZ-V,華佗牌);無(wú)菌針灸針(0.18 mm×13 mm，中研太和);自制小鼠固定套、Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)(WMT-100S成都泰盟);酶標(biāo)儀(Thermo Forma,美國(guó));ECLIPSE80i顯微鏡(尼康，日本);低溫冰箱(海爾,中國(guó))。

1.1.3 試劑 ELISA抗體試劑盒(proteintech):IL-1β(KE10003)、IL-6(KE10007)、IL-10(KE10008)；一抗proteintech：ICAM-1(10020-1-AP)、MMP-9(10375-2-AP)；即用型免疫組化UltraSensitiveTMSP試劑(兔)(KIT-9706，6ml，邁新);DAB顯色試劑盒(DAB-0031，邁新);檸檬酸鈉PBS粉劑;水合氯醛4%多聚甲醛(備KGIHC016CS);生理鹽水。

1.2 分組與干預(yù)方法

SAMP8小鼠24只，按照體質(zhì)量標(biāo)號(hào)后隨機(jī)分為3組，分別為電針組、藥物組和模型組，每組8只，SAMR1小鼠8只作為正常對(duì)照組?！巴ǘ絾⑸瘛彪娽樈M,用自制鼠套將小鼠固定，選取百會(huì)、印堂和人中3個(gè)穴位[10]，用一次性無(wú)菌針灸針。人中穴向鼻尖方向點(diǎn)刺，百會(huì)穴、印堂穴均向上平刺進(jìn)針，進(jìn)針深度約0.3 cm，膠帶固定，針柄連接電針儀，疏波，頻率2 Hz，電壓2 V，電針強(qiáng)度以動(dòng)物頭部微顫為宜，留針15 min。藥物組,將多奈哌齊按0.92 mg/kg劑量灌胃給藥，使用時(shí)將藥片粉碎，用蒸餾水溶解。正常對(duì)照組與AD模型組，在相同飼養(yǎng)條件下不作任何處理，電針組治療時(shí)，對(duì)其他各組小鼠也需抓取，用相同規(guī)格鼠套束縛相同時(shí)間，保證外界處理?xiàng)l件一致。以上各組小鼠操作1次/d，共計(jì)15 d。

1.3 Morris水迷宮行為學(xué)檢測(cè)

1.3.1 隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn) 各組小鼠干預(yù)15 d后，進(jìn)行水迷宮隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)各組小鼠的空間學(xué)習(xí)能力。于120 cm×50 cm的圓形水池中進(jìn)行。在水池壁4個(gè)象限分界處貼不同形狀圖案作為小鼠空間定位標(biāo)識(shí)。在水池第一象限中央處，放入一9.5 cm×28 cm頂端為圓形的平臺(tái)，保持位置固定。實(shí)驗(yàn)前加水至水面高于平臺(tái)1～2 cm，控制水溫(20±2)℃。水池上方安置的攝像機(jī)與圖像采集系統(tǒng)相連，軟件系統(tǒng)會(huì)實(shí)時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將小鼠隨機(jī)從不同象限放入水池中。每次放入后立刻封緊實(shí)驗(yàn)設(shè)備幕布，保持安靜，從圖像采集系統(tǒng)觀測(cè)小鼠情況，減少外界環(huán)境干擾所引起的實(shí)驗(yàn)誤差。讓小鼠自由游泳尋找平臺(tái)。當(dāng)小鼠爬上平臺(tái)停留3 s以上系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)保存記錄小鼠找到平臺(tái)前的各項(xiàng)數(shù)據(jù)。小鼠爬上平臺(tái)后，讓小鼠在平臺(tái)上停留10 s熟悉平臺(tái)。若在60 s內(nèi)未能找到平臺(tái)， 則由操作者將小鼠引導(dǎo)至平臺(tái)上休息10 s,逃避潛伏期記做60 s。然后將小鼠移開(kāi)、擦干。放在白熾燈下烤5 min，放回籠內(nèi)。每只動(dòng)物每天訓(xùn)練4次，連續(xù)訓(xùn)練5 d。本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)選取小鼠第1～3象限入水的平均值作為當(dāng)日的學(xué)習(xí)成績(jī)。

1.3.2 空間探索實(shí)驗(yàn) 為檢測(cè)各組小鼠的空間記憶能力，隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)結(jié)束后第2天，將平臺(tái)撤出。將小鼠由原先平臺(tái)象限的對(duì)側(cè)放入水中，記錄各組小鼠在原平臺(tái)象限游泳路程，作為空間記憶的檢測(cè)指標(biāo)。

1.4 HE病理染色

各組隨機(jī)抓取3只小鼠，心臟灌注4%的多聚甲醛，固定腦組織，全腦修塊，標(biāo)本脫水、透明和石蠟包埋，做冠狀面切片，厚約4 μm。二甲苯脫蠟2×10 min，無(wú)水乙醇洗去二甲苯2×2 min，梯度酒精95%、80%和70%酒精各1 min復(fù)水，蘇木素染色1～5 min，1%鹽酸酒精分化20 s，1%稀氨水返藍(lán)30 s，伊紅染色20 s～5 min，自來(lái)水洗30 s，梯度酒精70%/80%/95%/無(wú)水乙醇，分別依次脫水20 s、30 s、2×1 min和2×2 min，二甲苯3×2 min，晾干，中性樹(shù)膠封片留以觀察。不同觀測(cè)倍數(shù)下，每組隨機(jī)取互不重疊的7個(gè)視野。

1.5 免疫組化法

每組取3塊固定后的腦組織，石蠟包埋，沿冠狀軸于視交叉處切片，厚為4 μm。二甲苯脫蠟15 min/次，共2次，按乙醇濃度為100%/100%(新)/95%/90%/80%/70%依次浸泡水化，5 min/次；枸櫞酸鹽緩沖液水浴加熱至90 ℃后，修復(fù)15 min；待至室溫，PBS洗3次，3 min/次；滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑(邁新試劑1)，室溫孵育10 min；PBS如上洗3次。滴加非特異性染色阻斷劑(邁新試劑2)，室溫封閉10 min；甩掉封閉液，滴加一抗：MMP-9、ICAM-1，4 ℃過(guò)夜；次日，PBS如上洗3次。加生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG聚合物(邁新試劑3)。室溫孵育10 min，PBS如上洗3次。加鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(邁新試劑4)；室溫孵育10 min，PBS如上洗3次，加DAB顯色液，顯色1～2 min；自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染20 s。自來(lái)水沖洗5 min，按照70%/80%/90%/95%/100%/100%(新)乙醇梯度脫水，二甲苯透明2次，各10 min；中性樹(shù)膠封片。使用ECLIPSE80i顯微鏡(尼康)，用Leica系統(tǒng)連接并采集圖像，在光鏡下放大400倍，每組隨機(jī)選取不重疊視野免疫組化染色圖片，拍照統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)指標(biāo)平均光密度值。

1.6 ELISA檢測(cè)額葉區(qū)炎癥因子

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組小鼠稱重后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.4 mL/100 g)，各組隨機(jī)選取6只小鼠斷頭取腦，分離新鮮海馬組織，PBS沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。組織塊稱重，然后剪碎便于勻漿。按組織重量：PBS體積=1∶9的比例勻漿，勻漿時(shí)置于冰上。吸取勻漿液到離心管，按4 ℃ 12 000 r離心5 min，取上清，-80 ℃凍存?zhèn)溆?。?yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)結(jié)果

2.1.1 定向航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表1可見(jiàn)，隨實(shí)驗(yàn)天數(shù)的增加，各組逃避潛伏期時(shí)間均呈下降趨勢(shì)。第1天各組SAMP8小鼠與SAMR1小鼠逃避潛伏期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。同一天各組比較，模型組與正常對(duì)照組比較，其逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，表明SAMP8小鼠作為AD模型較為成功，可見(jiàn)其存在明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙。實(shí)驗(yàn)第1天，與模型組比較，藥物組和電針組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但電針組和藥物組從第3天開(kāi)始，其逃避潛伏期相較模型組顯著縮短(P<0.01)，但兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明兩種干預(yù)療法均能縮短小鼠找到平臺(tái)的時(shí)間，提升了AD模型小鼠空間學(xué)習(xí)能力。研究發(fā)現(xiàn)模型組、電針組在第4天時(shí)逃避潛伏期均有所升高，且電針組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)分析排除設(shè)備故障等原因，在第4天逃避潛伏期有所升高，提示小鼠體力下降。分析原因后發(fā)現(xiàn)是由于SAMP8小鼠訓(xùn)練時(shí)間間隔較短，體力尚未恢復(fù)。故第5天調(diào)整各組小鼠訓(xùn)練時(shí)間及順序后，兩干預(yù)組表現(xiàn)良好，逃避潛伏期較模型組顯著縮小(P<0.05)。

表1 隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)各組小鼠5天逃避潛伏期比較

2.1.2 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表2所示AD模型組原平臺(tái)所在象限游泳路程顯著低于正常組(P<0.01)。與模型組比較，電針組目標(biāo)象限游泳路程明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。藥物組目標(biāo)象限游泳路程亦有所提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 定向航行實(shí)驗(yàn)：目標(biāo)象限運(yùn)動(dòng)路程比較

2.2 各組小鼠額葉HE染色結(jié)果

正常對(duì)照組額葉皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較多，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)較完整，排列有序，胞漿豐富飽滿，胞核染色清晰均勻，邊界清晰，均勻整齊，胞核多呈圓形或橢圓形，細(xì)胞核仁明顯，核膜清晰。與正常對(duì)照組相比，模型組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，錐體細(xì)胞排列紊亂，胞體縮小，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)松散，間距變大，少部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)水腫，有較多細(xì)胞核固縮深染或溶解，存在神經(jīng)細(xì)胞壞死，腦組織衰老跡象明顯。而無(wú)論從細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)上，藥物組、電針組相較于模型組，上述情況均有所改觀。藥物組雖可見(jiàn)少許神經(jīng)細(xì)胞水腫，但細(xì)胞排列較為有序。兩干預(yù)治療組的神經(jīng)細(xì)胞，邊界明顯，核固縮、深染現(xiàn)象減少，均更接近正常對(duì)照組。見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠額葉區(qū)HE染色圖像(400×)

2.3 各組小鼠額葉區(qū)ICAM-1、MMP-9的免疫組化染色結(jié)果

ICAM-1、MMP-9陽(yáng)性表達(dá)呈深黃色或棕色(紅色箭頭所示)，從染色情況看，ICAM-1主要著色于細(xì)胞膜上，MMP9在胞漿與細(xì)胞外基質(zhì)均有表達(dá)。肉眼觀模型組、藥物組陽(yáng)性表達(dá)較為明顯。除陽(yáng)性蛋白表達(dá)外，各組間細(xì)胞排列、分布也出現(xiàn)了明顯差異。正常對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較多，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)較完整，排列有序，組織結(jié)構(gòu)均勻整齊，而模型組則出現(xiàn)明顯的炎性細(xì)胞聚集現(xiàn)象(黑色箭頭所示)，炎癥細(xì)胞增生圍繞血管周圍間隙，形成血管套。而藥物組、電針組，雖也可看出炎性細(xì)胞聚集的趨勢(shì)，但較之模型組有明顯的改善，且兩干預(yù)組的ICAM-1、MMP-9陽(yáng)性蛋白表達(dá)與模型組相比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果詳見(jiàn)圖2～3和表3。

圖2 ICAM-1在各組小鼠額葉區(qū)的染色情況(400×)

圖3 MMP-9在各組小鼠額葉區(qū)的染色情況(400×)

表3 各組小鼠額葉區(qū)ICAM-1、MMP9表達(dá)情況

2.4 各組額葉區(qū)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)

見(jiàn)表4，模型組額葉區(qū)IL-1β、IL-6濃度值顯著高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，藥物組、電針組IL-1β、IL-6濃度值低于模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而IL-10則相反，模型組顯著低于正常對(duì)照組的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與模型組比較，藥物組、電針組可上調(diào)IL-10濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，電針組與藥物組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。從結(jié)果可看出AD模型小鼠額葉區(qū)促炎因子IL-1β、IL-6含量較高，IL-10含量偏低，而電針組與藥物組可顯著改善這一情況。

表4 各組小鼠額葉區(qū)IL-1β、IL-10和IL-6表達(dá)情況

3 討論

額葉的功能與精神、語(yǔ)言和隨意運(yùn)動(dòng)關(guān)系密切。額葉功能障礙涉及多種精神疾病，包括癡呆癥、情緒障礙、自閉癥與強(qiáng)迫癥等[11]，習(xí)慣側(cè)重于額葉對(duì)精神情緒調(diào)節(jié)的研究。而額葉調(diào)節(jié)功能廣泛，其背外側(cè)前額葉、眶額葉和前扣帶回等區(qū)域主要與神經(jīng)行為綜合征有關(guān)[12]，額葉還具有調(diào)控執(zhí)行、工作記憶、優(yōu)先選擇性與持續(xù)關(guān)注力、自我控制和計(jì)劃等能力，與認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶等復(fù)雜行為關(guān)系密切。一般認(rèn)為，海馬是大腦記憶中樞，負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)、處理和儲(chǔ)存獲取的信息，如對(duì)聲、光和味覺(jué)等記憶事件的加工處理，可發(fā)揮“敘述性記憶”、固化長(zhǎng)時(shí)記憶的功能，而額葉在鞏固、存儲(chǔ)新信息方面雖沒(méi)實(shí)質(zhì)性作用。但在時(shí)間先后的記憶上，情景記憶的組織和策略方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用，在記憶輸出的編碼、提取和驗(yàn)證中是必不可少的[13]。額葉邊緣區(qū)和海馬體之間的連接為記憶過(guò)程提供了正面控制，在創(chuàng)造充滿情感的記憶中發(fā)揮作用[14]。故選額葉作為研究目標(biāo)，研究記憶、認(rèn)知能力缺陷的發(fā)病機(jī)理是有一定研究?jī)r(jià)值的。

前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，電針可抑制海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化[15]，利于海馬區(qū)Aβ蛋白的清除，顯示了“通督啟神”電針干預(yù)的有效性，但仍缺少針對(duì)AD小鼠額葉區(qū)MMP-9、細(xì)胞間粘附因子(ICAM-1)等炎癥相關(guān)因子對(duì)認(rèn)知能力影響的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)與AD的發(fā)病機(jī)理密切相關(guān)。作為鈣依賴性的含鋅內(nèi)肽酶，病理狀態(tài)下，在炎性疾病、神經(jīng)退行性疾病(如AD)的調(diào)控中起著重要且復(fù)雜的作用[16]。有AD危險(xiǎn)標(biāo)志物的認(rèn)知健康個(gè)體，即支持AD的腦脊液生物標(biāo)志物T-tau、P-tau和Aβ42水平或存在ApoE4等位基因的個(gè)體，其腦脊液(CSF)中MMP-9水平均高于無(wú)危險(xiǎn)標(biāo)記物的健康個(gè)體[17]。MMP-9的表達(dá)在AD腦內(nèi)升高，且位于神經(jīng)纖維纏結(jié)和淀粉樣斑塊周圍。Aβ可通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)MMP-9的表達(dá)，MMP-9被認(rèn)為參與降解Aβ。為此有研究專門驗(yàn)證，MMP-9是否對(duì)AD模型鼠具有保護(hù)作用,結(jié)果與設(shè)想相反，敲除MMP-9基因或應(yīng)用MMP-9抑制劑的AD模型小鼠其認(rèn)知障礙和神經(jīng)毒性癥狀反而減輕，MMP-9抑制劑在AD治療中具有一定的潛力[18]。細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)，是一種細(xì)胞表面糖蛋白，低濃度持續(xù)存在于白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞膜上。經(jīng)細(xì)胞因子刺激后，濃度可顯著升高。ICAM-1可由IL-1、TNFα誘導(dǎo)，在血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中表達(dá)[19]。ICAM-1是整合素LFA-1的配體，LFA-1是白細(xì)胞上的一種受體。白細(xì)胞被激活后可通過(guò)ICAM-1/LFA-1與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合。ICAM-1可介導(dǎo)細(xì)胞之間或細(xì)胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合，參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、免疫應(yīng)答。在促進(jìn)炎癥細(xì)胞的遷移、黏連、聚積和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)[20-21]中起重要作用。在中樞神經(jīng)中，活化膠質(zhì)細(xì)胞可分泌相關(guān)炎癥因子介導(dǎo)免疫反應(yīng)。IL-1β、Il-6作為免疫反應(yīng)初始調(diào)控因子，生理?xiàng)l件下可刺激免疫細(xì)胞正常增殖、分化，促進(jìn)機(jī)體免疫清除。但在病理?xiàng)l件下，小膠質(zhì)細(xì)胞向M1型極化，過(guò)度的神經(jīng)毒性炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，會(huì)加劇Aβ、NFT等AD病理產(chǎn)物的積聚，增強(qiáng)乙酰堿酯酶的表達(dá)及其活性[22]，使膽堿能神經(jīng)元退化和功能下降。IL-10作為抗炎因子，可以抑制NF-KB的激活，從而抑制小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)通路，下調(diào)炎癥反應(yīng), 可促進(jìn)Aβ清除，促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)[23]。通過(guò)抑制單核/巨噬細(xì)胞增殖、粘附、激活及多種促炎因子的合成、釋放。對(duì)維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫穩(wěn)態(tài)發(fā)揮著重要作用[24]。

AD作為神經(jīng)退行性疾病與全身慢性炎癥密切相關(guān)[25]，出現(xiàn)臨床癥狀15～20年之前，AD病理改變就已經(jīng)開(kāi)始[26]，研究顯示，MMP-9參與了AD的早期發(fā)病，甚至在出現(xiàn)明顯認(rèn)知功能障礙之前。MMPs與神經(jīng)元變性、SP和NFTs等早期AD病理產(chǎn)物密切相關(guān)[17]。由于AD前驅(qū)期臨床癥狀隱匿，不易被確診，而中后期常發(fā)展為不可逆退行性病變，而中樞炎癥反應(yīng)在AD初期就已發(fā)生，故早期抑制中樞炎癥可能是預(yù)防AD的有效舉措。針刺因作用途徑廣泛、操作簡(jiǎn)便和無(wú)毒副作用等特點(diǎn)，宜臨床應(yīng)用推廣用于治療、延緩AD的病理進(jìn)展。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性炎癥的產(chǎn)生與炎性介質(zhì)異常調(diào)控、免疫功能低下有關(guān)。機(jī)體需經(jīng)多種途徑參與慢性炎癥的病理、生理過(guò)程。而針刺因其整體性、雙向性和品質(zhì)性調(diào)節(jié)機(jī)體的特點(diǎn)[27]?？赏ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)[28]，維持中樞系統(tǒng)免疫穩(wěn)態(tài)，保護(hù)神經(jīng)組織。額葉在記憶、認(rèn)知行為中也發(fā)揮重要作用，其負(fù)責(zé)有關(guān)情境時(shí)序記憶、執(zhí)行效力和保持專注等功能在認(rèn)知過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。AD患者也常伴有抑郁、焦慮等情緒和性格相關(guān)的行為改變，提示額葉與AD發(fā)病可能存在一定聯(lián)系。而有關(guān)AD的治療，從額葉角度切入的研究仍然較少。

本研究結(jié)果表明,“通督啟神”電針?lè)捎行Ц纳芐AMP8小鼠認(rèn)知障礙，可能是通過(guò)抑制額葉區(qū)ICAM-1、MMP-9的表達(dá)，抑制免疫細(xì)胞的過(guò)度增生粘附、遷移和聚積，維持額葉區(qū)中樞炎癥反應(yīng)的穩(wěn)態(tài)，減緩過(guò)度炎癥反應(yīng)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，從而改善SAMP8小鼠的認(rèn)知記憶能力。但本實(shí)驗(yàn)研究仍缺乏針對(duì)額葉特有功能如：執(zhí)行效力、保持專注和層次性劃分任務(wù)等功能的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。故后期需更加科學(xué)完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，客觀準(zhǔn)確地反應(yīng)SAMP8小鼠認(rèn)知能力的變化，深入探究免疫調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)額葉功能在AD進(jìn)程中的作用，以期對(duì)AD的研究取得新進(jìn)展。