頭部電針對腦梗死大鼠尿液代謝組學(xué)影響的研究*

路思宇，王東巖，楊海永，麻聰聰，陳 崇，趙亞楠

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

腦卒中是全球范圍內(nèi)引起死亡和殘疾的主要原因。我國中風(fēng)發(fā)病率因人口老齡化的加劇逐年升高，其中，缺血性卒中，即腦梗死，占70%以上[1]。隨著腦卒中防治手段的逐步發(fā)展，腦梗死的死亡率已有所下降。然因其殘存神經(jīng)功能缺損患者的數(shù)量仍居高不下，致使患者因肢體和心理障礙難以適應(yīng)并回歸社會，對患者及其家庭產(chǎn)生巨大負(fù)擔(dān)。尋找有效的治療方法是腦梗死一項亟待解決的問題。目前，臨床上治療腦梗死主要通過藥物(包括溶栓治療)、針灸和推拿等中醫(yī)療法以及康復(fù)治療、手術(shù)等。電針作為腦缺血的有效治療手法，已得到學(xué)者們的廣泛證實(shí)[2-3]，但其具體的治療機(jī)制尚未闡明。代謝組學(xué)是研究生命系統(tǒng)被干擾后(如病理生理刺激或基因改變)其代謝產(chǎn)物的種類、數(shù)量與其變化規(guī)律的一門跨領(lǐng)域?qū)W科[4]。代謝組學(xué)通過對生物樣本中代謝產(chǎn)物的快速、全面分析來闡明其生理或病理途徑[5]。與基因組、轉(zhuǎn)錄組或蛋白質(zhì)組的底物不同，代謝組的產(chǎn)物包含了大量化學(xué)性質(zhì)不同的化合物，如氨基酸、神經(jīng)遞質(zhì)、鹽、酸和脂類等[6]。這使得代謝組學(xué)可以采用自上而下的策略，從代謝網(wǎng)絡(luò)的最終產(chǎn)物反映生物體的功能，并從整體的角度理解外在干預(yù)對于整個系統(tǒng)的代謝造成的影響。這種性質(zhì)與中醫(yī)的整體觀念相互契合，對于中醫(yī)證候、預(yù)防醫(yī)學(xué)、療效評價和針灸等循證醫(yī)學(xué)的科學(xué)表達(dá)提供了良好契機(jī)[7]。代謝組學(xué)也可以通過分析代謝紊亂和腦梗死之間的內(nèi)在聯(lián)系，得出腦梗死的相關(guān)代謝產(chǎn)物及通路，進(jìn)而揭示其致病的內(nèi)在靶點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜與四級桿-飛行時間質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF-MS)對MCAO模型大鼠尿液進(jìn)行非靶向代謝組學(xué)研究，探究腦梗死大鼠尿液中代謝標(biāo)志物的變化。并通過對標(biāo)志物代謝通路的分析，探究電針治療腦梗死的作用靶點(diǎn)和代謝途徑。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

乙腈(德國Merck公司);甲醇(Sigma公司);乙酸銨(Sigma公司);AB Triple TOF 5600/6600質(zhì)譜儀(美國Waters公司);Agilent 1290 Infinity LC超高壓液相色譜儀(美國Waters公司);ACQUITY UPLC BEH Amide色譜柱(美國Waters公司);低溫高速離心機(jī)(德國Eppendorf公司);生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)BL-420F(成都泰盟軟件有限公司);電子天平(德國Siemens公司);針灸針(貴州安迪藥械有限公司);MCAO栓線2432-A4(北京百農(nóng)科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

造模前2周進(jìn)行大鼠的左前肢抓取預(yù)訓(xùn)練，每日1次，每次20 min[8]。將36只大鼠隨機(jī)分為3組：空白組、模型組和電針組，每組各12只。

1.4 造模

運(yùn)用線栓法制備大腦中動脈梗阻(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)大鼠模型。先進(jìn)行稱重，后采用100 g/L水合氯醛(3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉，將頸部正中部位剃毛并消毒，開長度約1～2 cm的切口，逐層剝離，輕輕撕開動脈鞘，分離右側(cè)頸總、頸內(nèi)和頸外動脈，于血管分叉近端結(jié)扎頸外動脈，遠(yuǎn)端結(jié)扎頸總動脈，在分叉處下方夾閉，于下方開一切口，緩慢插入栓線并固定，去動脈夾，使栓線進(jìn)入頸內(nèi)動脈至約18 mm，固定并減除多余結(jié)扎線，沖洗切口縫合并消毒[9]。將術(shù)后大鼠放置于環(huán)境清潔舒適的鼠籠內(nèi)，于白熾燈下加熱保暖，在2 h后評估是否造模成功[10]。

1.5 電針治療方法

選取百會穴(兩耳尖連線與頭正中線相交處)、前神聰穴(兩耳尖連線與頭正中線相交處前5 mm)[11]，針刺時向病灶側(cè)透刺15 mm，頻率刺激器選擇連續(xù)波，刺激頻率2 Hz，電流1 mA，每日1次，每次20 min，連續(xù)治療14 d。其余各組與電針組同一時間進(jìn)行綁縛。

1.6 行為學(xué)評分

1.6.1 Zea-Longa評分 大鼠蘇醒后2 h采用Zea-Longa評分[12]對其神經(jīng)功能缺損情況進(jìn)行評價，大鼠得分越高神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。排除0分和4分的大鼠，將1～3分大鼠納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見表1。

表1 Zea-Longa評分

1.6.2 Ludmila Belayev評分 采用Ludmila Belayev 12分評分法[13]，分別在治療后1 d、3 d、5 d、7 d和14 d對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分。Ludmila Belayev 評分法包括姿勢反射實(shí)驗(yàn)和肢體放置實(shí)驗(yàn)兩部分。

1.6.2.1 姿勢反射測驗(yàn) 0:無明顯神經(jīng)功能缺失；1:梗死對側(cè)肢體屈曲；2:側(cè)推試驗(yàn)陽性。

媽媽印象最深刻的就是吃紅薯，她告訴我，早上吃的是“整豬整羊”，意思是光吃蒸紅薯，中午是“芝麻拌糖”，意思是在飯上蒸一點(diǎn)紅薯，晚上則是“吹吹打打”，吃的是煨紅薯，需要拍灰吹打……

1.6.2.2 肢體放置試驗(yàn) 包括視覺亞實(shí)驗(yàn)、觸覺亞實(shí)驗(yàn)和本體覺亞實(shí)驗(yàn)。視覺亞實(shí)驗(yàn)：即前方刺激，實(shí)驗(yàn)者將動物握于手中，使其前爪懸空，自桌面上方10 cm處向桌面緩慢斜線靠近(此時桌子位于大鼠前方)，大鼠正常反應(yīng)為前肢即刻抓向桌面，損傷大鼠則表現(xiàn)為肢體反應(yīng)延遲。0:動物肢體放置反應(yīng)正常；1:反應(yīng)延遲但不超過2 s；2:反應(yīng)延遲且超過2s。側(cè)方刺激，此時桌子位于動物側(cè)方，其余實(shí)驗(yàn)方法及評分標(biāo)準(zhǔn)同前方刺激。觸覺亞實(shí)驗(yàn)：將動物雙眼遮住，并使其前爪懸空，此時大鼠既看不見，也不能用胡須觸及桌面，用其前爪背側(cè)輕觸桌面，刺激深度僅達(dá)皮膚和毛發(fā)。動物反應(yīng)及評分同視覺亞實(shí)驗(yàn)，觸覺刺激同樣分前方及側(cè)方刺激。本體覺亞實(shí)驗(yàn)：操作及評分同觸覺亞實(shí)驗(yàn)，僅刺激深度不同。本體覺亞實(shí)驗(yàn)給予前爪較大壓力，刺激深達(dá)肌肉及關(guān)節(jié)。該亞實(shí)驗(yàn)只有前方刺激。

1.7 尿液樣品收集與制備

治療14 d后，收集空白組、假手術(shù)組和電針組大鼠尿液各1 mL，3 000 r/min離心10 min后取上清液0.5 mL，儲存于-80℃中備用。從-80℃中取出樣本，于4℃中緩慢溶解，分別取各組樣本100 μL，加入400 μL預(yù)冷的甲醇乙腈溶液(1∶1)，渦旋60 s，-20℃放置1 h沉淀蛋白，14 000 rcf，4℃離心20 min，取上清冷凍干燥，進(jìn)行UPLC/MS分析。

1.8 色譜質(zhì)譜條件

1.8.1 色譜 色譜柱(1.7 μm, 2.1 mm×100 mm)柱溫為25℃，流速為0.3 mL/min。流動相由A(水+25 mM乙酸銨+25 mM氨水)和B(乙腈)組成。梯度洗脫程序：0～0.5 min，95% B；0.5～7 min，B從95%線性變化至65 %；7～8 min，B從65%線性變化至40%；8～9 min，B維持在40%；9～9.1 min，B從40%線性變化至95%；9.1～12 min，B維持在95%。整個分析過程中樣品置于4℃自動進(jìn)樣器中。

1.8.2 質(zhì)譜 在電噴霧電離(ESI)正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行質(zhì)譜分析。ESI源條件：Ion Source Gas1(Gas1): 40, Ion Source Gas2(Gas2): 80, Curtain gas(CUR): 30, source temperature: 650℃，正負(fù)兩種離子模式IonSapary Voltage Floating (ISVF)±5000 V；樣本的二級質(zhì)譜通過高靈敏度數(shù)據(jù)相關(guān)采集模式獲取，正負(fù)兩種模式去簇電壓：±60 V，碰撞能量：(35±15)eV，數(shù)據(jù)相關(guān)采集設(shè)置為排除4 Da內(nèi)的同位素，每循環(huán)監(jiān)測候選10個離子。數(shù)據(jù)采集是按Mass Range進(jìn)行分段，50～300，290～600，590～900，890～1 200，從而擴(kuò)大二級譜圖的采集率，每個方法每段采集4個重復(fù)。

1.9 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

首先將原始數(shù)據(jù)通過ProteoWizard轉(zhuǎn)換為通用數(shù)據(jù)格式(mzXML)文件，然后采用XCMS程序(http://metlin.scripps.edu/download/)對代謝物離子峰進(jìn)行提取、檢測和對齊，得出可視化數(shù)據(jù)矩陣，包括樣品名稱、保留時間、m/z和峰面積。采用SIMCA軟件(v.12.0)對上述數(shù)據(jù)進(jìn)行無監(jiān)督主成分分析(PCA)，有監(jiān)督偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)等多維統(tǒng)計分析。再采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行單變量統(tǒng)計分析。根據(jù)從UPLC-Q/TOF-MS獲取的總離子流色譜圖(Total ion chromatogram, TIC)得到分子質(zhì)量，結(jié)合MS/MS信息，在人類代謝組學(xué)數(shù)據(jù)庫(Human Metabolome Database, HMDB) (http://www.hmdb.ca/)及KEGG數(shù)據(jù)庫(http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html)進(jìn)行檢索和比較分析。

2 結(jié)果

2.1 電針對大鼠行為學(xué)的影響

造模后各時間點(diǎn)，與空白組比較，模型組和電針組評分均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。隨著模型組缺血時間的延長，評分逐漸下降，表明腦缺血具有一定程度的自愈能力。造模后第1、3天，與模型組比較，電針組評分無顯著改變，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；造模后第5、7、14 天，與模型組比較，電針組評分顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。此表明隨著缺血時間的延長，模型組神經(jīng)功能改善不明顯，而電針組在5 d后顯著好轉(zhuǎn)。見表2、圖1。

表2 各組大鼠Ludmila Belayev評分的比較

圖1 電針對腦梗死大鼠行為學(xué)影響變化示意圖

2.2 大鼠尿液代謝組學(xué)結(jié)果分析

2.2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制 各組大鼠尿液樣本通過UHPLC-Q-TOF MS處理分析后，得到每個樣品的質(zhì)譜圖，通過對質(zhì)譜圖離子的重疊比較，得出各組樣品的總離子流譜圖(TIC)。其中橫坐標(biāo)表示時間，縱坐標(biāo)表示離子強(qiáng)度值。結(jié)果顯示，正負(fù)離子模式下大鼠各組尿液樣本中各色譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度和保留時間基本重疊，說明實(shí)驗(yàn)過程中儀器導(dǎo)致的誤差較小，數(shù)據(jù)可靠。見圖2。

圖2 正負(fù)離子模式尿液QC樣本總離子流圖

2.2.2 總體樣本主成分分析 采用XCMS軟件對正負(fù)離子模式下尿液代謝物的離子峰進(jìn)行提取，將所有尿液樣本和QC樣本所提取得到的峰經(jīng)過Pareto-scaling軟件處理得到總體樣本的PCA模型。通過主成分分析可知，各組之間有分離趨勢，空白組與模型組沿t[2]軸分離，說明兩組尿液的代謝物之間存在一定差異。而電針組分布基本介于空白組與模型組之間，說明電針治療可以發(fā)生代謝物的改變，且有回調(diào)的趨勢。見圖3。

注：uB：空白組;uC：模型組;uD：電針組。

2.2.3 空白組與模型組的尿液代謝物比較 比較空白組與模型組尿液樣本的PLS-DA得分圖，結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.906，Q2cum=0.629，負(fù)離子模式下R2Ycum=0.923，Q2cum=0.605，兩組樣本分別組內(nèi)聚攏，組間明顯分離，表明模型穩(wěn)定可靠。通過對數(shù)據(jù)的進(jìn)一步分析，比較空白組與模型組兩組尿液樣本OPLS-DA的得分圖，結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.906，Q2cum=0.655；負(fù)離子模式下R2Ycum=0.923，Q2cum=0.628，以兩組代謝樣本的主成分作為參考， 空白組與模型組組內(nèi)聚集，組間沿t0[1]軸明顯分離，兩組尿液樣本中代謝產(chǎn)物存在顯著性差異，能夠被明顯區(qū)分，說明MCAO損傷導(dǎo)致大鼠體內(nèi)代謝功能紊亂，尿液中代謝物的含量發(fā)生改變。見圖4～5。

注：uB：空白組;uC：模型組。

注：圖uB：空白組;uC：模型組。

2.2.4 模型組與電針組的尿液代謝物比較 比較模型組與電針組尿液樣本的PLS-DA得分圖，結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.874，Q2cum=0.533，負(fù)離子模式下R2Ycum=0.874，Q2cum=0.537，表明模型穩(wěn)定可靠，但組間分離不夠明顯，所以通過OPLS-DA對數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步分析。比較模型組與電針組兩組尿液樣本OPLS-DA的得分圖，結(jié)果顯示正離子模式下R2Ycum=0.814，Q2cum=0.599；負(fù)離子模式下R2Ycum=0.814，Q2cum=0.577，以兩組代謝樣本的主成分作為參考，模型組與電針組組內(nèi)聚集，組間沿t0[1]軸明顯分離，兩組尿液樣本中代謝產(chǎn)物存在顯著性差異，能夠被明顯區(qū)分，說明電針治療導(dǎo)致大鼠體內(nèi)代謝功能和代謝物的含量發(fā)生改變。見圖6～7。

注：uC：模型組;uD：電針組。

注：uC：模型組;uD：電針組。

2.2.5 差異代謝物和代謝途徑的篩選 通過空白組與模型組間篩選出具有的差異代謝物，進(jìn)一步通過多維統(tǒng)計分析VIP>1與單變量統(tǒng)計分析P value<0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，篩選出MCAO模型大鼠尿液差異代謝標(biāo)志物95個，其中，上調(diào)的有65個，下調(diào)的有30個。再對電針組與模型組的代謝物進(jìn)行篩選，并結(jié)合MCAO模型組大鼠差異代謝物的信息，篩選出電針干預(yù)后回調(diào)的代謝物39個，其中上調(diào)的代謝物有11個，下調(diào)的代謝物有28個。差異代謝物基本信息見表3。

通過比較分析空白組與模型組、模型組與電針組大鼠尿液的差異代謝物，發(fā)現(xiàn)回調(diào)的39個差異代謝物主要參與腦組織的能量代謝、氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝和神經(jīng)遞質(zhì)代謝等。通過KEGG數(shù)據(jù)庫分析這些代謝物主要參與的代謝通路有檸檬酸循環(huán)、精氨酸代謝、嘌呤代謝、谷氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、苯丙氨酸代謝、牛磺酸和次?；撬岽x及神經(jīng)遞質(zhì)代謝等。

3 討論

頭部腧穴是腦缺血臨床治療中的常用穴、首選穴。本研究選取百會穴、前神聰穴進(jìn)行治療，百會穴位于督脈，《難經(jīng)》曰其為“陽脈之?！??！稌樉膶W(xué)》曰：“百會者，五臟六腑奇經(jīng)三陽百脈之所會，故名百會?！鼻吧衤斞樗纳衤斞ㄖ?，是經(jīng)外奇穴，其與百會同位于巔頂，可“清利頭目，醒腦開竅”。兩穴又均位于腦部，腦為“髓?！薄霸裰薄Ｒ虼?，針刺百會、前神聰穴可通陽助陽、益氣生髓。從解剖的角度看，百會穴為頂中線與頂顳后斜線的起點(diǎn)，前神聰穴為頂顳前斜線的起點(diǎn)，頂顳前斜線與頂顳后斜線為大腦皮層頂葉與顳葉的投影區(qū)，頂顳前斜線對應(yīng)中央前回司運(yùn)動，頂顳后斜線對應(yīng)中央后回司感覺，針刺此區(qū)域可能促進(jìn)大腦中動脈供血，達(dá)到激發(fā)患者感覺、運(yùn)動中樞功能的目的。

表3 各組間尿液差異代謝物基本信息

電針組在治療后行為學(xué)評分明顯優(yōu)于模型組，說明電針治療對腦梗死大鼠具有顯著療效。通過代謝組學(xué)的檢測方法，進(jìn)一步比較了各組間的差異代謝物及代謝途徑。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腦梗死后，代謝物質(zhì)的改變可以通過電針治療發(fā)生回調(diào)，使疾病病程發(fā)生改變，達(dá)到康復(fù)的目的。

3.1 能量代謝

正常情況下大鼠腦組織的能量代謝主要為有氧代謝，在有氧條件下糖酵解生成的丙酮酸在線粒體內(nèi)發(fā)生三羧酸循環(huán)(Tricarboxylic acid cycle, TCA)生成CO2。當(dāng)腦梗死發(fā)生時，由于腦供血受阻，TCA因底物缺乏而受到抑制，導(dǎo)致能量合成受阻[14]，糖酵解生成的丙酮酸發(fā)生氧化磷酸化，在乳酸脫氫酶的作用下形成乳酸(DL-lactate)[15-16]。通過對比,空白組與模型組大鼠體內(nèi)尿液代謝物，發(fā)現(xiàn)模型組乳酸水平較空白組明顯升高，說明腦梗死后腦組織能量供應(yīng)發(fā)生改變，有氧糖酵解減少，無氧糖酵解增加。電針組尿液中的乳酸水平較模型組顯著下降，說明電針干預(yù)能夠改善腦組織TCA循環(huán)的能量供應(yīng)模式，促進(jìn)腦梗死后腦組織的能量供應(yīng)，使糖酵解模式發(fā)生轉(zhuǎn)變，這可能是由于電針促進(jìn)腦組織血流、加快缺血區(qū)的血液供應(yīng)所導(dǎo)致的。蘋果酸(Citramalic acid)為TCA 循環(huán)的中間產(chǎn)物，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中含有蘋果酸脫氫酶，一部分丙酮酸能夠通過蘋果酸代謝進(jìn)行供能[17]，蘋果酸的含量在模型組中顯著降低，電針組中明顯回調(diào)，提示蘋果酸對腦梗死大鼠具有一定的腦保護(hù)作用。

3.2 氨基酸代謝

氨基酸是人體代謝的重要能量來源，一般在體內(nèi)具有兩個代謝途徑。一條途徑為合成生物體特有的蛋白質(zhì)、多肽或其它含氮物質(zhì)。另一條途徑通過脫氨、轉(zhuǎn)氨或脫羧作用被水解生成α-酮酸、胺類及二氧化碳。腦梗死后大鼠血清代謝物中大量氨基酸含量發(fā)生改變，模型組與空白組相比，3-甲基組氨酸(3-Methylhistidine)、N-乙?；?L-天冬氨酸(N-Acetyl-L-aspartic acid)、左旋瓜氨酸(L-Citrulline)、賴氨酸-亮氨酸(Lys-Leu)、NG, NG-二甲基-L-精氨酸(ADMA)[G,NG-dimethyl-L-arginine(ADMA)]和苯丙氨酸-脯氨酸(Phe-Pro)含量升高，N-乙酰-L-谷氨酸(N-Acetyl-L-glutamate)、N6-甲基-L-賴氨酸(N6-Methyl-L-lysine)和N-乙酰基-L-組氨酸(N-Acetyl-L-Histidine)等氨基酸含量降低。模型組和電針組相比，上述氨基酸均發(fā)生回調(diào)。谷氨酸和天冬氨酸為興奮性氨基酸，是導(dǎo)致缺血性卒中發(fā)生的關(guān)鍵化合物，它參與缺血腦組織細(xì)胞的級聯(lián)反應(yīng)，并影響缺血神經(jīng)元的壞死與凋亡?？瞻捉M與模型組相比，模型大鼠尿液代謝物中谷氨酸和天冬氨酸含量明顯升高，而電針組谷氨酸和天冬氨酸的含量發(fā)生回調(diào)。苯丙氨酸是生物體合成蛋白質(zhì)的主要物質(zhì)來源，水解能夠產(chǎn)生延胡索酸參與TCA循環(huán)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)尿液樣本中空白組苯丙氨酸的相對含量較模型組明顯升高，且電針組與模型組相比出現(xiàn)回調(diào)，說明苯丙氨酸代謝可能在腦梗死過程中發(fā)揮重要作用。

3.3 脂質(zhì)代謝

花生四烯酸是脂肪酸的代謝產(chǎn)物，它能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生IL-6，并導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)疾病炎癥反應(yīng)[19]。腦梗死后腦血管的通透性增加，引起炎癥介質(zhì)釋放、組織水腫，炎癥介質(zhì)刺激激活細(xì)胞膜上的磷脂酶，導(dǎo)致甘油磷脂發(fā)生水解反應(yīng)產(chǎn)生溶血卵磷脂及花生四烯酸等代謝產(chǎn)物。腦缺血引起腦組織中脂肪酸代謝紊亂，造成腦組織中ATP合成障礙、消耗增加，引起花生四烯酸的代謝紊亂。電針干預(yù)后，大鼠尿液中的鞘磷脂(Sphingomyelin)、磷酸膽堿(Phosphorylcholine)的含量發(fā)生回調(diào)。多種膽堿代謝物含量也出現(xiàn)回調(diào)，說明電針干預(yù)能夠促進(jìn)腦梗死大鼠脂質(zhì)代謝趨于正常。

本實(shí)驗(yàn)選取大鼠尿液為研究樣本因其是生物整體代謝網(wǎng)絡(luò)的最終產(chǎn)物，能夠從宏觀角度集中把握病理生理過程對生物體產(chǎn)生的影響，也恰好與“整體觀念”的思想相契合，且尿液取樣方便、安全無創(chuàng)，是基礎(chǔ)研究中良好的體液標(biāo)本。綜上所述，頭部電針對腦梗死大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)具有明顯的促進(jìn)作用，其機(jī)制可能與電針調(diào)控三羧酸循環(huán)、氨基酸代謝和花生四烯酸代謝等途徑有關(guān)，為電針治療腦梗死作用靶點(diǎn)的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但電針治療腦梗死的具體機(jī)制還未完全闡明，尿液代謝物樣本也存在一定的不穩(wěn)定性，有待通過其它方法進(jìn)一步研究。