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    Ras效應(yīng)因子-1在上皮性卵巢腫瘤中表達(dá)水平及意義

    2021-05-10 03:40:40
    臨床軍醫(yī)雜志 2021年4期
    關(guān)鍵詞:原癌基因結(jié)構(gòu)域上皮

    鄭 樂

    中國醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院(遼寧省腫瘤醫(yī)院) 婦科,遼寧 沈陽 110042

    卵巢惡性腫瘤在女性生殖器官惡性腫瘤中死亡率居第1位,病因尚未明確。惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展通常是一個(gè)多因素、多階段的過程,包括原癌基因激活、腫瘤抑制基因失活等。有研究表明,Ras基因?yàn)樵┗?,其激活突變參與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程,如膀胱尿路上皮癌[1]、胃癌[2]、肺癌[3]、肝癌[4]等。Ras效應(yīng)因子-1(Ras interactor-1,RIN1)是人體內(nèi)的一個(gè)特征性Ras效應(yīng)因子[5],能夠直接激活A(yù)BL絡(luò)氨酸激酶及RAB5家族的GTP酶[6],還可參與表皮生長因子受體的內(nèi)吞作用[7]。本研究旨在探討RIN1在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)水平及意義?,F(xiàn)報(bào)道如下。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象 收集遼寧省腫瘤醫(yī)院自2017年1月至2018年12月收治的150例接受手術(shù)治療患者的新鮮卵巢組織標(biāo)本。150例患者中,正常卵巢30例(A組),上皮性卵巢良性腫瘤30例(B組),上皮性卵巢交界性腫瘤30例(C組),上皮性卵巢惡性腫瘤60例(D組)。D組中,病理分期Ⅰ+Ⅱ期30例,Ⅲ+Ⅳ期30例;分化程度高-中分化30例,低分化30例?;颊呒捌浼覍倬炇鹬橥鈺?。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 儀器及試劑 RIN1、β-actin兔抗人多克隆抗體,RIN1、β-actin引物,實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒,PVDF膜(北京博奧森公司);SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(南京凱基生公司);電泳儀,實(shí)時(shí)定量PCR儀等。

    1.3 Western Blot法檢測RIN1蛋白表達(dá)水平 組織塊稱質(zhì)量,提取組織中核蛋白并測定其含量,電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,加一抗,孵育PVDF膜,4℃過夜,加二抗,室溫振蕩孵育,Western Blot試劑盒顯色,凝膠成像系統(tǒng)分析條帶灰度值并進(jìn)行比較。

    1.4 PCR法檢測RIN1 mRNA表達(dá)水平 提取標(biāo)本總RNA,采用Takata等方法進(jìn)行PCR檢測。RIN1上游引物為5′-GGCAGCAGAGGAGTAGCTTGA-3′,RIN1下游引物為5-GCTTGCTGGCGCTAAAAGG-3′,β-actin上游引物為5-TTAGTTGCGTTACACCCTTTC-3′,β-actin下游引物為5-ACCTTCACCGTTCCAGTTT-3′。采用2-△△Ct法分析結(jié)果,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    2 結(jié)果

    2.1 RIN1蛋白表達(dá)水平比較 A組、B組、C組、D組RIN1蛋白相對表達(dá)量分別為(0.096 2±0.026 2)、(0.371 0±0.028 3)、(0.564 3±0.056 7)、(0.732 0±0.098 2),兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。D組中,Ⅲ+Ⅳ期RIN1蛋白相對表達(dá)量高于Ⅰ+Ⅱ期[(0.813 0±0.061 5)比(0.651 0±0.047 6)],低分化RIN1蛋白相對表達(dá)量高于高-中分化[(0.785 0±0.087 9)比(0.679 0±0.078 0)],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    圖1 Western Blot法檢測RIN1蛋白表達(dá)水平

    2.2 RIN1 mRNA表達(dá)水平比較 A組、B組、C組、D組RIN1 mRNA相對表達(dá)量分別為(3.890 0±0.440 5)、(5.517 0±0.281 7)、(7.593 0±0.636 8)、(9.722 0±1.177 0),兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。D組中,Ⅲ+Ⅳ期RIN1 mRNA相對表達(dá)量高于Ⅰ+Ⅱ期[(10.710 0±5.248 0)比(8.733 0±0.723 7)],低分化RIN1 mRNA相對表達(dá)量高于高-中分化[(10.450 0±0.895 9)比(8.99 0 0±0.953 9)],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    3 討論

    惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等與原癌基因、抑癌基因的突變、失調(diào)有關(guān)。RIN1作為Ras的效應(yīng)因子,在細(xì)胞中廣泛存在。RIN1定位于11q13.2,主要功能結(jié)構(gòu)域包括ABL結(jié)合結(jié)構(gòu)域、Ras結(jié)合結(jié)構(gòu)域、與空泡蛋白分選蛋白相關(guān)的鳥苷酸交換因子等[8-9]。其主要功能如下:通過與H-Ras競爭性結(jié)合,干擾其信號傳導(dǎo),抑制H-Ras介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化[5];具有Rab5a GTPase的GEF活性,通過與Rab5直接結(jié)合,泛素化Ras,介導(dǎo)表皮生長因子受體內(nèi)陷降解,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)吞[10]。Inoue等[11]研究報(bào)道,RIN1可能通過Ras-Erk信號通路影響結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展。Wang等[3]研究表明,在非小細(xì)胞肺腺癌組織中,RIN1的表達(dá)水平與組織分化程度、腫瘤臨床病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān),高表達(dá)組患者預(yù)后更差。

    本研究結(jié)果顯示:上皮性卵巢惡性腫瘤的RIN1蛋白相對表達(dá)量、RIN1 mRNA相對表達(dá)量均明顯高于正常卵巢組織、上皮性卵巢良性腫瘤、上皮性卵巢交界性腫瘤,且上皮性卵巢惡性腫瘤Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期,低分化高于高-中分化。這提示:RIN1可促進(jìn)上皮性卵巢腫瘤細(xì)胞增殖,并抑制凋亡;RIN1表達(dá)水平與腫瘤的臨床病理分期、分化程度相關(guān)。

    綜上所述,隨著上皮性卵巢腫瘤惡性程度上升,RIN1表達(dá)明顯增強(qiáng),RIN1在上皮性卵巢惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要的促進(jìn)作用。RIN1可成為判斷腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的重要指標(biāo),后續(xù)深入研究RIN1促進(jìn)上皮性卵巢惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制,有望為卵巢癌提供新的治療靶點(diǎn)。

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