肺腺癌患者胸腔積液程序性死亡配體-1表達(dá)與臨床病理及表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變關(guān)系研究

馬 麗， 吳羽華， 張新勇， 王敬慧， 張樹才， 胡 瑛

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，北京 101149

目前，肺癌發(fā)病率與病死率均居于惡性腫瘤首位，且以非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占比最高[1]。近年來，程序性死亡配體-1(programmed cell death-ligand 1，PD-L1)抑制劑免疫療法在NSCLC治療方面顯示出良好的臨床獲益，通過誘導(dǎo)特異性T淋巴細(xì)胞活化抑制介導(dǎo)抗腫瘤作用，而PD-L1表達(dá)水平是指導(dǎo)臨床用藥的重要生物標(biāo)志物[2]。PD-L1表達(dá)水平檢測(cè)主要依靠組織學(xué)標(biāo)本，但對(duì)于部分肺癌患者無法獲得足夠量標(biāo)本[3]。有報(bào)道顯示，一半以上肺腺癌患者可進(jìn)展出現(xiàn)胸腔積液，此類標(biāo)本制備成細(xì)胞學(xué)蠟塊后可通過免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry，IHC)或基因檢測(cè)進(jìn)行病理診斷和分子分型，為診斷和治療提供依據(jù)[4]。本研究旨在探討肺腺癌患者PD-L1表達(dá)水平與臨床病理資料及表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因突變的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院自2016年1月至2019年12月收治的120例肺腺癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)胸腔積液細(xì)胞學(xué)蠟塊病理組織學(xué)確診肺腺癌；腫瘤細(xì)胞含量>30%；腫瘤細(xì)胞數(shù)>100個(gè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；胸腔積液細(xì)胞學(xué)標(biāo)本質(zhì)量欠佳無法確診。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 收集所有患者的胸腔積液50～100 ml，靜置20～30 min，將底部沉淀以2 500 r/min離心10 min。傾倒上清液后，加入少許血漿和凝血酶，快速攪拌后形成凝塊放入包埋盒。經(jīng)10%中性甲醛固定，脫水固定，石蠟包埋后切片，切片厚度均為3 μm，每個(gè)標(biāo)本各切2張，包括PD-L1檢測(cè)及陰性對(duì)照各1張，同時(shí)選擇胎盤切片作為陽性對(duì)照。IHC檢測(cè)PD-L1一抗采用Roche公司SP263，檢測(cè)儀器采用BenchMark Gx全自動(dòng)免疫組化儀；PD-L蛋白在腫瘤細(xì)胞表達(dá)結(jié)果評(píng)估采用腫瘤比例評(píng)分(tumor proportion scores,TPS)法，計(jì)算陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比[5]。擴(kuò)增阻礙突變系統(tǒng)(the amplification refractory mutation system，ARMS)技術(shù)檢測(cè)胸腔積液沉渣包埋樣本的EGFR基因突變情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料用例(百分率)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1表達(dá)水平 120例患者中，胸腔積液檢測(cè)PD-L1陽性表達(dá)70例，陽性率為58.33%(70/120)。腫瘤細(xì)胞PD-Ll表達(dá)陽性比例1%～49%、比例≥50%分別為40例、30例。

2.2 胸腔積液PD-L1表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性分析 肺腺癌患者胸腔積液標(biāo)本PD-L1陽性率與年齡、性別、淋巴結(jié)(lymph nodes，LN)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況及治療情況無相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

2.3 胸腔積液PD-L1表達(dá)與EGFR基因突變相關(guān)性分析 120例患者中，采用ARMS技術(shù)檢測(cè)EGFR基因突變42例(35.00%)。PD-L1陽性、陰性患者中EGFR基因突變率分別為37.14%(26/70)、32.00%(16/50)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PD-L1表達(dá)與EGFR基因突變無相關(guān)性(P>0.05)。

表1 胸腔積液PD-L1表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性/例(百分率/%)

3 討論

有報(bào)道顯示，肺癌患者細(xì)胞學(xué)標(biāo)本與組織學(xué)標(biāo)本IHC檢測(cè)PD-Ll表達(dá)陽性率分別為40%與27%[6-7]。一項(xiàng)針對(duì)肺腺癌患者的研究證實(shí)，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本與組織學(xué)標(biāo)本檢測(cè)PD-L1表達(dá)陽性率接近(65%比55%)[8]。有研究顯示，同一肺癌患者病灶不同組織學(xué)標(biāo)本，PD-L1檢測(cè)水平差異較大，說明肺癌患者同一病灶內(nèi)存在腫瘤異質(zhì)性[9-10]。有學(xué)者認(rèn)為，IHC檢測(cè)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本較組織學(xué)標(biāo)本PD-L1表達(dá)陽性率更高，可能與原發(fā)灶/轉(zhuǎn)移灶差異有關(guān)[11]。胸腔積液標(biāo)本主要來自肺癌晚期患者，多存在廣泛轉(zhuǎn)移，而組織學(xué)標(biāo)本多來源于原發(fā)病灶。相關(guān)報(bào)道提示，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本PD-Ll表達(dá)陽性率較組織學(xué)標(biāo)本更高[12]。此外，關(guān)于標(biāo)本獲取時(shí)間間隔、治療手段等是否影響PD-L1表達(dá)仍無定論[13]。

本研究結(jié)果顯示，PD-L1陽性、陰性患者中EGFR基因突變率分別為37.14%(26/70)、32.00%(16/50)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這一結(jié)果表明，胸腔積液的PD-L1表達(dá)可能不受EGFR基因突變的影響。有研究顯示，EGFR突變患者PD-L1表達(dá)比例和總?cè)巳簾o明顯差異，同時(shí)，PD-L1的表達(dá)與臨床特征均無相關(guān)性[14-16]。由于PD-L1蛋白表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)、抗體及結(jié)果判讀、評(píng)價(jià)方法、檢測(cè)體系等尚未統(tǒng)一，PD-L1檢測(cè)結(jié)果缺乏廣泛的一致性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，臨床應(yīng)用中存在差異[17]。明確不同突變類型患者的PD-L1表達(dá)情況具有重要臨床意義[18-19]。本研究結(jié)果還顯示，肺腺癌患者胸腔積液標(biāo)本PD-L1陽性率與年齡、性別、LN轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及治療情況均無相關(guān)性(P>0.05)。這一結(jié)果表明，胸腔積液PD-L1蛋白表達(dá)可能不受臨床病理特征的影響，臨床工作中，對(duì)于這部分患者需要更多的參考指標(biāo)協(xié)助，以明確免疫治療的療效及評(píng)估預(yù)后。

綜上所述，在無法獲取原發(fā)腫瘤標(biāo)本情況下，肺腺癌患者胸腔積液標(biāo)本檢測(cè)PD-L1表達(dá)具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，且PD-L1檢測(cè)結(jié)果不受臨床病理特征及基因突變的影響。本研究樣本量較少，且為單中心回顧性研究，無法完全排除混雜因素影響，仍有待后續(xù)前瞻性研究進(jìn)一步探討。