Graves眼病患者外周血中IL-17、IL-22的表達(dá)及其臨床意義

齊冉冉，柴昌

（河南大學(xué)人民醫(yī)院，河南省人民醫(yī)院，河南 鄭州 450003）

0 引言

Graves眼病也稱為甲狀腺相關(guān)性眼?。╰hyroid-associated ophthalmopathy，TAO），表現(xiàn)為眼眶發(fā)炎以及脂肪和眼外肌的擴(kuò)張。GO的病理生理學(xué)仍不確定，但是淋巴細(xì)胞和其他單核細(xì)胞浸潤(rùn)眼眶，這可能是細(xì)胞因子產(chǎn)生和對(duì)成纖維細(xì)胞作用的結(jié)果。近年來(lái)GO的發(fā)病機(jī)制一直是受?chē)?guó)內(nèi)外關(guān)注的，GO是一種器官特異性自身免疫性疾病，受多種因素影響，包括遺傳、環(huán)境和吸煙等[1]。T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫促進(jìn)GO的發(fā)生已被廣泛接受，目前發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞型一共有四種，分別是輔助性T細(xì)胞(Th1)、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)[2]。這些細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子與GO的發(fā)病有關(guān)，Th1/Th17淋巴細(xì)胞介導(dǎo)了強(qiáng)烈的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致腺體破壞[3-4]。B細(xì)胞也參與抗原呈遞和自身抗體產(chǎn)生,細(xì)胞軌道成纖維細(xì)胞還具有產(chǎn)生細(xì)胞因子并對(duì)其產(chǎn)生反應(yīng)的能力，因此也參與免疫反應(yīng)[5,6]。CD4+T輔助淋巴細(xì)胞在炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理中起關(guān)鍵作用，根據(jù)細(xì)胞因子合成的模式，CD4+T輔助細(xì)胞最初被分類為T(mén)h1和Th2淋巴細(xì)胞，它們參與細(xì)胞和體液免疫[7]。研究發(fā)現(xiàn)Treg和Th17的在自身免疫過(guò)程中發(fā)揮重要作用，這些細(xì)胞分泌多種具有促炎功能的細(xì)胞因子，包括 IL-17，IL-21 和 IL-22。近幾年研究發(fā)現(xiàn)Treg和Th17的平衡關(guān)系也參與了GO的發(fā)病[8]，在此項(xiàng)研究中，我們將通過(guò)分析GO患者和對(duì)照組的血清中IL-17與IL-22濃度水平，分析IL-17和IL-22細(xì)胞因子的分泌是否與GO處于活動(dòng)期或非活動(dòng)期有關(guān)，以及這些細(xì)胞因子是否與甲狀腺狀態(tài)和GO臨床活性有關(guān)。為GO免疫治療的提供新思路、新方法。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年8月至2020月12月在我院就診的Graves眼病病人52例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合GO的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②未行糖皮質(zhì)激素、手術(shù)等相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他免疫性疾?。虎谂懦渌闆r引起的眼球突出；③經(jīng)藥物治療的GO。按2016年EUGOGO提供的臨床活動(dòng)度評(píng)分（CAS）7分法[10]，將其分成靜止期組（CAS＜3）和活躍期組（CAS≥ 3）。其中活躍期組共25例,其中男12例,女13例,平均年齡（47.72±7.992）歲；靜止期組共27例,其中男11例,女16例,平均年齡（46.32±7.157）歲；另選同時(shí)間段在我院體檢正常者20例作為對(duì)照組，其中男10例,女10例,平均年齡（45.50±7.338）歲。三組研究對(duì)象年齡、性別等無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),均排除心、肝、腎等疾病,本研究由河南省立眼科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，在靜脈采血前均征求受試者本人知情同意。

1.2 研究方法

收集研究對(duì)象的性別、年齡、CAS、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑使用情況等臨床資料。所有研究對(duì)象于清晨空腹采集靜脈血3mL，室溫下靜置2h，3000r/min離心5min后取上清，儲(chǔ)存于-80℃冰箱中待檢,避免反復(fù)凍融。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)各組血清中IL-17與IL-22的含量，使用的試劑盒由武漢伊萊瑞特公司提供，所有操作步驟均嚴(yán)格按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各孔光密度值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出IL-17與IL-22的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法，繪制受試者工作特征曲線（ROC），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組臨床資料分析

結(jié)果顯示，各組之間的性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)?；钴S期組的CAS明顯高于靜止期組(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組基線資料（±s）

表1 各組基線資料（±s）

指標(biāo) GO活躍期組（25例，50眼） GO靜止期組（27例，54眼） 對(duì)照組（20例） χ2/F/t值 P值男/女（例） 12/13 11/16 10/10 0.469 0.791年齡(歲) 47.72±7.992 46.32±7.157 45.50±7.338 0.509 0.603 CAS 4.0±0.764 1.0±0.751 / 13.887 ＜0.01

2.2 3組IL-17與IL-22的濃度值比較

3組對(duì)象外周血血清中IL-17、IL-22的表達(dá)含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。GO活躍期組和靜止期組的IL-17、IL-22水平均高于對(duì)照組，且GO活躍期的值均高于GO 靜止期（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組IL-17、IL-22的含量 （pg/mL，±s）

表2 各組IL-17、IL-22的含量 （pg/mL，±s）

組別 IL-17 IL-22 GO活躍期組（25例） 104.05±19.128 68.58±14.603 GO靜止期組（27例） 66.54±16.717 39.35±10.156對(duì)照組（20例） 38.59±9.634 16.58±5.336 F值 94.653 122.805 P 值 ＜0.01 ＜0.01

2.3 相關(guān)性分析

對(duì)IL-17、IL-22與CAS行Spearman等級(jí)相關(guān)法檢測(cè)指標(biāo)間的相關(guān)性，結(jié)果顯示患者血清中的IL-17、IL-22水平與臨床活動(dòng)性評(píng)分均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.732和0.647，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.4 IL-17、IL-22作為預(yù)測(cè)GO患者處于活躍期指標(biāo)的ROC曲線分析

以靜止期為對(duì)照組，活躍期為實(shí)驗(yàn)組，繪制IL-17、IL-22評(píng)估病情的ROC曲線，判斷其能否成為評(píng)估疾病活動(dòng)性的有效指標(biāo)。結(jié)果顯示，IL-17作為預(yù)測(cè)GO為活躍期指標(biāo)的 AUG 為 0.878（95%CI：0.782-0.973,P＜0.001），靈 敏 度為76.0%，特異度為88.0%，最佳診斷截點(diǎn)為79.06 pg/mL。IL-22作為預(yù)測(cè)TAO活躍期指標(biāo)的AUC為0.818（95%CI：0.697～0.940,P＜0.001），靈敏度為 68.0%，特異度為 85.0%，最佳診斷截點(diǎn)為51.72 pg/mL。見(jiàn)圖1。

3 討論

Graves眼病是與細(xì)胞因子水平異常分泌有關(guān)的自身免疫性疾病，免疫機(jī)制學(xué)說(shuō)是其重要的發(fā)病機(jī)制之一，近年來(lái)T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)在GO發(fā)病中的作用越來(lái)越引起關(guān)注[11]，T淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)主要是CD4+T細(xì)胞，其中Th17細(xì)胞是CD4+T的一個(gè)重要子群，特征性的產(chǎn)生IL-6、IL-15、IL-17、IL-21、IL-22、IL-23等。其中IL-17是Th17細(xì)胞主要產(chǎn)生的關(guān)鍵性細(xì)胞因子，研究發(fā)現(xiàn)IL-17細(xì)胞因子家族由6種蛋白質(zhì)（IL-17A至IL17F）和5種受體（IL-17RA至IL-17RE）組成，IL-17A和IL-17F由幾種類型的免疫細(xì)胞產(chǎn)生，而IL-17B，IL17C和IL-17D主要由上皮細(xì)胞產(chǎn)生，IL-17受體廣泛分布在不同組織的常見(jiàn)細(xì)胞類型中[12]。盡管對(duì)IL-17B-F的認(rèn)知有限，但I(xiàn)L-17A（通常稱為IL-17）因其在自身免疫性疾病中的促炎作用而受到了廣泛關(guān)注。然而，在過(guò)去的十年中，已經(jīng)清楚的是，IL-17的功能比僅僅啟動(dòng)炎癥要細(xì)微得多。越來(lái)越多的證據(jù)表明，IL-17在損傷，生理應(yīng)激和感染的反應(yīng)過(guò)程中，在維持健康方面具有重要的背景和組織依賴性作用[13]。

圖1 疾病活動(dòng)性分期的受試者工作特征曲線

Th17細(xì)胞與包括Graves病在內(nèi)的許多人類自身免疫性疾病相關(guān)，例如牛皮癬，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，克羅恩病和多發(fā)性硬化癥等[14]。已有研究發(fā)現(xiàn)在Graves眼病的發(fā)病機(jī)理中起關(guān)鍵作用。Fang等[15]發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生IL-17，IFN-γ和IL-22的Th17細(xì)胞與GO的CAS具有相關(guān)性和趨勢(shì)。當(dāng)患者從疾病的活躍炎癥階段發(fā)展到“倦怠”階段時(shí)，Th17細(xì)胞的致病性表現(xiàn)出GO的明顯減弱趨勢(shì)。這些結(jié)果表明，Th17細(xì)胞的狀態(tài)與GO的臨床過(guò)程相關(guān)。Chen[16]通過(guò)檢測(cè)GO患者的眼淚和眼眶組織中IL-15和IL-17的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，這兩種細(xì)胞因子的濃度與正常人相比是顯著升高的，并且活動(dòng)期的濃度是高于非活動(dòng)期的。再一次證實(shí)了它們與GO眼眶炎癥的密切關(guān)系。唐喜香等[17]研究結(jié)果顯示GO患者血清IL-6、IL-17水平升高,IL-2水平降低，其中IL-17與病情活動(dòng)度關(guān)系密切。

本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示，GO患者血清IL-17、IL-22水平均高于正常人，且與臨床活動(dòng)性評(píng)分呈正相關(guān)，因此認(rèn)為在GO患者血清中IL-17、IL-22水平可以作為病情活動(dòng)性分期的重要指標(biāo)之一。這與其他三位學(xué)者的研究結(jié)果也是相符合的。近年來(lái)，基于對(duì)Graves眼病發(fā)病機(jī)制的研究，靶向治療為GO的治療帶來(lái)了新的希望，但是多數(shù)新藥還處于臨床實(shí)驗(yàn)階段，依然缺乏GO的特效治療藥，我們?nèi)悦媾R著巨大挑戰(zhàn)[18]?？傊?，我們目前發(fā)現(xiàn)的相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，為GO相關(guān)性自身免疫的潛在分子機(jī)制提供了新的思路，在以后的研究中將會(huì)更深入的探究CD4+T其他重要的細(xì)胞亞群及其相關(guān)細(xì)胞因子，為以后疾病的診斷及治療提供新方法。