黃芪多糖對(duì)急性心肌梗死大鼠心室重構(gòu)及miRNA-21 的影響

董 揚(yáng)，張 芬，李幸幸，吳 杰，徐忠誠(chéng)

（金華市人民醫(yī)院心內(nèi)二科，浙江金華321000）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是由冠狀動(dòng)脈供血急劇下降或突然中斷造成組織缺血缺氧，繼而引起部分心肌組織急性壞死的一種缺血性心血管疾病，具有起病急驟，致死率高，并發(fā)癥多等特點(diǎn)［1］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，截至2016年，我國(guó)AMI 發(fā)病人數(shù)已超過200 萬，并且該數(shù)字還呈現(xiàn)逐年攀升的趨勢(shì)［2］。盡管隨著介入技術(shù)的快速發(fā)展，我國(guó)AMI 的死亡率明顯降低，然而AMI 后患者的遠(yuǎn)期死亡風(fēng)險(xiǎn)依然很高。從組織學(xué)層面，AMI 后主要表現(xiàn)為心肌間質(zhì)充血、水腫，繼而大量心肌細(xì)胞死亡和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致心肌纖維化并出現(xiàn)心室重構(gòu)，最終誘發(fā)心衰及心臟破裂。因此，有效改善心室重構(gòu)對(duì)AMI 患者的預(yù)后至關(guān)重要。

黃芪多糖（astragalus polysaccharides，APS）是從豆科植物黃芪干燥根莖中提取的一種水溶性的雜多糖，已被證實(shí)具有降血脂、抗炎和抗氧化等作用［3］。同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)，APS 可以通過擴(kuò)張外周血管阻力、增加冠脈血流速度、改善心肌供血供氧、抑制血小板聚集等方面對(duì)心肌缺血再灌注損傷發(fā)揮治療作用［4，5］。miR-21 作為一種常見的非編碼小分子RNA，已被證實(shí)具有調(diào)控炎癥因子的作用，并在AMI 后的病理過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用［6，7］。因此，本研究擬通過觀察APS 對(duì)AMI 大鼠心肌組織中miR-21 的表達(dá)及其介導(dǎo)的TLR4/MyD88/NFκB 信號(hào)通路的影響，以期進(jìn)一步明確APS 對(duì)心室重構(gòu)的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

共60 只Sprague Dawley 大鼠購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，雄性，Specific Pathogen Free 級(jí)，體質(zhì)量（214±11）g，合格證號(hào)：SCXK（京）：2016-0006。實(shí)驗(yàn)大鼠采取分籠飼養(yǎng)模式，自由飲食飲水。實(shí)驗(yàn)通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查［批號(hào)：HB20190117050115DY-A］。

1.2 藥品及試劑

APS（含70 %黃芪多糖粉，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040085）購(gòu)于天津賽諾制藥有限公司生產(chǎn)；阿托伐他汀片（20 mg/片，國(guó)藥準(zhǔn)字：J20120050）購(gòu)于輝瑞制藥有限公司；Masson 染液及HE 染色、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、MMP-2 和TIMP-2 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65 兔抗鼠單體購(gòu)自Abcam 公司，GAPDH 兔抗鼠單克隆抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG 二抗購(gòu)自美國(guó)CST 公司。Trizol Reagent 試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司。First Strand cDNA Synthesis Kit、Real Time PCR Kit 購(gòu)自上海碧云天生物科技有限公司。超敏ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒及BCA 蛋白定量試劑盒購(gòu)于沈陽(yáng)萬類生物科技公司。

1.3 動(dòng)物模型的建立及藥物干預(yù)

大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組及APS 低劑量組、中劑量組、高劑量組和阿托伐他汀組。參照文獻(xiàn)中方法構(gòu)建大鼠心肌梗死模型［9］，具體方法如下：大鼠予1 %戊巴比妥鈉腹腔注射，麻醉后將大鼠置于仰臥位固定，并于手術(shù)區(qū)將左心前區(qū)上至頸前，右至胸骨右側(cè)緣，下至心尖搏動(dòng)3～4 cm處，剃毛備皮。待麻醉后對(duì)大鼠進(jìn)行12 導(dǎo)心電圖監(jiān)測(cè)，觀察心電變化，剔除心電異常者；氣管插管：將鼠板置于45°～60°傾斜臺(tái)上，上牙固定鼠板邊緣，光源照亮頸喉部利于充分暴露聲門，進(jìn)行無創(chuàng)經(jīng)口氣管插管，當(dāng)口腔鏡內(nèi)出現(xiàn)霧氣，則提示插管成功；左冠狀動(dòng)脈前降支（left anterior descending coronary artery，LAD）結(jié)扎：將實(shí)驗(yàn)大鼠連接至小動(dòng)物呼吸機(jī)，參數(shù)設(shè)置為潮氣量6 mL，呼吸比1∶2，呼吸頻率80 次/min，手術(shù)嚴(yán)格按照無菌操作，消毒術(shù)區(qū)，于左側(cè)第三、四肋間橫向剪開皮膚及肌肉，撕開心包膜，使用眼科開瞼器擴(kuò)口，充分暴露心臟，結(jié)扎位置平行于心耳，使用5-0 縫合線于心耳下2 mm 處對(duì)左冠狀動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎。結(jié)扎成功的標(biāo)志為結(jié)扎部位及以下心肌變白。予2-0 縫合線進(jìn)行逐層縫合關(guān)胸，關(guān)胸后脫機(jī)，盡快恢復(fù)大鼠自主呼吸，假手術(shù)組只進(jìn)行穿線但不予結(jié)扎。術(shù)后各只大鼠均注射利多卡因0.1 mL以防心律失常。造模后各組給予相應(yīng)的藥物灌胃治療，其中APS 低、中、高劑量組參照文獻(xiàn)及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別給予200 、400 、800 mg/kg的APS 水溶液灌胃治療［8］。阿托伐他汀組給予10 mg/kg 阿托伐他汀混懸液灌胃治療，假手術(shù)組和模型組給予等容量生理鹽水灌胃，以上各組均灌胃1 次/d，連續(xù)4 周。4 周后處死大鼠，留取心肌組織已備檢測(cè)。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 心肌組織病理學(xué) 取大鼠左心室組織于4%甲醛固定后制備厚度為4 μm 的石蠟切片。分別進(jìn)行HE 染色和Masson 染色，具體實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞排列及膠原染色情況（藍(lán)色），通過Image Pro Plus 6.0軟件計(jì)算各組膠原染色面積。

1.4.2 ELISA 法檢測(cè)大鼠心肌組織IL-1β、IL-6、IL-10 和TNF-α 水平 取大鼠心肌組織中加入緩沖液進(jìn)行研磨，3 000 r/min 離心10 min，提取上清，并按大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 試劑盒說明書的方法，對(duì)濃度已達(dá)到均衡的心肌組織中IL-1β、IL-6、IL-10 和TNF-α 的含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3 RT-PCR 檢測(cè)心肌組織中miR-21 及MMP2、TIMP-2、Col-I 和Col-III 基因的表達(dá) 采用試劑盒提取心肌組織中總RNA，核酸檢測(cè)儀測(cè)定濃度，并在每個(gè)樣本中取1 μg 的RNA，分別加入M-MLV 緩沖液4 μL、M-MLV 1 μL、RNasin 0.5 μL、DNTP 2 μL，無RNA酶水加至20 μL，通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)進(jìn)行cDNA的合成。在PCR條件下分別為95 ℃×15 min，95 ℃×10 s，40個(gè)周期×54 ℃×20 s，72 ℃×20 s，以U6 作為參照測(cè)定miR-21 基因水平，以GAPDH 作為參照測(cè)定MMP2、TIMP-2、Col-I、Col-Ⅲ基因水平，用2-ΔΔCt法計(jì)算樣品中相應(yīng)基因表達(dá)水平的變化。引物序列見表1。

表1 RT-PCR 中的PCR 反應(yīng)引物Tab 1 Primers for RT-PCR

1.4.4 Western blot 檢測(cè)TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)情況 取適量心肌組織于冰上裂解后離心取上清，采用BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定每個(gè)樣品的濃度，每組50 μg 上樣、聚丙烯酰胺凝膠100 V 恒壓電泳90 min 以分離蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，PVDF）、洗膜。加入適量稀釋的TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、NF-κB p65 及GAPDH 兔抗鼠單克隆抗體（1∶2 000），4 ℃孵育過夜。洗膜后加入稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG 二抗（1∶1 000），室溫下繼續(xù)孵育90 min。超敏ECL 化學(xué)發(fā)光試劑顯影后，采用凝膠成像系統(tǒng)分析掃描，以GAPDH 作為內(nèi)參蛋白，以目的蛋白/GAPDH 的比值代表其相對(duì)表達(dá)豐度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究中數(shù)據(jù)均以SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式表示。多組間的比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），而組間兩兩之間的比較采用最小顯著性差異法（least significant difference，LSD），以P＜0.05 為組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃芪多糖對(duì)急性心梗大鼠心肌組織形態(tài)的影響

模型組在術(shù)后第1、3 天各發(fā)生1 只大鼠死亡，故納入8 只大鼠；APS 低劑量組大鼠于造模第3 天時(shí)發(fā)生1 只大鼠死亡，故僅納入9 只大鼠；阿托伐他汀組大鼠在造模第5 天時(shí)出現(xiàn)1 只死亡，其余各組未見大鼠死亡現(xiàn)象。

HE 染色結(jié)果顯示，假手術(shù)組心肌組織橫紋清晰、排列規(guī)則且完整，細(xì)胞質(zhì)均勻豐富，細(xì)胞核清晰可見（圖1A）。與假手術(shù)組比較，模型組可見大范圍淺染的心肌梗死區(qū)，梗死區(qū)壞死肌纖維被疏松的結(jié)締組織代替，組織疏松水腫，毛細(xì)血管增生，組織間有充血現(xiàn)象，并且伴有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，梗死區(qū)邊緣可見心肌肥大（圖1B）。與模型組相比，APS 各劑量組及阿托伐他汀組在不同程度上改善了心肌組織病理狀態(tài)，其作用效果介于假手術(shù)組與模型組之間（圖1C～1F）。

假手術(shù)組大鼠左心室組織中可見極少量的藍(lán)色膠原沉積。與假手術(shù)組相比，模型組可見大量的膠原纖維且染色面積明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，APS 各劑量組及阿托伐他汀組可能顯著抑制心肌組織中膠原沉積，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見 圖2A～2F、表2。

2.2 黃芪多糖對(duì)急性心梗大鼠心肌組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 和IL-10 水平的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中IL-10 的水平顯著降低，IL-1β、IL-6 和TNF-α 的表達(dá)水平均顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，各處理組心肌組織中IL-10 的水平顯著增加，IL-1β、IL-6 和TNF-α 的水平均顯著降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明APS 可改善因心肌梗死所造成的心肌組織炎癥反應(yīng)，見表3。

表2 各組大鼠心肌組織膠原染色面積的比較（±s）Tab 2 Comparison of the staining area of collagen in myo?cardial tissue of rats（±s）

表2 各組大鼠心肌組織膠原染色面積的比較（±s）Tab 2 Comparison of the staining area of collagen in myo?cardial tissue of rats（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

n 組別假手術(shù)組模型組APS 低劑量組APS 中劑量組APS 高劑量組阿托伐他汀組10膠原染色面積（%）0.95±0.08 3.82±0.37*2.54±0.28#1.98±0.13#1.17±0.07#1.12±0.09#23.14 0.00 89 10 10 9 FP

2.3 黃芪多糖對(duì)急性心梗大鼠心肌組織中MMP2、TIMP-2、Col-I 和Col-ⅢmRNA 表達(dá)的影響

RT-PCR 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組MMP2、Col-I 和Col- Ⅲ mRNA 的表達(dá)水平及MMP2/TIMP-2 的比值顯著升高，TIMP-2 mRNA的表達(dá)水平顯著減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而與模型組相比，APS 各劑量組和阿托伐他汀組MMP2、Col-I 和Col-ⅢmRNA 的表達(dá)水平及MMP2/TIMP-2 的比值顯著降低，TIMP-2 mRNA的表達(dá)水平顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

圖1 HE 染色觀察心肌組織變化（×100）Fig 1 Changes of myocardial tissue by HE staining（×100）

圖2 MASSON 染色觀察心肌組織變化（×100）Fig 2 Changes of myocardial tissue by Masson staining（×100）

表3 各組大鼠心肌組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 和IL-10 水平比較（pg/mL，±s）Tab 3 Levels of IL-1β，IL-6，TNF-α and IL-10 in myocardial tissues of rats（pg/mL，±s）

表3 各組大鼠心肌組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 和IL-10 水平比較（pg/mL，±s）Tab 3 Levels of IL-1β，IL-6，TNF-α and IL-10 in myocardial tissues of rats（pg/mL，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05。

IL-10 48.29±5.54 17.17±6.89*21.21±5.94#29.26±7.45#34.12±5.87#43.02±4.93#27.94 0.00組別假手術(shù)組模型組APS 低劑量組APS 中劑量組APS 高劑量組阿托伐他汀組n 10 89 10 10 9 FP IL-1β 0.19±0.05 0.43±0.26*0.29±0.15#0.26±0.13#0.23±0.09#0.21±0.08#13.94 0.00 IL-6 8.14±2.12 11.83±2.45*10.23±3.12#9.79±2.67#9.12±1.31#8.97±1.26#47.35 0.00 TNF-α 4.21±1.15 17.23±4.98*15.69±3.12#8.31±2.76#6.42±1.98#6.35±1.92#36.51 0.00

表4 各組大鼠心肌組織中MMP2、TIMP-2、Col-I 和Col-ⅢmRNA 表達(dá)的比較（±s）Tab 4 mRNA expression of MMP2，TIMP-2，Col-I and Col-Ⅲin myocardial tissues of rats（±s）

表4 各組大鼠心肌組織中MMP2、TIMP-2、Col-I 和Col-ⅢmRNA 表達(dá)的比較（±s）Tab 4 mRNA expression of MMP2，TIMP-2，Col-I and Col-Ⅲin myocardial tissues of rats（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.0;與模型組比較，#P＜0.05。

Col-Ⅲ/GAPDH 1.0 ±0.01 2.59±0.14*2.24±0.08#1.82±0.07#1.31±0.13#1.27±0.09#16.74 0.00組別假手術(shù)組模型組APS 低劑量組APS 中劑量組APS 高劑量組阿托伐他汀組n 10 89 10 10 9 FP MMP2/GAPDH 1.0 ±0.01 2.11±0.07*1.64±0.05#1.29±0.07#1.19±0.09#1.15±0.13#21.35 0.00 TIMP-2/GAPDH 1.0 ±0.01 0.25±0.04*0.38±0.06#0.64±0.09#0.75±0.07#0.78±0.08#10.68 0.00 MMP2/TIMP-2 1.0 ±0.01 8.44±1.75*4.32±0.83#2.02±0.78#1.59±1.29#1.84±1.63#26.34 0.00 Col-I/GAPDH 1.0 ±0.01 2.26±0.25*1.97±0.11#1.73±0.09#1.27±0.14#1.18±0.16#15.38 0.00

2.4 黃芪多糖對(duì)急性心梗大鼠心肌組織中miR-21表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中miR-21的表達(dá)水平顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而與模型組相比，各處理組大鼠心肌組織中miR-21的表達(dá)均顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 各組大鼠心肌組織中miR-21 表達(dá)的比較（±s）Tab 5 miR-21 expression in myocardial tissues of rats（±s）

表5 各組大鼠心肌組織中miR-21 表達(dá)的比較（±s）Tab 5 miR-21 expression in myocardial tissues of rats（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05。

n 組別假手術(shù)組模型組APS 低劑量組APS 中劑量組APS 高劑量組阿托伐他汀組10 miR-21/U6 1.0 ±0.01 0.22±0.13*0.48±0.09#0.75±0.07#0.94±0.12#0.96±0.18#17.35 0.00 89 10 10 9 FP

2.5 黃芪多糖對(duì)心肌組織中TLR4/MyD88/NFκB 通路的影響

與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織中TLR4、p-NF-κB p65 和MyD88 蛋白的表達(dá)水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而各組組織中NFκB p65 蛋白的表達(dá)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，APS 各劑量組及阿托伐他汀組中TLR4、p-NF-κB p65 和MyD88 蛋白的表達(dá)豐度均明顯下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表6和圖3。

表6 各組大鼠心肌組織TLR4/MyD88/NF-κB 通路中相關(guān)蛋白表達(dá)比較（±s）Tab 6 Related protein expression of TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in myocardial tissues of rats（±s）

表6 各組大鼠心肌組織TLR4/MyD88/NF-κB 通路中相關(guān)蛋白表達(dá)比較（±s）Tab 6 Related protein expression of TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in myocardial tissues of rats（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05。

組別n TLR4/GAPDH MyD88/GAPDH假手術(shù)組模型組APS 低劑量組APS 中劑量組APS 高劑量組阿托伐他汀組10 p-NF-κB p65/ NF-κB p65 0.45±0.07 1.11±0.15*0.93±0.16#0.86±0.08#0.62±0.06#0.57±0.11#15.32 0.00 0.47±0.11 1.06±0.14*0.97±0.14#0.86±0.11#0.75±0.07#0.71±0.06#10.36 0.00 89 10 10 9 FP 0.32±0.07 1.46±0.13*1.37±0.08#1.18±0.08#0.98±0.03#0.92±0.05#12.25 0.00

圖3 WB檢測(cè)TLR4/MyD88/NF?κB通路相關(guān)蛋白的表達(dá)Fig 3 Related protein expression of TLR4/MyD88/NFκB signaling pathway by Western blotting

3 討論

心室重構(gòu)是指心肌對(duì)容量或壓力產(chǎn)生的一種適應(yīng)性或代償性改變，以左心室功能減退和心室擴(kuò)張為主要特征并表現(xiàn)為大量心肌細(xì)胞受損、壞死，同時(shí)出現(xiàn)間質(zhì)纖維化和心肌肥厚［9］。作為AMI 后導(dǎo)致死亡的主要誘因，盡管對(duì)心室重構(gòu)的預(yù)防措施已取得長(zhǎng)足進(jìn)步，但其治療效果仍不盡人意。因此，提高心肌抗炎性反應(yīng)和纖維化水平是改善AMI患者心室重構(gòu)的關(guān)鍵。

心室重構(gòu)會(huì)造成大量成纖維細(xì)胞激活并分泌大量的膠原纖維，引起心肌間質(zhì)纖維化［10］。膠原是心肌細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，其中Col-I 和Col-Ⅲ比例約占90%。MMP2 作為MMPs 家族的重要明膠酶，能夠有效降解細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）中的明膠和間質(zhì)膠原，從而破壞膠原網(wǎng)的組織結(jié)構(gòu)，使得細(xì)胞間失去緊密連接性［11］。在壓力的作用下，左心室?guī)缀螛?gòu)形出現(xiàn)改變，導(dǎo)致心室重構(gòu)的出現(xiàn)并影響左心室的功能。TIMPs 作為MMPs的內(nèi)源性特異抑制劑，與MMPs 共同組成機(jī)體調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡的重要部分［12］。TlMP-2 主要抑制MMP2，因此，MMP2 及TIMP-2 的表達(dá)平衡是心肌基質(zhì)重塑的決定性因素。

炎癥反應(yīng)是AMI 發(fā)生后梗死區(qū)域的特征性改變，當(dāng)心肌細(xì)胞處于缺血缺氧狀態(tài)時(shí)炎癥反應(yīng)即被激活，通過大量釋放IL-1β、IL-6、TNF-α 等內(nèi)源性細(xì)胞因子導(dǎo)致心肌組織結(jié)構(gòu)改變和細(xì)胞肥大，從而引起心肌細(xì)胞凋亡及心肌重構(gòu)［13，14］。同時(shí)，早期心肌間質(zhì)纖維化也會(huì)釋放大量的TNF-α，促進(jìn)IL-6的釋放和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)［15］。IL-10在免疫反應(yīng)中起到負(fù)調(diào)節(jié)作用，通過直接抑制免疫細(xì)胞功能實(shí)現(xiàn)免疫抑制［16］。此外，研究證實(shí)，IL-10還可通過抑制IL-1β的表達(dá)，避免心肌組織過度損傷［17］。

筆者通過TargetScan 網(wǎng)站預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，TLR4 是miR-21的下游靶基因。miR-21的過表達(dá)不僅可降低炎癥因子IL-6表達(dá)，增加抗炎因子IL-10表達(dá)，還可以抑制TLR4及其下游NF-κB活化［18］。同時(shí)，研究表明AMI患者均不同程度伴有miR-21表達(dá)異常，其可通過調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞及心肌細(xì)胞的凋亡、增殖，參與氧化應(yīng)激抑制細(xì)胞損傷［19］。TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路在機(jī)體免疫及炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)方面具有關(guān)鍵作用，是調(diào)控TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的中心環(huán)節(jié)和共同通路，在心肌細(xì)胞損傷的過程中起到關(guān)鍵作用［20，21］。因此，通過調(diào)控miR-21的水平進(jìn)而抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的活化是抑制AMI后炎癥反應(yīng)的重要途徑。

本研究結(jié)果顯示，APS能夠顯著降低心肌組織中IL-1β、IL-6和TNF-α 的表達(dá)，增加抗炎因子IL-10的水平，從而改善AMI后左心室組織病理學(xué)形態(tài)，與模型組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。心室重構(gòu)過程中導(dǎo)致大量膠原沉積，本研究結(jié)果顯示，APS 能夠顯著降低大鼠心肌組織中膠原染色面積、MMP2、Col-I和Col-ⅢmRNA的表達(dá)水平及MMP2/TIMP-2的比值，增加TIMP-2 mRNA的表達(dá)豐度，與模型組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與此同時(shí)，APS還能顯著上調(diào)心肌組織中miR-21的表達(dá)水平，降低AMI大鼠心肌組織TLR4、p-NF-κB p65和MyD88蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的活化，與模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，APS可通過上調(diào)心肌組織中miR-21的表達(dá)水平，抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活，從而抑制膠原沉積和炎癥反應(yīng)，起到對(duì)心肌梗死后心室重構(gòu)的治療作用。