lncRNA FAL1通過(guò)調(diào)控MAPK通路對(duì)卵巢癌細(xì)胞化療耐藥性的影響及其機(jī)制

栗浩然，王雅莉，李紅娟，相元翠，劉會(huì)敏

0 引言

卵巢癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，多數(shù)患者確診晚，死亡率較高，占所有癌癥死亡的5%[1]。盡管通過(guò)手術(shù)、化療等一線治療方法進(jìn)行積極治療，但被診斷為Ⅲ期或Ⅳ期的卵巢癌5年生存率仍低于25%，主要原因?yàn)橹委熀髲?fù)發(fā)并最終發(fā)展為化療耐藥[2]。因此，探究卵巢癌化療耐藥機(jī)制，尋找潛在的治療靶點(diǎn)成為提高卵巢癌治療效果、改善預(yù)后的關(guān)鍵。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA,lncRNA）是一類長(zhǎng)度大于200 nt的非編碼RNA，越來(lái)越多的研究證明，lncRNA可根據(jù)其結(jié)合的伴侶類型和數(shù)量發(fā)揮多種功能，可能在正常發(fā)育和疾病發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，可與信號(hào)通路中的分子直接相互作用而調(diào)控細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA FAL1在胃癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌等多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)，可促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和抑制細(xì)胞凋亡[5-7]。絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信號(hào)通路與癌癥代謝過(guò)程之間的聯(lián)系已經(jīng)得到了廣泛研究，MAPK的激活是腫瘤發(fā)生的重要特征，MAPK在乳腺癌、肝癌、胃癌等耐藥細(xì)胞株中均呈顯著高表達(dá)狀態(tài)，抑制該信號(hào)通路的激活則能不同程度逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞的化療耐藥性[8]。目前，關(guān)于lncRNA FAL1在卵巢癌中的表達(dá)及對(duì)其化療耐藥性方面的研究尚少，其作用機(jī)制尚不清晰，因此，本研究以MAPK信號(hào)通路為切入點(diǎn)，構(gòu)建FAL1基因沉默SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞，觀察下調(diào)FAL1對(duì)卵巢癌細(xì)胞化療耐藥性的影響，并初步探究其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞

人卵巢癌SKOV3、COC1細(xì)胞株及其順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP、COC1/DDP，購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為5%CO2、37℃。每2～3 d傳代一次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 動(dòng)物

24只SPF級(jí)6周齡雄性BALB/c裸鼠，體重18～20g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)碼：SCXK(京)2017-0011），飼養(yǎng)于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立動(dòng)物房（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)碼：SYXK（豫）2016-0002）。

1.3 試劑與儀器

順鉑（Cisplatin，DDP，美國(guó)Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：P4394）；DMEM培養(yǎng)基，MTT染色試劑盒、Transwell小室、基質(zhì)膠、結(jié)晶紫染液、胎牛血清，青鏈霉素混合液（100×），胰蛋白酶-EDTA消化液，RIPA裂解液、PMSF、脫脂奶粉、ECL發(fā)光液、PVDF轉(zhuǎn)印膜（北京索萊寶科技有限公司）；吉姆薩染色試劑盒（上海生工生物工程股份有限公司）；Lipofectamine2000（北京沃比森科技公司）；FAL1干擾序列FAL1-siRNA及其陰性對(duì)照NC-siRNA委托上海吉瑪公司構(gòu)建；RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit（美國(guó)Thermo Scientific公司）；引物（日本Takara公司）；MDR-1、MPR-1、ABCG2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、GAPDH兔源單克隆抗體，羊抗兔二抗（美國(guó)CST公司）；IX53顯微鏡（日本奧林巴斯）；TGL16MB高速冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司）；DYCZ-24KS型雙板垂直電泳儀（北京六一儀器廠）；G:BOX多功能凝膠成像系統(tǒng)（Syngene）。

1.4 方法

1.4.1 qRT-PCR檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞中FAL1 mRNA表達(dá)差異 收集細(xì)胞，胰酶消化、離心后收集細(xì)胞沉淀，加入適量Trizol裂解液提取細(xì)胞總RNA，使用RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，作為熒光定量模版。引物由日本Takara公司設(shè)計(jì)合成，所有樣品均以GAPDH作為內(nèi)參。反應(yīng)體系：dNTPs 0.5 μl+5×Buffer 5 μl+Taq酶0.3 μl+MgCl21.5 μl+cDNA模板2 μl+上下游引物分別1 μl，加去離子水至總體積25 μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s、62℃退火30 s、72℃延伸30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min，4℃ 5 min終止反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。采用2-△△CT的方法計(jì)算目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平的變化。引物序列見(jiàn)表1。

1.4.2 細(xì)胞分組與轉(zhuǎn)染 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3/DDP、COC1/DDP細(xì)胞，接種至6孔板中，濃度為5×105個(gè)/孔。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合至70%～80%時(shí)，參照Lipofectamine2000試劑盒說(shuō)明書，對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染NC-siRNA、FAL1-siRNA，轉(zhuǎn)染5 h后更換為正常培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集各組細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中FAL1 mRNA的表達(dá)量，確定轉(zhuǎn)染是否成功，方法同1.4.1。

表1 基因的引物序列Table 1 Primer sequences of genes

1.4.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 收集細(xì)胞，消化、離心、重懸后計(jì)數(shù)，以3×103個(gè)/孔的濃度接種于96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后換液，加入DDP濃度為0、3.13、6.25、12.5、25、50 μg/ml的含藥培養(yǎng)基，每孔100 μl，每組設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔細(xì)胞中加入20 μl 5 mg/ml的MTT溶液，在37℃下繼續(xù)孵育4 h后終止培養(yǎng)，棄上清液，每孔加入150 μl DMSO，充分振蕩混勻使結(jié)晶溶解，在490 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)OD值，計(jì)算藥物的半抑制濃度（IC50），選擇小于IC50的DDP濃度（6.25 μmol/L）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4.4 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力 收集細(xì)胞，使用DDP處理48 h，消化、離心、重懸，采用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，按照2×104個(gè)/孔的濃度接種于已鋪有基質(zhì)膠的上室，每孔200 μl，下室加入600 μl的DMEM完全培養(yǎng)基，置培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h之后，取出上室，用甲醇固定20 min，棉簽擦掉上室殘余細(xì)胞，1%的結(jié)晶紫染色15 min，PBS緩沖液沖洗2遍，置于顯微鏡下觀察，選取4個(gè)高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值。

1.4.5 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆能力 收集細(xì)胞，使用DDP處理48 h，消化、離心、重懸后計(jì)數(shù)，按照1 000個(gè)/孔的濃度接種于6孔板中，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，加入2 ml DMEM完全培養(yǎng)基，每3～4 d更換一次，共培養(yǎng)14 d。培養(yǎng)結(jié)束后，吸棄培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗2次，每孔加入1 ml 4%多聚甲醛溶液固定細(xì)胞，30 min后吸出多聚甲醛溶液，PBS緩沖液清洗2次，加入1 ml吉姆薩A染液染色5 min，加入B染液2 ml染色15 min，PBS緩沖液清洗至6孔板無(wú)染料殘留，晾干后置顯微鏡10倍鏡下觀察，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)大于10個(gè)的克隆數(shù)，重復(fù)3次，取平均值。

1.4.6 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞耐藥相關(guān)蛋白及MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平 采用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞蛋白表達(dá)水平。收集細(xì)胞，胰酶消化、離心后收集細(xì)胞沉淀，加入蛋白裂解液置冰上裂解20 min，離心取上清液，BCA蛋白定量法測(cè)定蛋白的濃度，加入上樣緩沖液，EP管中混勻后置于沸水中煮沸5 min使蛋白變性。配置15%的分離膠和5%的濃縮膠，每個(gè)樣本取30 μg進(jìn)行SDSPAGE電泳，上樣后80 V電泳2 h，60 V轉(zhuǎn)膜2 h。PVDF膜置于5%脫脂奶粉中室溫下封閉2 h，隨后將條帶放入10 ml MDR-1、MPR-1、ABCG2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、GAPDH兔源一抗蛋白稀釋液中，一抗稀釋比例為1:2 000，置于4℃冰箱中過(guò)夜，第2天用TBST緩沖液清洗3次，每次10 min。37℃環(huán)境下加入羊抗兔二抗孵育2 h，二抗稀釋比例為1:1 000，TBST緩沖液清洗3次后滴加ECL發(fā)光液，反應(yīng)1 min后置于凝膠成像系統(tǒng)顯影。免疫印跡實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參蛋白為GAPDH，用Image J軟件分析各個(gè)蛋白對(duì)應(yīng)的灰度值，計(jì)算蛋白的相對(duì)表達(dá)量，蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/內(nèi)參蛋白灰度值。

1.4.7 裸鼠皮下移植瘤 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，將已轉(zhuǎn)染NC-siRNA或FAL1-siRNA的SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞（100 μl,1×107個(gè)/毫升）注射至小鼠右前肢皮下，待腫瘤組織生長(zhǎng)至100 mm3左右時(shí)，使用游標(biāo)卡尺測(cè)量，瘤體積（mm3）=0.5×長(zhǎng)徑×短徑2，每周測(cè)量一次瘤體積，待第4周（第28天）時(shí)測(cè)量瘤體積后處死小鼠，收集瘤組織并稱重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，Graph-Pad Prism 8.0作圖，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多樣本比較采用單因素方差分析，兩樣本比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FAL1基因表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞化療耐藥性的關(guān)系

不同濃度DDP處理SKOV3、COC1細(xì)胞及SKOV3/DDP、COC1/DDP細(xì)胞，細(xì)胞的增殖活力均降低，DDP對(duì)SKOV3細(xì)胞的IC50為（3.50±0.42）μg/ml，對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50為（15.25±1.01）μg/ml，DDP對(duì)COC1細(xì)胞的IC50為（2.15±0.22）μmol/ml，DDP對(duì)COC1/DDP細(xì)胞的IC50為（9.88±0.45）μmol/ml。見(jiàn)圖1。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞中FAL1 mRNA的表達(dá)水平分別為1.05±0.06、2.53±0.15，與SKOV3細(xì)胞比較，SKOV3/DDP細(xì)胞中FAL1基因的表達(dá)水平顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。COC1、COC1/DDP細(xì)胞中FAL1 mRNA的表達(dá)水平分別為0.89±0.09、1.96±0.13，與COC1細(xì)胞比較，COC1/DDP細(xì)胞中FAL1基因的表達(dá)水平顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖2。

圖1 MTT法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞及其耐藥株對(duì)DDP的敏感度差異Figure 1 Differences in sensitivity of ovarian cancer cells and their drug-resistant cell lines to DDP detected by MTT

圖2 FAL1在卵巢癌細(xì)胞及其耐藥株中的表達(dá)情況Figure 2 Expression of FAL1 in ovarian cancer cells and their drug-resistant cell lines

2.2 FAL1-siRNA抑制SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞中FAL1 mRNA的表達(dá)

在SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染NCsiRNA未改變FAL1 mRNA表達(dá)水平（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA使SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞中FAL1 mRNA表達(dá)量顯著降低（均P＜0.01），證明兩種細(xì)胞均轉(zhuǎn)染成功，見(jiàn)圖3。

圖3 qRT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中FAL1 mRNA的表達(dá)量Figure 3 Expression of FAL1 mRNA in each group after transfection detected by qRT-PCR

2.3 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞化療耐藥性的影響

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用不同濃度的DDP處理各組細(xì)胞后，轉(zhuǎn)染NC-siRNA未改變細(xì)胞對(duì)DDP的敏感度（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞的增殖被DDP顯著抑制（P＜0.01）。在SKOV3/DDP細(xì)胞中，DDP對(duì)照組（control）、SKOV3/DDP-FAL1-NC組和SKOV3/DDP-FAL1-siRNA組細(xì)胞的IC50分別為（15.66±1.85）μg/ml、（15.25±1.12）μg/ml和（8.24±1.05）μg/ml。在COC1/DDP細(xì)胞中，DDP對(duì)照組（Control）、COC1/DDP-FAL1-NC組和COC1/DDP-FAL1-siRNA組細(xì)胞的IC50分別為（10.02±0.59）μg/ml、（9.69±0.68）μg/ml、（4.22±0.42）μg/ml，見(jiàn)圖4。

2.4 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞侵襲能力的影響

采用DDP處理48 h后，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染NCsiRNA未改變細(xì)胞的侵襲能力（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞的侵襲能力被DDP顯著抑制，穿膜數(shù)量顯著減少（P＜0.05），見(jiàn)圖5。

圖4 FAL1基因下調(diào)對(duì)細(xì)胞化療耐藥性的影響Figure 4 Effect of FAL1 gene downregulation on cell chemotherapy resistance

2.5 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞克隆能力的影響

采用DDP處理48h后，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染NCsiRNA未改變細(xì)胞的克隆能力（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞的克隆能力被DDP顯著抑制，克隆數(shù)量顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖6。

2.6 FAL1基因下調(diào)對(duì)細(xì)胞耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

結(jié)果顯示，一定劑量的DDP可使耐藥相關(guān)蛋白MDR-1、MPR-1、ABCG2的相對(duì)表達(dá)水平降低（P＜0.05），而與Control+DDP組比較，轉(zhuǎn)染NC-siRNA未改變耐藥相關(guān)蛋白MDR-1、MPR-1、ABCG2的相對(duì)表達(dá)水平（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞耐藥相關(guān)蛋白MDR-1、MPR-1、ABCG2的相對(duì)表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖7。

2.7 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

結(jié)果顯示，一定劑量的DDP可使SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞p38 MAPK、ERK1/2和JNK的磷酸化水平降低（P＜0.05）。而與Control+DDP組比較，轉(zhuǎn)染NC-siRNA未改變SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞p38 MAPK、ERK1/2和JNK的磷酸化水平（P＞0.05），轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞p38 MAPK、ERK1/2和JNK的磷酸化水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖8。

2.8 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP和COC1/DDP移植瘤的影響

結(jié)果顯示，與SKOV3/DDP-FAL1-NC組或COC1/DDP-FAL1-NC組比較，轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA使SKOV3/DDP-FAL1-siRNA和COC1/DDP-FAL1-siRNA細(xì)胞皮下移植瘤體積顯著縮?。≒＜0.01），見(jiàn)圖9。

3 討論

圖5 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞侵襲能力的影響 (×400)Figure 5 Effect of FAL1 gene downregulation on invasion abilities of SKOV3/DDP and COC1/DDP cells (×400)

圖6 FAL1基因下調(diào)對(duì)SKOV3/DDP和細(xì)胞克隆能力的影響Figure 6 Effect of FAL1 gene downregulation on cloning abilities of SKOV3/DDP and COC1/DDP cells

圖7 FAL1基因下調(diào)對(duì)細(xì)胞耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 7 Effect of FAL1 gene downregulation on expression of cell resistancerelated proteins

圖8 FAL1基因下調(diào)對(duì)MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Figure 8 Effect of FAL1 gene downregulation on expression of proteins related to MAPK signaling pathway

圖9 下調(diào)FAL-1對(duì)SKOV3/DDP和COC1/DDP皮下移植瘤的影響Figure 9 Effect of FAL-1 downregulation on SKOV3/DDP and COC1/DDP subcutaneous transplantation tumor

人類基因組中所包含的具有編碼蛋白質(zhì)功能的基因約20 000個(gè)，僅占整個(gè)基因組的1.5%左右，其余的基因被稱為非編碼RNA[9]。ncRNA最初被認(rèn)為是基因組轉(zhuǎn)錄“噪音”，隨著研究不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)無(wú)論是長(zhǎng)鏈或是短鏈ncRNA，均對(duì)多種人類疾病具有調(diào)控作用[10-12]。研究證明，卵巢癌中存在異常表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNAs），其中某些lncRNAs已被證實(shí)可通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲過(guò)程發(fā)揮抗癌或促癌作用[13-14]。1號(hào)染色體上局部擴(kuò)增的lncRNA FAL1是一種具有增強(qiáng)子樣活性的新型lncRNA，已被確定為多種癌癥的致癌基因，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，而FAL1的高表達(dá)水平也通常預(yù)示著惡性腫瘤患者預(yù)后不良[15]。

雖然Zhang等[16]指出FAL1在卵巢癌中呈高表達(dá)狀態(tài)，但FAL1與卵巢癌化療耐藥性的關(guān)系及其作用機(jī)制尚不清楚。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感度顯著低于其親本細(xì)胞株，而FAL1基因的表達(dá)水平顯著高于其親本細(xì)胞株，初步證實(shí)了lncRNA FAL1的高表達(dá)狀態(tài)與卵巢癌細(xì)胞呈現(xiàn)化療耐藥性有關(guān)，而下調(diào)FAL1基因則顯著降低了細(xì)胞的增殖、侵襲和克隆能力，表明沉默F(xiàn)AL1基因可以顯著降低卵巢癌耐藥細(xì)胞的生物學(xué)功能，提高其對(duì)化療藥物的敏感度。研究表明，ATP結(jié)合盒（ABC）外排蛋白家族，尤其是MDR-1、MPR-1、ABCG2的表達(dá)可賦予腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性藥物和靶向化療的耐藥性[17]。Eid等[18]研究表明，抑制ABCC1，ABCG2和ABCB1等多藥耐藥蛋白的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，減少耐藥性的產(chǎn)生。與上述研究一致，在本研究中，轉(zhuǎn)染FAL1-siRNA使細(xì)胞中耐藥相關(guān)蛋白MDR-1、MPR-1、ABCG2的表達(dá)水平顯著降低，細(xì)胞對(duì)DDP的敏感度增加，進(jìn)一步證明lncRNA FAL1的高表達(dá)狀態(tài)誘導(dǎo)了卵巢癌細(xì)胞的化療耐藥性，沉默F(xiàn)AL1基因則可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞化療耐藥性的產(chǎn)生。MAPK信號(hào)通路是人類癌癥中最常見(jiàn)的突變信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，靶向MAPK途徑的治療長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是一種具有良好應(yīng)用前景的癌癥治療策略，靶向作用于p38 MAPK、ERK、JNK等MAPK途徑關(guān)鍵基因可以抑制干擾細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等活動(dòng)，針對(duì)該信號(hào)通路的抑制劑ulixertinib在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出對(duì)晚期實(shí)體瘤有較好的治療效果和良好的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程[19-20]。Tang等[21]研究表明，激活MAPK途徑可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，并抑制細(xì)胞凋亡。與上述研究一致，本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AL1基因高表達(dá)的SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞中，p38 MAPK、ERK1/2、JNK的磷酸化水平較高，使用DDP處理后，p38 MAPK、ERK1/2、JNK的磷酸化水平降低，而下調(diào)FAL1基因可使耐藥細(xì)胞中p38 MAPK、ERK1/2、JNK的磷酸化水平顯著降低，表明lncRNA FAL1可能通過(guò)激活MAPK信號(hào)通路促進(jìn)卵巢癌SKOV3細(xì)胞產(chǎn)生化療耐藥性，沉默F(xiàn)AL1基因則可顯著抑制MAPK信號(hào)通路的活化。

綜上所述，沉默F(xiàn)AL1基因可顯著降低卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株的化療耐藥性，抑制耐藥細(xì)胞在體內(nèi)的增殖能力，其作用機(jī)制與抑制MAPK信號(hào)通路的活化有關(guān)。然而，LncRNA調(diào)控方式有多種，本研究?jī)H在動(dòng)物和細(xì)胞水平進(jìn)行了初步探討，其具體作用機(jī)制仍需更多研究加以驗(yàn)證。