γδT細(xì)胞與自身免疫性疾病關(guān)系的研究進(jìn)展

武文燕 宋守君 薛海波

1濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東 256603；2濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，山東 264010

γδT 淋巴細(xì)胞是通過(guò)無(wú)限制性主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）直接識(shí)別入侵生物表面的抗原發(fā)揮其毒性T 細(xì)胞功能的一類(lèi)T 細(xì)胞亞群［1］。γδT 細(xì)胞分布于機(jī)體的黏膜、淋巴組織、上皮接觸組織（皮膚和胃腸道）以及脾臟的紅髓中，約占整個(gè)T 細(xì)胞的30%，γδT細(xì)胞只占人類(lèi)循環(huán)T細(xì)胞池的小部分。

自身免疫性疾病是機(jī)體對(duì)自身抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)多系統(tǒng)損害的疾病。其包括：自身免疫性甲狀腺疾?。╝utoimmune thyroid disease，AITD）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）、胰島素依賴(lài)性糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化病等。近年來(lái)隨著社會(huì)工業(yè)化發(fā)展，大量研究顯示全球自身免疫性疾病發(fā)病率逐年升高，且病情復(fù)雜，治愈率低，加重了患者和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前臨床治療方案較為單一且不良反應(yīng)較大，嚴(yán)重影響患者預(yù)后及生活質(zhì)量。闡釋?duì)忙腡 細(xì)胞在自身免疫性疾病中的作用不僅對(duì)疾病發(fā)病機(jī)制有更深理解，也為γδT 細(xì)胞靶向治療的發(fā)展提供理論支持。本文就γδT 細(xì)胞與自身免疫性疾病的關(guān)系的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 γδT細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及研究進(jìn)展

1.1 γδT 細(xì)胞的分類(lèi) γδT 細(xì)胞是不依賴(lài)于外周啟動(dòng)和分化，在個(gè)體發(fā)育早期有明顯的成熟發(fā)育途徑，是第1 個(gè)顯示功能反應(yīng)性的T 細(xì)胞群體［2］。γδT 細(xì)胞可以在胸腺中發(fā)育性編輯以產(chǎn)生獨(dú)特分子的離散效應(yīng)子集［3］。γδT 細(xì)胞的多樣性和復(fù)雜性是特定Vγ/Vδ 配對(duì)的結(jié)果，優(yōu)先地，Vδ1 鏈與不同的Vγ1 家族（Vγ2/3/4/5/8）配對(duì)，分布于皮膚、脾臟、肝臟等；而Vδ2 通常與Vγ9 鏈配對(duì)，主要分布于外周血中；Vδ3 細(xì)胞常與Vγ2 或Vγ3 配對(duì)，可在外周血和肝臟中發(fā)現(xiàn)［4］。每個(gè)亞型的獨(dú)特特征決定了免疫調(diào)節(jié)在維持體內(nèi)平衡和自我耐受方面的有效性以及導(dǎo)致自身免疫和慢性炎癥病理結(jié)果的上升［5］。

1.2 γδT 細(xì)胞的功能 γδT 細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的第3 個(gè)分支，被認(rèn)為是第1 個(gè)能夠提供免疫效應(yīng)T 細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的宿主防御機(jī)制的T 淋巴細(xì)胞［6］。γδT 細(xì)胞在正常組織和炎癥組織中的不均勻分布和解剖定位在自身免疫、同種免疫中起重要作用。由于γδT 細(xì)胞是先天性淋巴細(xì)胞，它能感覺(jué)到自身的局部環(huán)境，并通過(guò)T 細(xì)胞抗原受體（T cell receptor，TCR）、細(xì)胞因子受體、共刺激受體、抑制受體和自然殺傷受體的組合進(jìn)行調(diào)節(jié)。這些受體識(shí)別各種環(huán)境配體或刺激物、誘導(dǎo)信號(hào)級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，進(jìn)而決定γδT細(xì)胞的身份和效應(yīng)功能［7］?；罨摩忙腡細(xì)胞具有多種效應(yīng)功能，包括分泌促炎因子、抗原提呈能力、免疫調(diào)節(jié)功能、輔助B 細(xì)胞功能、誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞的分化和成熟等。

1.2.1 細(xì)胞因子的產(chǎn)生 γδT 細(xì)胞遵循獨(dú)特的胸腺內(nèi)外功能成熟途徑，根據(jù)細(xì)胞因子譜，γδT 細(xì)胞可分為白細(xì)胞介素（IL）-17 產(chǎn)生的γδT 細(xì)胞、干擾素（IFN）-γ 產(chǎn)生的γδT細(xì)胞和抗原提呈的γδT 細(xì)胞［8］。γδT 細(xì)胞在免疫應(yīng)答早期就動(dòng)員，在胸腺成熟期間，γδT 細(xì)胞亞群的印記導(dǎo)致在沒(méi)有TCR 激活的情況下產(chǎn)生強(qiáng)效促炎性IL-17 的先天能力［9］；在自身免疫模型中Vδ1γδT 細(xì)胞可活化產(chǎn)生大量IL-10，少量IL-2、IL-4、INF-γ，還可通過(guò)凋亡相關(guān)因子配體相互作用及穿孔素顆粒等途徑產(chǎn)生細(xì)胞毒作用；Vδ2γδT 細(xì)胞其亞群存在感染部位，產(chǎn)生大量的INF-γ；Vδ3γδT 可以釋放Th1、Th2、Th17 細(xì)胞因子，誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞成為抗原提呈細(xì)胞。它們通過(guò)γδT 細(xì)胞自身或其他免疫細(xì)胞直接或間接誘導(dǎo)自身免疫應(yīng)答［10］。

1.2.2 識(shí)別抗原 γδT 細(xì)胞對(duì)宿主免疫能力的貢獻(xiàn)是獨(dú)特的，因?yàn)樗鼈兙哂歇?dú)特的抗原識(shí)別特性［1］。表達(dá)的γδT抗原受體作為模式識(shí)別受體，具有識(shí)別病原體相關(guān)分子模式和應(yīng)激誘導(dǎo)自身抗原的能力［3］。根據(jù)不同的亞型，γδT細(xì)胞可以識(shí)別不同類(lèi)型的抗原。Vδ1T 細(xì)胞可以識(shí)別MHCⅠ類(lèi)鏈相關(guān)抗原A 和B 以及上皮細(xì)胞上頻繁表達(dá)的應(yīng)激誘導(dǎo)分子，并呈γδTCR 依賴(lài)性［11］。γδT 細(xì)胞對(duì)MHCⅠ類(lèi)分子T22 的識(shí)別基本是由TCRδCDR3 區(qū)域的一個(gè)特定序列模體決定的［12］。Vδ2T 細(xì)胞和Vδ1T 細(xì)胞可反向激活Toll 樣受體的表達(dá)［13］。激活后，Vδ2T 細(xì)胞以下方式發(fā)揮其潛在的效應(yīng)功能：產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子和裂解酶；進(jìn)行細(xì)胞毒性和非細(xì)胞毒抗病毒活性；向CD4+和CD8+T 細(xì)胞呈遞抗原。Vδ3T 細(xì)胞可被CD1d 激活，CD1d 可與糖脂結(jié)合，殺死CD1d 靶細(xì)胞，釋放多種細(xì)胞因子（包括Th1、Th2 和Th17）［14］。

1.2.3 輔助B 細(xì)胞 γδT 細(xì)胞對(duì)體液免疫有很強(qiáng)的影響，具體來(lái)說(shuō)，B 細(xì)胞從骨髓開(kāi)始的一系列發(fā)育步驟分化為抗體產(chǎn)生的漿細(xì)胞過(guò)程都受到影響，表明γδT 細(xì)胞有能力調(diào)節(jié)B 細(xì)胞發(fā)育的精確階段［15］?；罨摩忙腡 細(xì)胞能夠形成γδT-B 細(xì)胞協(xié)作，控制循環(huán)免疫球蛋白水平（所有亞類(lèi)）并影響自身抗體的產(chǎn)生［12］。γδT 細(xì)胞對(duì)IL-4的產(chǎn)生有強(qiáng)烈影響，IL-4 是一種1 型細(xì)胞因子，在個(gè)體發(fā)育早期、終生和免疫反應(yīng)中表達(dá)，是控制B 細(xì)胞發(fā)育和成熟的關(guān)鍵細(xì)胞因子［13］。在缺乏Vγ4T細(xì)胞的情況下，由于γδT細(xì)胞間隔的改變和不能產(chǎn)生IL-4，所有這些B 細(xì)胞亞群均減少［14］。Vδ1γδT 細(xì)胞對(duì)活化B 細(xì)胞的反應(yīng)依賴(lài)于B 細(xì)胞表達(dá)B7 和CD39，在與多克隆B 細(xì)胞活化和增殖的疾病中，γδT 細(xì)胞的擴(kuò)增一直被觀察到。B 細(xì)胞與T 細(xì)胞共同作用于適應(yīng)性免疫反應(yīng)，都具有抗原特異性的克隆表達(dá)受體，其中B 細(xì)胞最終產(chǎn)生特異性抗體，T細(xì)胞幫助他們達(dá)到分化最終水平［10］。

2 γδT細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子與自身免疫性疾病的研究進(jìn)展

γδT 細(xì)胞在正常組織和炎癥組織中的不均勻分布和解剖定位在同種免疫、自身免疫或免疫中起著重要作用［1］。在某些自身免疫疾病患者的病變中，γδT細(xì)胞在浸潤(rùn)性T細(xì)胞中的比例異常增高，γδT 細(xì)胞是促炎細(xì)胞因子IL-17、IL-23、IFN-γ、TGF-β 的主要來(lái)源，這些炎性分子負(fù)責(zé)形成炎癥環(huán)境，通過(guò)不同的途徑來(lái)增強(qiáng)疾病進(jìn)展［15］。不同的疾病表型和結(jié)果與γδT 細(xì)胞的存在或不存在之間的關(guān)系可以清楚地辨別出來(lái)。現(xiàn)就γδT 細(xì)胞分泌的炎性細(xì)胞因子與自身免疫性疾病的關(guān)系進(jìn)行闡述。

2.1 促炎細(xì)胞因子IL-17 γδT 細(xì)胞獲得了胚胎胸腺發(fā)育中產(chǎn)生IL-17 的能力。表達(dá)γδT 細(xì)胞受體的T 細(xì)胞是促炎細(xì)胞因子IL-17 的重要先天來(lái)源［16］。IL-17 的強(qiáng)大炎癥作用主要與招募免疫細(xì)胞的能力以及與其他促炎性細(xì)胞因子的協(xié)同作用有關(guān)［17］。

2.1.1 IL-17 參與自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)病AITD 即橋本甲狀腺炎（hashimoto thyroiditis，HT）和Graves?。℅raves disease，GD），是常見(jiàn)的器官特異性自身免疫性疾病，以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和甲狀腺纖維化為特征。HT 特征在于大量的γδT 細(xì)胞浸潤(rùn)（其中以Vδ1亞型細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)）［18］，γδT細(xì)胞促進(jìn)HT 患者自身抗體的產(chǎn)生，通過(guò)1 個(gè)細(xì)胞表面FasL和Fas 的結(jié)合實(shí)現(xiàn)自身免疫性T 淋巴細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在HT 和GD 患兒中，血清sFasL 水平均與IL-17 水平呈正相關(guān)，提示sFasL 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能協(xié)同IL-17 介導(dǎo)的炎性反應(yīng)共同參與AITD疾病發(fā)生［19］。

IL-17在HT發(fā)病機(jī)制中的重要性在不同臨床試驗(yàn)中均得到證實(shí)，并得到疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹С?。?shí)驗(yàn)研究證實(shí)了甲狀腺纖維化與炎癥介質(zhì)增強(qiáng)的關(guān)系，在初次診斷的HT患者局部甲狀腺組織中，血清IL-17 水平及IL-17 蛋白的表達(dá)明顯高于正常人［20］。甲狀腺纖維化與炎癥介質(zhì)之間存在相關(guān)性，IL-17 及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的炎癥因子形成炎癥環(huán)境，進(jìn)一步證實(shí)，IL-17 可通過(guò)促進(jìn)間質(zhì)纖維化進(jìn)一步加重HT 甲狀腺組織局部炎性反應(yīng)，繼而導(dǎo)致甲狀腺組織局部纖維化［21］。

2.1.2 IL-17 參與SLE 的發(fā)病 SLE 是一種復(fù)雜的多系統(tǒng)自身免疫性疾病，影響皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟和神經(jīng)組織等多個(gè)器官的損傷［22］。盡管許多研究表明，由于γδT 細(xì)胞的過(guò)度活化、凋亡和自噬，SLE 患者外周血中γδT 細(xì)胞數(shù)量較低［23］，但在人類(lèi)SLE 和動(dòng)物模型中的一些研究已經(jīng)證明γδT細(xì)胞在發(fā)病中的作用［22］。

γδT 細(xì)胞可能通過(guò)產(chǎn)生各種炎性細(xì)胞因子IL-17、TGF-β、IL-4、IFN-γ 和IL-10 參與SLE 的發(fā)?。?4］，大量臨床試驗(yàn)表明SLE 患者外周血中IL-17 水平顯著升高。SLE 患者的Vδ2γδT 細(xì)胞減少和Vδ3γδT 細(xì)胞增加，調(diào)節(jié)失衡的T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以促進(jìn)IL-17的產(chǎn)生［25］，SLE合并狼瘡性腎炎患者IL-17 水平升高，且IL-17A 水平與疾病活動(dòng)性評(píng)分呈正相關(guān)。然而活動(dòng)期SLE 患者的外周血細(xì)胞表現(xiàn)出較高的凋亡速度，推測(cè)在活動(dòng)期SLE 患者中γδT 細(xì)胞增殖受抑制與凋亡增加有關(guān)［26］。

2.1.3 IL-17 參與自身免疫性肝炎的發(fā)病 肝臟是機(jī)體進(jìn)行全面免疫調(diào)節(jié)或防御的重要器官，肝臟中γδT 細(xì)胞是功能特異性亞群，具有調(diào)節(jié)肝臟疾病發(fā)展的功能［27］。γδT細(xì)胞在脂肪性肝炎中發(fā)揮中心性作用，γδT 細(xì)胞通過(guò)CCR2、CCR5 和NOD2 信號(hào)進(jìn)入肝臟，并以ICOS-ICOSL 依賴(lài)的方式向IL-17A+表型傾斜［28］。An 等［29］報(bào)道，來(lái)自腸道微生物群的脂質(zhì)抗原由肝細(xì)胞CD1d 提供，并激活常駐γδT細(xì)胞，維持IL-17 的產(chǎn)生，促進(jìn)非酒精性脂肪肝的發(fā)生。數(shù)據(jù)表明在正常小鼠肝臟中，γδT 細(xì)胞表達(dá)IFN-γ、IL-22、TNF-α和IL-17A。然而，在脂肪性肝炎期間，肝臟γδT細(xì)胞（特別是Vγ4γδT 細(xì)胞亞群），在ConA 激發(fā)的肝臟中產(chǎn)生IL-17，IL-17 介導(dǎo)的肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、Kuppfer 細(xì)胞和激活導(dǎo)致進(jìn)一步促炎細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生、活性氧的產(chǎn)生和膠原沉積的增加，加重?fù)p傷，使肝細(xì)胞易于死亡和疾病進(jìn)展［30］。說(shuō)明γδT 細(xì)胞的活化及其IL-17 的產(chǎn)生是肝臟炎癥和纖維化發(fā)生發(fā)展的必要條件［31］。同樣，我們發(fā)現(xiàn)人類(lèi)Vδ2γδT 細(xì)胞在乙型肝炎病毒感染引起的肝臟炎癥中起保護(hù)作用，隨乙型肝炎病毒感染由免疫耐受激活發(fā)展，外周血Vδ2γδT 細(xì)胞數(shù)量減少，隨疾病的進(jìn)展，Vδ2γδT 獲得CD45RA+CCR7終末分化的效應(yīng)記憶表型。Vδ2γδT細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生IFN-γ抑制CD4T細(xì)胞分化IL-17［32］。

2.2 促炎細(xì)胞因子IL-23 IL-23 是一種主要的促炎細(xì)胞因子，負(fù)責(zé)啟動(dòng)多種細(xì)胞因子如IL-1、IL-6，趨化因子如CXCL、CXCL-2和IL-8的分泌；并且能夠促進(jìn)記憶性T細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)IL-17 的產(chǎn)生［16］。廣泛的病原體相關(guān)分子模式和細(xì)胞因子可以觸發(fā)IL-23 介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，并增加IL-23 的多種效應(yīng)，使這種細(xì)胞因子成為炎癥中心［33］。IL-23介導(dǎo)的炎性反應(yīng)失調(diào)可能導(dǎo)致慢性炎癥和組織損傷，這導(dǎo)致了IL-23與銀屑病等多種自身免疫疾病有關(guān)。

銀屑病是一種主要由T 淋巴細(xì)胞異常激活引起的自身免疫性疾病，其特征是角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖和白細(xì)胞大量浸潤(rùn)，有明顯界限的鱗狀紅斑斑塊。IL-23主要由真皮樹(shù)狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，IL-23已明確與銀屑病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，銀屑病皮損中IL-23、IL-17 的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)增加［34］。研究表明，IL-17分泌型γδT 細(xì)胞在銀屑病皮損中表達(dá)頻率較高，即產(chǎn)生IL-23 刺激皮膚γδT 細(xì)胞擴(kuò)張，真皮γδT細(xì)胞組成性表達(dá)IL-23受體，IL-23通過(guò)與IL-23受體相互作用和激活下游信號(hào)通路，IL-23 主要刺激Vγ4 和Vγ6T細(xì)胞亞群產(chǎn)生IL-17［35］，從而加劇了局部炎癥的發(fā)生發(fā)展。局部皮膚炎癥通過(guò)皮膚γδT 細(xì)胞群的組成和性質(zhì)的長(zhǎng)期和全身變化，導(dǎo)致對(duì)相同刺激的更快和更強(qiáng)的二級(jí)反應(yīng)［36］。后續(xù)研究表明，Vγ4γδT細(xì)胞主要誘發(fā)皮膚炎癥，是IL-17的主要產(chǎn)生者。具體來(lái)說(shuō)，脂聯(lián)素是胰島素代謝的介質(zhì)，通過(guò)結(jié)合脂聯(lián)素1 抑制小鼠真皮Vγ4γδT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-17，脂聯(lián)素缺乏小鼠表皮Vγ4γδT細(xì)胞浸潤(rùn)增加，出現(xiàn)嚴(yán)重的皮膚炎癥［37］。IL-23/IL-17 軸在銀屑病發(fā)病中的中心作用一直是研究重點(diǎn)，阻斷IL-17A、IL-17 受體單位或IL-23 P19 可以逆轉(zhuǎn)銀屑病的臨床、組織和分子特征［38］；并且γδT 細(xì)胞或IL-17 受體缺乏可顯著降低IL-23 誘導(dǎo)的表皮厚度和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而IL-23/IL-17抑制劑已顯示出治療作用［37］。

3 小結(jié)與展望

外周血γδT 細(xì)胞是先天性和適應(yīng)性亞群的異質(zhì)混合體，機(jī)體不同器官間的免疫細(xì)胞的適當(dāng)分布是保證免疫系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)的必要條件。γδT 細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)度的促炎因子、致病性自身抗體，最終導(dǎo)致自身免疫性疾病，相反有研究表明，γδT 細(xì)胞在阻止自身免疫反應(yīng)和減輕自身免疫反應(yīng)中有調(diào)節(jié)作用。目前γδT 細(xì)胞在自身免疫反應(yīng)中的作用證據(jù)尚且不足，限制了更為確切的發(fā)病機(jī)制。因此未來(lái)仍需繼續(xù)尋找γδT 細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子的作用機(jī)制，為自身免疫性疾病的診斷、治療提供更為直接的證據(jù)和更為方便的指導(dǎo)。