Serpin B9與腫瘤及腫瘤干細(xì)胞的研究進(jìn)展

王文君，王 嬌，葉小群

中國(guó)全國(guó)腫瘤登記中心和美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)的數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)前腫瘤新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)均居高不下，給全世界的醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)均帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[1-2]。因此，尋找腫瘤治療新靶點(diǎn)，研發(fā)抗腫瘤藥物一直是亟待解決的問(wèn)題。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展受多種因素的影響。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤免疫逃逸能夠通過(guò)隱藏腫瘤細(xì)胞的免疫原性，逃避機(jī)體的免疫監(jiān)管系統(tǒng)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。因此，針對(duì)腫瘤免疫逃逸的免疫治療應(yīng)運(yùn)而生，而靶向程序性死亡受體1（programmed cell death protein 1，PD-1）/ 程序性死亡受體-配體1（programmed cell death-ligand 1，PD-L1）通路治療是其中的主要代表[3]。此外，其他的免疫逃逸機(jī)制也逐漸受到學(xué)者的關(guān)注。

絲氨酸蛋白酶抑制劑B9（serine proteinase inhibitor，Serpin B9）是一種核質(zhì)分布的絲氨酸蛋白酶抑制劑，其基因定位于染色體6p25 區(qū)[4]。Serpin B9 的主要作用機(jī)制是抑制顆粒酶B（granzyme B）的殺傷作用，而顆粒酶B 主要由淋巴細(xì)胞脫顆粒釋放，可以發(fā)揮促細(xì)胞凋亡、抗病毒和抗腫瘤的作用。在腫瘤中，Serpin B9 能夠通過(guò)抑制顆粒酶B 對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷而保護(hù)腫瘤細(xì)胞，從而發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[5]。最新的研究指出，敲除Serpin B9 基因后可使腫瘤細(xì)胞被顆粒酶B 所殺傷，而Serpin B9 抑制劑不僅能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡以及抑制腫瘤的生長(zhǎng)，還能夠延長(zhǎng)成瘤小鼠的生存時(shí)間[6]，提示Serpin B9 可能是一種新的腫瘤分子靶點(diǎn)。因此，本文從Serpin B9 的結(jié)構(gòu)、功能及調(diào)控腫瘤組等方面，對(duì)Serpin B9 在腫瘤及腫瘤干細(xì)胞中的作用進(jìn)行綜述。

1 絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族

絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族是一類具有共同來(lái)源、結(jié)構(gòu)序列高度同源而功能高度分化的蛋白酶抑制劑超家族，最早在人血漿中被發(fā)現(xiàn)[7-8]，絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族廣泛存在于自然界中，包括細(xì)菌、真菌、植物和動(dòng)物等，至今已鑒定超過(guò)1 000 種，按照共同的起源分為16 個(gè)亞組（A～P）。其中，在人類中發(fā)現(xiàn)13 個(gè)B 類亞組成員，即Serpin B1～Serpin B13[9]。絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族是一類單鏈蛋白，通常由350～500 個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量為（40～100）×103，其主要作用位點(diǎn)是蛋白酶識(shí)別域靠近其C 端的反應(yīng)中心環(huán)（reactive center loop，RCL），裂解的RCL 與靶蛋白酶一起插入Serpin 的β-折疊A 中，引發(fā)Serpin 構(gòu)象變化，形成穩(wěn)定的共價(jià)復(fù)合物，最終導(dǎo)致靶蛋白酶失活[10]。研究發(fā)現(xiàn)，Serpin 能夠抑制與炎性反應(yīng)、補(bǔ)體、凝血及免疫有關(guān)的蛋白酶，參與肺氣腫、肝硬化、血管性水腫、癡呆、糖尿病、病毒性肝炎、血栓及腫瘤等疾病的病理和生理過(guò)程[8]。近期有研究指出，Serpin B9 與人類腫瘤密切相關(guān)，能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，提示其可能成為腫瘤治療新靶點(diǎn)。

2 Serpin B9 的結(jié)構(gòu)和功能

Serpin B9 最早是從人胎盤cDNA 文庫(kù)中篩選出來(lái)的，包含7 個(gè)外顯子和6 個(gè)內(nèi)含子，編碼含有374 個(gè)氨基酸的單鏈蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量為42×103[4]。Serpin B9 具有高度保守的三級(jí)結(jié)構(gòu)，包括9 個(gè)α 螺旋、3 個(gè)β 折疊以及羧基末端1 個(gè)功能活性反應(yīng)中心RCL，該區(qū)域存在1 個(gè)特異的PI-PI’位點(diǎn)（一對(duì)高度保守的半胱氨酸），該位點(diǎn)的氨基酸殘基決定了蛋白酶抑制劑的特異性[11]。如前所述，Serpin B9 通過(guò)抑制顆粒酶B在機(jī)體內(nèi)參與疾病的發(fā)生和發(fā)展。顆粒酶B 一般由細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）和自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞脫顆粒釋放，是CTL/NK 細(xì)胞誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡的重要介質(zhì)[5]。Serpin B9 能在RCL 中形成二硫鍵，阻止PI’鍵被顆粒酶B 裂解，抑制顆粒酶B 的殺傷作用而保護(hù)細(xì)胞[11-12]。Serpin B9 廣泛存在于人體各種組織中，包括血液、心臟、肺和肝臟，尤其是在胎盤和睪丸中，而卵巢和眼睛中也發(fā)現(xiàn)Serpin B9 高表達(dá)，能夠抑制顆粒酶B 的殺傷作用而發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用[13]。Serpin B9 有特異的絲氨酸蛋白酶抑制劑屬性。越來(lái)越多的臨床研究表明，Serpin B9 也是一個(gè)頗有前景的疾病診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)，例如診斷血栓形成或評(píng)估炎癥及病毒感染的預(yù)后[7,14]。

3 Serpin B9 與腫瘤

研究表明，腫瘤免疫逃逸是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和進(jìn)展甚至治療失敗的原因之一。腫瘤的免疫逃逸是指盡管機(jī)體擁有正常的免疫監(jiān)管系統(tǒng)，但是腫瘤仍然能夠保持異質(zhì)性且持續(xù)生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。最早在T 細(xì)胞淋巴瘤中的研究發(fā)現(xiàn)，Serpin B9參與腫瘤的免疫逃逸，并且在不同程度上影響惡性淋巴瘤的免疫治療效果[16-17]。JIANG 等[6]研究證實(shí)，Serpin B9 能夠抑制顆粒酶B 對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用而發(fā)揮保護(hù)腫瘤細(xì)胞的作用，上調(diào)Serpin B9 的表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，而下調(diào)Serpin B9 的表達(dá)則能抑制腫瘤的發(fā)展，這與近年的臨床研究結(jié)果相一致。對(duì)生物信息學(xué)進(jìn)行挖掘，結(jié)果提示Serpin B9 的表達(dá)與葡萄膜黑素瘤的不良預(yù)后相關(guān)[18]。同樣，間變大細(xì)胞淋巴瘤研究也發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 的表達(dá)與臨床結(jié)局尤其是不良預(yù)后密切相關(guān)[19-20]。目前的大部分研究已證實(shí)，Serpin B9 對(duì)腫瘤具有保護(hù)作用；但也有部分研究未發(fā)現(xiàn)這一結(jié)果。一項(xiàng)結(jié)直腸癌研究發(fā)現(xiàn)，癌旁正常組織中Serpin B9 高表達(dá)與較好的預(yù)后相關(guān)[21]，但該研究是針對(duì)Serpin B9 在正常組織中的表達(dá)情況，而不是在腫瘤組織中的表達(dá)情況，因此不具有代表性。總之，目前的研究認(rèn)為Serpin B9能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡和腫瘤的免疫逃逸，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥等過(guò)程。

3.1 Serpin B9 與腫瘤細(xì)胞凋亡

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥等都涉及腫瘤細(xì)胞凋亡。研究認(rèn)為，Serpin B9 能夠保護(hù)腫瘤細(xì)胞，避免腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。肺癌相關(guān)研究指出，相較于低表達(dá)Serpin B9 的肺腺癌細(xì)胞，高表達(dá)Serpin B9 的肺腺癌細(xì)胞凋亡明顯減少，表明Serpin B9 有助于腫瘤細(xì)胞對(duì)抗凋亡[22-23]。同樣，高表達(dá)Serpin B9 的白血病細(xì)胞能夠抵抗顆粒酶B 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，因此研究者認(rèn)為Serpin B9的表達(dá)及顆粒酶B 的活性能夠預(yù)測(cè)白血病的免疫治療效果[19]。除此之外，研究發(fā)現(xiàn)Serpin B9 在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)差異也對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡具有重要意義。在小兒急性淋巴細(xì)胞白血病患者中，白血病細(xì)胞中Serpin B9 的表達(dá)差異改變了顆粒酶B 和其他殺傷細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的敏感性，尤其是Serpin B9 過(guò)表達(dá)可明顯抑制移植物抗白血病效應(yīng)[24]。近年來(lái)的研究還指出，Serpin B9 可能參與促進(jìn)癌前病變進(jìn)展為惡性腫瘤的過(guò)程。前列腺癌相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)Serpin B9 能夠保護(hù)前列腺癌細(xì)胞而避免其凋亡，還有研究發(fā)現(xiàn)前列腺的炎性反應(yīng)可能觸發(fā)Serpin B9 的表達(dá)上調(diào)，由此提示Serpin B9 在癌前病變階段或腫瘤早期均表達(dá)上調(diào)，使細(xì)胞在惡變?cè)缙诿庥诎l(fā)生凋亡，進(jìn)而發(fā)展為腫瘤[25]。

Serpin B9 主要通過(guò)抑制顆粒酶B 抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，而顆粒酶B 能夠通過(guò)多種機(jī)制介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。在NK/T 細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中，顆粒酶B 通過(guò)天冬氨酸酶依賴性和非天冬氨酸酶依賴性2 種機(jī)制誘導(dǎo)NK/T 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞死亡，進(jìn)而導(dǎo)致廣泛性壞死[26]。此外，在某些腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）敏感性腫瘤細(xì)胞系中，Serpin B9 能夠抑制TNF 及TNF 凋亡相關(guān)配體和Fas 配體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡[27]。除了直接抑制顆粒酶B 發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡作用以外，Serpin B9 還能協(xié)同其他的蛋白酶抑制劑抵御顆粒酶B 的殺傷作用。例如，參與抑制細(xì)胞毒性的絲氨酸蛋白酶抑制劑（serine protease inhibitor involved in cytotoxicity inhibition，SPI-CI）能夠保護(hù)細(xì)胞免受穿孔素和（或）顆粒酶B 的殺傷。有研究指出，SPI-CI 可與Serpin B9 協(xié)同阻止細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用[28]。上述結(jié)果均表明，Serpin B9 可以通過(guò)各種機(jī)制保護(hù)腫瘤細(xì)胞而避免其凋亡，有望成為新的針對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子靶點(diǎn)。

3.2 Serpin B9 與腫瘤免疫

免疫系統(tǒng)對(duì)于腫瘤而言表現(xiàn)出雙面性。一方面，腫瘤的免疫逃逸能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展；另一方面，機(jī)體的免疫防御能夠殺傷腫瘤細(xì)胞甚至消滅腫瘤。Serpin B9 可能既參與了腫瘤的免疫逃逸，也參與了機(jī)體的免疫殺傷，在腫瘤免疫中扮演著復(fù)雜的角色。MEDEMA 等[29]發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 表達(dá)上調(diào)是提示T 細(xì)胞免疫治療腫瘤失敗的重要參數(shù)。各類淋巴瘤研究結(jié)果均顯示，淋巴瘤細(xì)胞高表達(dá)Serpin B9 能夠引發(fā)機(jī)體的免疫紊亂，促進(jìn)正常細(xì)胞發(fā)生惡變[30]。為更深入地研究Serpin B9，有研究采用慢病毒感染方法使Serpin B9 在人宮頸癌HeLa 細(xì)胞或人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高表達(dá)Serpin B9的腫瘤細(xì)胞的存活時(shí)間更長(zhǎng)，提示Serpin B9 可能使其獲得了更強(qiáng)的抵抗免疫殺傷的能力[31]。除此之外，霍奇金淋巴瘤患者的研究結(jié)果提供了更加直觀的證據(jù)，即Serpin B9 能夠通過(guò)干擾免疫系統(tǒng)，幫助腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸的證據(jù)；大多數(shù)的經(jīng)典霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系均高表達(dá)Serpin B9，能夠?qū)乖鰪?qiáng)顆粒酶B 殺傷效應(yīng)的免疫治療，從而促進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[32]。同樣，在乳腺癌和肺癌中也觀察到Serpin B9 能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[23,33]。鑒于Serpin B9 的重要性，研究者在Serpin B9 陽(yáng)性表達(dá)腫瘤（例如復(fù)發(fā)性霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和肺癌等）中構(gòu)建了Serpin B9 不敏感識(shí)別顆粒酶B 的細(xì)胞系，以誘導(dǎo)顆粒酶B 殺傷腫瘤細(xì)胞，這或許能夠成為一種新的免疫療法[32]。臨床研究也發(fā)現(xiàn)了相同的結(jié)果，有研究結(jié)果顯示Serpin B9 的表達(dá)水平與腫瘤分期和不良預(yù)后呈正相關(guān)。例如，Serpin B9 在肺癌細(xì)胞中高表達(dá)，而肺癌細(xì)胞可以利用Serpin B9增強(qiáng)免疫逃逸效應(yīng)，并且該作用隨肺癌分期的升高而明顯增強(qiáng)[34]。還有研究指出，Serpin B9 參與彌漫大B 淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤的免疫逃逸，避免細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷作用；生存分析結(jié)果提示，Serpin B9 也是不良預(yù)后的主要預(yù)測(cè)指標(biāo)[35]。上述研究證據(jù)均表明，Serpin B9 能夠增加腫瘤的免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，與腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)。

3.3 Serpin B9 與腫瘤發(fā)生及腫瘤細(xì)胞增殖

研究發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生，甚至在癌前病變中顯現(xiàn)出類似于腫瘤標(biāo)志物的價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)，相較于術(shù)后未發(fā)生皮膚鱗狀細(xì)胞癌的腎移植術(shù)后患者，腎移植術(shù)后發(fā)生皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者的Serpin B9 表達(dá)水平明顯升高，而且在復(fù)發(fā)性皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者中發(fā)現(xiàn)Serpin B9高甲基化的循環(huán)T 細(xì)胞，提示Serpin B9 高表達(dá)是腎移植術(shù)后皮膚鱗狀細(xì)胞癌的高危因素[36]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)不同胎齡胎盤組織滋養(yǎng)層細(xì)胞中的Serpin B9 表達(dá)水平存在明顯差異。與早孕胎盤相比，部分和完全葡萄胎滋養(yǎng)層細(xì)胞中的Serpin B9 表達(dá)水平明顯升高，其中以絨癌細(xì)胞系中的Serpin B9 表達(dá)水平最高。上述結(jié)果提示，滋養(yǎng)層細(xì)胞中Serpin B9 的表達(dá)水平與相應(yīng)的免疫逃逸水平一致，并且妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞中Serpin B9表達(dá)上調(diào)可能有助于腫瘤發(fā)生[37]。對(duì)生物信息學(xué)的挖掘結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)?？谇击[狀細(xì)胞癌腫瘤易感基因篩查結(jié)果顯示，Serpin B9 在候選基因中排名第一位[38]。對(duì)兒童原發(fā)性惡性腦腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，29%在腫瘤發(fā)生期間檢測(cè)出Serpin B9的表達(dá)[39]。大量研究證實(shí)，Serpin B9 是腫瘤的高危因素，能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，但目前鮮少研究關(guān)注具體的作用機(jī)制。

目前的研究認(rèn)為，Serpin B9 能夠促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。正如前文所述，研究提示當(dāng)腫瘤與宿主缺乏Serpin B9 時(shí)，腫瘤進(jìn)展受到明顯抑制[6]。已有許多研究證實(shí)，Serpin B9 可以抑制顆粒酶B對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，因而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。一項(xiàng)大型的肝癌隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)，78.1%的肝癌組織中表達(dá)Serpin B9，明顯高于癌旁正常組織的35.0%，并且肝癌組織中Serpin B9 的表達(dá)水平與腫瘤大小、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期密切相關(guān)；COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示，Serpin B9 是肝癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，與總生存率呈負(fù)相關(guān)[40]。然而，也有研究得出了不同的結(jié)果，上調(diào)肝癌細(xì)胞中Serpin B9 的表達(dá)后，肝癌細(xì)胞凋亡率增加，而增殖能力降低；采用siRNA 下調(diào)Serpin B9 表達(dá)后，肝癌細(xì)胞凋亡能力明顯降低，而增殖能力增強(qiáng)；由此提示，Serpin B9 的表達(dá)似乎可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡[40]。另有部分研究在其他類型腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果。在鼻型NK/T 細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中研究發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 表達(dá)缺乏與腫瘤細(xì)胞凋亡減少以及不良預(yù)后呈正相關(guān)，提示Serpin B9 低表達(dá)甚至不表達(dá)與腫瘤進(jìn)展相關(guān)[41]。雖然大部分研究證實(shí)Serpin B9 對(duì)腫瘤具有促進(jìn)作用，但也有研究得到了不同的結(jié)果，由此提示仍然需要對(duì)Serpin B9 在腫瘤中的作用及其機(jī)制開展更多的研究。

3.4 Serpin B9 與腫瘤轉(zhuǎn)移

Serpin B9 對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移而言是一把雙刃劍，其不僅促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，同時(shí)也保護(hù)正常的組織細(xì)胞而阻止腫瘤轉(zhuǎn)移。NK 細(xì)胞能夠附著于肝竇毛細(xì)血管內(nèi)皮上，肝臟中的NK 細(xì)胞和肝竇毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)Serpin B9 可以保護(hù)肝臟微環(huán)境免受高活性穿孔素/顆粒酶B 的破壞，維護(hù)肝臟微環(huán)境的穩(wěn)定，并殺死轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞[42]。然而，另一項(xiàng)對(duì)結(jié)直腸腫瘤肝轉(zhuǎn)移的研究則發(fā)現(xiàn)，下調(diào)腫瘤細(xì)胞中Serpin B9 的表達(dá)水平可以抑制結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移，提示Serpin B9 表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[43]。上述2 項(xiàng)研究著眼的角度不同，得到的結(jié)果也互相矛盾，由此表明Serpin B9 在腫瘤轉(zhuǎn)移中的機(jī)制復(fù)雜。雖然部分研究得出了不同的結(jié)果，但是大多數(shù)研究均顯示Serpin B9 在腫瘤中高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。一項(xiàng)對(duì)結(jié)直腸癌和研究結(jié)果顯示，顆粒酶B 的表達(dá)水平與對(duì)結(jié)直腸癌患者較好的預(yù)后有關(guān)，而Serpin B9 的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)[44]。有趣的是，在同種腫瘤細(xì)胞系中，Serpin B9 似乎還參與了不同部位的腫瘤轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移至肺臟的乳腺癌細(xì)胞中Serpin B9 的表達(dá)水平較轉(zhuǎn)移至其他部位的乳腺癌細(xì)胞明顯升高[45]?？傊琒erpin B9與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究正在不斷深入中。

3.5 Serpin B9 與腫瘤治療

化療耐藥、放療抵抗以及免疫逃逸是腫瘤治療失敗的主要原因。局部晚期直腸癌研究發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 的表達(dá)水平與術(shù)前新輔助化療的應(yīng)答效應(yīng)呈負(fù)相關(guān)[46]。此外有研究發(fā)現(xiàn)，相較于沒(méi)有微小殘留灶的患者，遺留微小殘留灶的兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患者的Serpin B9 表達(dá)水平明顯升高[47]。上述結(jié)果均提示，Serpin B9 高表達(dá)提示腫瘤耐藥，但也有少數(shù)研究發(fā)現(xiàn)了不同的結(jié)果。為了評(píng)估Serpin B9 的作用，有研究構(gòu)建了3 株Serpin B9 野生型穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa 細(xì)胞系和1 株表達(dá)無(wú)活性突變體Serpin B9 的細(xì)胞系，結(jié)果顯示野生型細(xì)胞株中Serpin B9 高表達(dá)能夠保護(hù)腫瘤細(xì)胞免于遭受NK 細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷，但其表達(dá)對(duì)依托泊苷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡沒(méi)有影響[48]?？傊琒erpin B9 參與腫瘤耐藥，并在一定程度上提示存在高耐藥性。

研究發(fā)現(xiàn)，放射劑量與Serpin B9 表達(dá)呈劑量依賴性負(fù)相關(guān)[49]，表明放療可能使Serpin B9對(duì)腫瘤的保護(hù)作用降低。這項(xiàng)研究指出，放療會(huì)削弱Serpin B9 的作用，但尚不清楚Serpin B9 高表達(dá)是否與腫瘤的放療抵抗相關(guān)。除此之外，也有證據(jù)顯示，腫瘤經(jīng)電離輻射后，Ⅰ型干擾素可以通過(guò)調(diào)節(jié)Serpin B9 而保護(hù)腫瘤細(xì)胞免于受到T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用[50]。這項(xiàng)研究的結(jié)論與前一項(xiàng)研究的結(jié)論不一致，因此目前對(duì)于放療與Serpin B9 之間的關(guān)系，仍需進(jìn)一步探索。

在免疫治療方面，目前已有研究證實(shí)Serpin可以引發(fā)腫瘤的免疫逃逸，導(dǎo)致免疫治療失效，尤其是基于顆粒酶B 的療法。食管癌和胃癌的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，Serpin B9 表達(dá)下調(diào)可使NK 細(xì)胞被殺傷，最終導(dǎo)致NK 細(xì)胞免疫治療失敗[51]。

4 Serpin B9 與腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs）

干細(xì)胞是指具有無(wú)限增殖、自我更新及多向分化能力的未分化細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞均能高表達(dá)Serpin B9，從而保護(hù)其不被細(xì)胞毒性T 細(xì)胞釋放的顆粒酶B所殺傷[52-53]，這一結(jié)果與之前的研究結(jié)果一致，即Serpin B9 能夠保護(hù)正常干細(xì)胞而避免其發(fā)生凋亡。然而，目前有關(guān)Serpin B9 能否維持正常干細(xì)胞干性的研究卻很少，因此Serpin B9 與CSCs 的相關(guān)研究或許能夠提供一些啟示。CSCs是腫瘤中具有極強(qiáng)的自我更新、多向分化和無(wú)限增殖能力的細(xì)胞，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥均密切相關(guān)[54-55]。研究發(fā)現(xiàn)，具有高水平干性標(biāo)記（Nanog、Oct3/4 和Sox2）和自我更新能力的乳腺癌干細(xì)胞表達(dá)較高水平的C-X-C基序趨化因子受體4（C-X-C motif chemokine receptor 4，CXCR4）和磷酸化p38。CXCR4 是趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1[又被稱為C-X-C基序趨化因子配體12（C-X-C motif chemokine ligand 12，CXCL12）] 的特異性受體，目前證實(shí)其能夠維持CSCs 的干性，并參與CSCs 的趨化[56]。激活CXCR4/ 磷酸化p38 軸能夠促進(jìn)Serpin B9 高表達(dá)，干擾機(jī)體的免疫監(jiān)視系統(tǒng)，保持乳腺癌干細(xì)胞的增殖和自我更新能力[57]。除干擾免疫系統(tǒng)以外，Serpin B9 還能夠通過(guò)其他機(jī)制維持CSCs 的干性。HJELMELAND 等[58]研究發(fā)現(xiàn)，在酸性腫瘤微環(huán)境中，腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的缺氧誘導(dǎo)因子2α（hypoxia inducible factor-2α，HIF-2α）的表達(dá)水平明顯上調(diào)，而Serpin B9作為HIF-2α 特異性靶基因，其在腦膠質(zhì)干細(xì)胞中除了能夠直接結(jié)合靶基因啟動(dòng)子以外，還可

5 總結(jié)與展望

Serpin B9 作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥、補(bǔ)體、凝血和免疫等多種病理生理過(guò)程的作用，參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，還能夠抑制顆粒酶B 的殺傷作用，從而保護(hù)腫瘤細(xì)胞。目前的研究已證實(shí)，Serpin B9 能夠減少腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤的免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移以及腫瘤細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致治療失敗。此外，臨床研究發(fā)現(xiàn)Serpin B9 能夠作為化療和免疫治療效果以及預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Serpin B9 可能成為腫瘤治療的一個(gè)潛在的新靶點(diǎn)，但仍需進(jìn)一步探索具體的機(jī)制。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，CSCs 是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥的主要負(fù)責(zé)細(xì)胞群。CSCs 的自我更新和無(wú)限增殖能力有助于腫瘤生長(zhǎng)和維持。近年來(lái)的研究指出，Serpin B9 能夠通過(guò)免疫逃逸保護(hù)CSCs 免于發(fā)生凋亡，并且參與維持CSCs 的干性，這是一項(xiàng)令人驚喜的發(fā)現(xiàn)。未來(lái)仍需要開展更多層面的研究，以深入闡明Serpin B9 在腫瘤和CSCs 中的作用及其可能的臨床應(yīng)用價(jià)值。