西藏野生青岡蕈菌絲分離培養(yǎng)條件研究

邵妍麗，任軍輝，張高翔

(西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 拉薩 850000)

青岡蕈 (Tricholmaquercicola) 是隸屬于擔(dān)子菌綱口蘑科口蘑屬的一種名貴野生食用菌，分布于西藏、云南、四川等省份[1]，因其具有松茸的香氣，價格不及松茸一半，廣受消費(fèi)者歡迎；另外其營養(yǎng)豐富，氨基酸總含量不但高于松茸，人體必需的二十種氨基酸除蛋氨酸未檢出外，絕大多也均高于松茸[2]，是難得的高原保健食品。自然條件下青岡蕈分布于較高海拔的高山櫟林下[3]，采摘不便、產(chǎn)量不穩(wěn)，不能滿足市場需求。因此我們進(jìn)行了野生青岡蕈菌絲培養(yǎng)條件研究，以期為人工栽培提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料采集 2019年8月-2019年9月、2020年7月-2020年9月，分兩批采自林芝周邊海拔3 000 m左右的櫟類樹下，采摘時選擇完整、無病蟲害、菌蓋直徑為3～5 cm的子實(shí)體(稍帶泥土)放入采集箱中帶回試驗(yàn)室[4-7]。

1.1.2 材料預(yù)處理 將子實(shí)體表面泥土洗凈，瀝干表面水水分后備用。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基篩選 采用4種培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲分離培養(yǎng)：

(1)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)(P1)

馬鈴薯浸提液200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[8]。

(2)馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(P2)

馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、KH2PO43.0 g、MgSO41.5 g、VB2 0.03 g、瓊脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[9-11]。

(3)木生菌培養(yǎng)基(P3)

麥芽浸膏15 g、蛋白胨10 g、瓊脂18 g，水1 000 mL，pH值自然[12-13]。

(4)松茸分離培養(yǎng)基(P4)

葡萄糖20 g、酵母浸膏2 .0 g、蛋白胨0.5 g、硫酸鎂0.5 g、磷酸二氫鉀0.5 g、瓊脂18 g、水1 000 mL、pH值自然[14-15]。

在無菌條件下，對子實(shí)體表面消毒，之后縱向掰開用鑷子從菌柄與菌蓋交界處挑取約2～3 mm的薄菌塊，迅速接入到斜面培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接10支試管斜面，放入人工氣候培養(yǎng)箱中，15 ℃恒溫暗培養(yǎng)，2次重復(fù)，觀察菌絲生長情況及污染情況。

1.2.2 培養(yǎng)溫度篩選 根據(jù)培養(yǎng)基篩選出的優(yōu)良培養(yǎng)基，采用上述方法分別接入菌塊，設(shè)置溫度梯度值5、10、15、20、25℃，進(jìn)行恒溫暗培養(yǎng)，2次重復(fù)，并觀察菌絲生長情況及污染情況。

1.2.3 培養(yǎng)基pH值篩選 根據(jù)培養(yǎng)基及溫度篩選出的優(yōu)良培養(yǎng)基及溫度，采用上述方法分別接入菌塊，分別設(shè)置pH值為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，進(jìn)行恒溫暗培養(yǎng)，2次重復(fù)，并觀察菌絲生長情況及污染情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基的篩選

從表1可看出，在菌絲出現(xiàn)時間、菌絲長滿試管時間方面，都是培養(yǎng)基P1、P3顯著少于培養(yǎng)基P2、P4(P<0.05)，培養(yǎng)基P1與P3之間、P2與 P4之間差異不顯著(P>0.05)。在菌絲萌發(fā)數(shù)量方面，培養(yǎng)基P1最大(8個)，P4最小(6個)，P2、P3居中且相同(7個)；菌絲未萌發(fā)大多是由于菌塊污染，小部分未污染也未萌發(fā)的菌塊也出現(xiàn)逐漸變黃枯蔫；萌發(fā)的菌塊開始時菌絲在其表面出現(xiàn)，呈白色，較短，逐漸伸長向試管上部延伸，逐漸長滿試管。在菌絲長勢、顏色和致密度方面， P3培養(yǎng)基菌絲長勢強(qiáng)，顏色白，致密；P1培養(yǎng)基菌絲雖長勢強(qiáng)，但顏色灰白，致密程度較稀疏；P2、P4培養(yǎng)基的菌絲長勢較弱，較稀疏，顏色灰白或白。在污染方面，P2培養(yǎng)基最多(4個)，其他3個培養(yǎng)基相同，都為3個。從實(shí)驗(yàn)觀測的6個指標(biāo)綜合來看，P3培養(yǎng)基即麥芽浸膏15 g、蛋白胨10 g、瓊脂18 g，水1 000 mL，pH值自然最適宜。

2.2 培養(yǎng)溫度的篩選

在菌絲出現(xiàn)時間方面(表2)，15 ℃培養(yǎng)溫度所需時間最短，顯著低于5、10、20、25 ℃(P<0.05)，后4者之間差異不顯著(P>0.05)，其中在5、10、25 ℃條件下菌絲萌發(fā)的試管個數(shù)較少，均為6個；在菌絲滿管時間方面，實(shí)驗(yàn)溫度條件下15 ℃最短，顯著低于其他4個溫度(5、10、20、25 ℃)(P<0.05)，其他4個溫度差異不顯著(P>0.05)；在菌絲生長過程中，15 ℃和20 ℃條件下生長勢強(qiáng)，其他條件下生長勢較弱；在菌絲顏色及致密程度方面，20 ℃條件下菌絲顏色潔白也較致密，而15 ℃條件下是白、較致密，其他溫度條件下菌絲顏色為白或灰白，菌絲稀疏或比較稀疏；污染情況，25 ℃條件下污染較多，達(dá)到了5個?？傮w從菌絲出現(xiàn)時間、菌絲滿管時間、菌絲長勢、菌絲顏色及致密程度、萌發(fā)及污染等指標(biāo)來看，15 ℃是青岡蕈菌絲培養(yǎng)的最佳溫度。

表1 不同培養(yǎng)基下的菌絲生長狀況

表2 不同培養(yǎng)溫度下的菌絲生長情況

2.3 培養(yǎng)基pH值的篩選

培養(yǎng)基的pH值與菌絲的生長密切相關(guān)，在實(shí)驗(yàn)的7個pH值梯度下，菌絲出現(xiàn)時間較短的是pH值為5.0、5.5、6.0(表3)，它們?nèi)咧g盡管差異不顯著(P>0.05)，但都顯著低于其他4個pH值(4.0、4.5、6.5、7.0)(P<0.05)，其他4個pH值之間差異不顯著；在菌絲萌發(fā)數(shù)方面，pH值4.5的最多(9個)，pH值4.0的最少(6個)，其他pH值的為7個或8個；在菌絲長滿管所需時間方面，pH值5.5所需時間最短，顯著低于pH值4.0、4.5、6.5、7.0(P<0.05)，但與pH值5.0、6.0的差異不顯著(P>0.05)；在菌絲長勢長相方面，pH值5.5條件下最強(qiáng)，顏色潔白、緊實(shí)致密，pH值5.0、6.0條件下菌絲長勢也較強(qiáng)，致密程度較高，菌絲顏色pH值6.0條件下為潔白，pH值5.0條件下顏色稍差，為白色，其他pH值(4.0、4.5、6.5、7.0)條件下，菌絲長勢都弱，有的顏色灰白，有的致密程度疏松；污染情況方面，pH值4.0污染管為1個，pH值4.5、5.5為2個，其余4個pH值的污染管均為3個，總體似乎呈現(xiàn)隨pH值升高，污染管數(shù)增加的趨勢。從觀測的6個指標(biāo)綜合來看，pH值5.5最適宜。

表3 不同pH值下的菌絲生長狀況

3 結(jié)論與討論

西藏野生青岡蕈室內(nèi)菌絲培養(yǎng)基(P3)、溫度、pH值等單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，適宜的條件分別為木生菌培養(yǎng)基、15 ℃、pH值5.5。以后隨著青岡蕈人工栽植世代的增加，伴之的適宜培養(yǎng)基、溫度、pH值等環(huán)境還需研究確定。