EPHA2抗體對(duì)結(jié)直腸癌西妥昔單抗耐藥的逆轉(zhuǎn)作用

[摘要] 目的 明確結(jié)直腸癌（CRC）病人西妥昔單抗治療前后EPHA2的表達(dá)水平，并探索EPHA2抗體能否逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥。

方法 收集8例KRAS野生型CRC病人在西妥昔單抗治療前及疾病進(jìn)展后的配對(duì)腫瘤組織標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測(cè)EPHA2的表達(dá)水平。使用西妥昔單抗處理其敏感細(xì)胞系、原發(fā)及繼發(fā)耐藥的CRC細(xì)胞系，以MTT方法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。使用EPHA2抗體DS-8895a、西妥昔單抗單藥或聯(lián)合處理原發(fā)及繼發(fā)耐藥的CRC細(xì)胞，檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力。

結(jié)果 在西妥昔單抗治療前及進(jìn)展后的腫瘤組織中，存在治療后EPHA2表達(dá)的上調(diào)（t=6.056，P<0.05）。在KRAS野生型CRC細(xì)胞系中，DS-8895a與西妥昔單抗有協(xié)同增敏作用;而在西妥昔單抗繼發(fā)耐藥CRC細(xì)胞系中，DS-8895a可逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥。

結(jié)論 EPHA2抗體與西妥昔單抗聯(lián)合可能具有逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗繼發(fā)耐藥作用，以及潛在的協(xié)同增敏作用。EPHA2有可能成為CRC治療策略的新突破。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)直腸腫瘤;受體，EphA2;西妥昔單抗;抗藥性，腫瘤

[中圖分類號(hào)] R735.34，R345.57

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2021）03-0416-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2021.57.125

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20210628.1638.006.html;2021-06-29 14：07：31

REVERSAL EFFECT OF EPHA2 ANTIBODY ON CETUXIMAB RESISTANCE IN COLORECTAL CANCER

WANG Qiwei， ZHANG Jingdong

（Medical Oncology Department of Gastrointestinal Cancer， Cancer Hospital of China Medical University， Shenyang 110042， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the expression level of EPHA2 before and after cetuximab treatment in patients with colorectal cancer （CRC）， and to explore whether the EPHA2 antibody can reverse the resistance to cetuximab in CRC cell lines.

Methods Paraffin specimens of tumor tissues from eight KRAS wild-type CRC patients before and after treatment with cetuximab were collected， and the expression of EPHA2 was determined" by immunohistochemistry. Cetuximab-sensitive， primary-resistant， and acquired-resistant CRC cell lines were treated with cetuximab， and the cell proliferation was measured by MTT method. The primary-resistant and acquired-resistant CRC cells were treated with EPHA2 antibody DS-8895a and cetuximab， alone or in combination， and the cell proliferation was assessed.

Results In the tumor tissues before and after cetuximab treatment， the expression of EPHA2 was up-regulated after treatment （t=6.056，Plt;0.05）. In KRAS wild-type CRC cell line， DS-8895a and cetuximab had synergistic sensitization， while in CRC cell line with acquired resistance to cetuximab， DS-8895a reversed the resis-

tance to cetuximab.

Conclusion The combination of EPHA2 antibody and cetuximab may reverse the acquired resistance to cetuximab and have potential synergistic sensitization effects. EPHA2 may become a new target for the treatment of CRC.

[KEY WORDS]colorectal neoplasms; receptor， EphA2;" cetuximab;" drug resistance， neoplasm

結(jié)直腸癌的發(fā)病率居我國(guó)惡性腫瘤的第2位，死亡率居第5位[1]。以西妥昔單抗為代表的抗細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（EGFR）單抗，被廣泛用于KRAS基因野生型轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌（mCRC）病人的轉(zhuǎn)化[2-5]及姑息治療中[6-7]。然而，西妥昔單抗與化療聯(lián)合的客觀有效率僅為55%～65%，中位無進(jìn)展生存期為10～11月，這意味著有近半數(shù)的病人未能獲益，并且有效的病人多在1年內(nèi)出現(xiàn)進(jìn)展[6，8]。因此，探討西妥昔單抗的原發(fā)及繼發(fā)耐藥機(jī)制并嘗試進(jìn)行逆轉(zhuǎn)具有重要的基礎(chǔ)及臨床意義。除了研究較充分的耐藥機(jī)制，如KRAS、NRAS、BRAF、PI3K等基因突變導(dǎo)致下游通路的持續(xù)激活[9]，近年來的研究顯示，結(jié)直腸癌中EPHA2的過表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和更差的預(yù)后相關(guān)，且可能與西妥昔單抗的療效相關(guān)[10-14]。EPHA2是促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生肝細(xì)胞受體（EPH）家族的成員之一，目前關(guān)于EPHA2靶向治療能否逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥尚無深入研究。本研究旨在明確CRC病人西妥昔單抗治療前后EPHA2的表達(dá)水平，并在原發(fā)及繼發(fā)CRC耐藥細(xì)胞系中探索EPHA2抗體能否逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 抗體與試劑 BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒（由美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司提供）;β-actin抗體、EPHA2抗體、pEPHA2抗體（美國(guó)Sigma公司）;RPMI 1640培養(yǎng)基（美國(guó)Hyclon公司）;胎牛血清（BI公司）;胰蛋白酶（杭州四季青生物工程材料有限公司）;MTT試劑（美國(guó)Sigma公司）;山羊抗兔二抗（美國(guó)Abcam公司），DS-8895a（日本Daiichi Sankyo公司）。

1.1.2 細(xì)胞系 人結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT116購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，人結(jié)直腸癌細(xì)胞系HKH-2由日本國(guó)際醫(yī)學(xué)中心研究所的SHIRASAWA博士轉(zhuǎn)贈(zèng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 使用含體積分?jǐn)?shù)0.10胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基分別對(duì)HKH-2和HCT116細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，每2～3 d傳代1次，于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)時(shí)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。

1.2.2 細(xì)胞活性檢測(cè) 細(xì)胞用不同藥物處理72 h后，用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活性。酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞在450 nm波長(zhǎng)處的吸光度值，根據(jù)吸光度值計(jì)算不同藥物濃度對(duì)應(yīng)的細(xì)胞活性，繪制細(xì)胞增殖曲線。

1.2.3 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá) 細(xì)胞用不同藥物處理24 h后，收取細(xì)胞，加入胰蛋白酶和磷酸酶抑制劑，加入CytoBuster蛋白提取試劑提取總蛋白后，用BCA法測(cè)定蛋白濃度。取等量蛋白樣品于含體積分?jǐn)?shù)0.10的SDS-PAGE中電泳后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，加入一抗4 ℃搖床上過夜，加入二抗室溫孵育1 h，ECL法顯色。在凝膠成像系統(tǒng)中成像拍照，以β-actin標(biāo)定。

1.2.4 免疫組化檢測(cè) 選取2017年7月—2017年12月在遼寧省腫瘤醫(yī)院行轉(zhuǎn)化治療（西妥昔單抗聯(lián)合化療）后出現(xiàn)疾病進(jìn)展的8例結(jié)直腸癌病人，年齡43～65歲，8例病人在轉(zhuǎn)化治療前經(jīng)腸鏡活檢病理確診為結(jié)直腸腺癌，在疾病進(jìn)展后均接受姑息性手術(shù)治療，術(shù)后病理均診斷為結(jié)直腸腺癌。本研究選取該8例病人在轉(zhuǎn)化治療前的腸鏡活檢標(biāo)本蠟塊，以及轉(zhuǎn)化治療后的結(jié)直腸癌原發(fā)灶手術(shù)標(biāo)本蠟塊，標(biāo)本的組織蠟塊均保存于我院病理科。使用切片機(jī)對(duì)石蠟包埋的腫瘤組織進(jìn)行切片，厚度4～5 μm，置于60 ℃恒溫干燥箱中烘烤4 h。切片脫蠟水化，之后于體積分?jǐn)?shù)0.03 H2O2中室溫?fù)u床孵育10 min，PBS清洗3次。將其放入含有EDTA抗原修復(fù)液的鍋中，煮沸、冷卻并清洗。使用50 g/L的BSA抗原封閉1 h，滴加一抗后于濕盒中4 ℃孵育過夜。復(fù)溫后二抗孵育1 h，以DAB顯色、蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化、梯度脫水及封片，風(fēng)干后保存。免疫組化結(jié)果判定由病理科醫(yī)生按照如下標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立進(jìn)行。染色強(qiáng)度被分為4級(jí)：未著色評(píng)分為0，著色較弱評(píng)分為1分，染色中等和高強(qiáng)度分別評(píng)分為2分和3分。染色強(qiáng)度乘以染色細(xì)胞的百分比（1%～100%）獲得H-score，H-score范圍為0～300。見圖1A。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s表示，兩組均數(shù)間比較使用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間比較使用雙因素方差分析。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)" 果

2.1 結(jié)直腸癌組織中西妥昔單抗耐藥后EPHA2表達(dá)上調(diào)

本研究收集了8例KRAS野生型結(jié)直腸癌病人在西妥昔單抗治療前及疾病進(jìn)展后的配對(duì)的腫瘤組織石蠟標(biāo)本，使用免疫組化方法檢測(cè)了EPHA2的表達(dá)水平，以免疫組化評(píng)分表示EPHA2表達(dá)水平。見圖1A。結(jié)果顯示，在西妥昔單抗耐藥后的結(jié)直腸癌組織中，存在EPHA2表達(dá)的明顯上調(diào)（t=6.056，P<0.05），EPHA2上調(diào)可能與西妥昔單抗的繼發(fā)耐藥相關(guān)。見圖1B、C。

2.2 西妥昔單抗對(duì)3種不同CRC細(xì)胞的增殖活力和EPHA2及pEPHA2表達(dá)影響

本研究前期選用KRAS野生型（KRAS-WT）的西妥昔單抗敏感CRC細(xì)胞系HKH-2，給予遞增濃度的西妥昔單抗處理并多次傳代5個(gè)月后，已成功構(gòu)建對(duì)西妥昔單抗耐藥的CRC細(xì)胞系HKH-2/CR，以及KRAS突變型（KRAS-MT）的CRC細(xì)胞系HCT116。分別使用遞增濃度的西妥昔單抗處理HKH-2細(xì)胞、HKH-2/CR細(xì)胞和HCT116細(xì)胞，采用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力，使用GraphPad Prism繪制細(xì)胞增殖曲線。結(jié)果表明，藥物濃度和不同細(xì)胞系有交互作用（F藥物=407.50，P<0.05;F細(xì)胞系=4 981.00，P<0.05;F藥物×細(xì)胞系=67.57，P<0.05）。加入西妥昔單抗處理細(xì)胞后，HKH-2/CR細(xì)胞和HCT116細(xì)胞存在明顯耐藥性;而HKH-2細(xì)胞則對(duì)西妥昔單抗的處理相對(duì)敏感，加入西妥昔單抗后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制。見圖2A。在HKH-2細(xì)胞中，使用Western blot法分別檢測(cè)細(xì)胞在西妥昔單抗（10 nmol/L）處理前及其處理后1、12、24 h的EPHA2和pEPHA2表達(dá)水平，結(jié)果顯示，西妥昔單抗給藥后EPHA2及pEPHA2表達(dá)水平均明顯上調(diào)。見圖2B。

2.3 EPHA2抗體或（和）西妥昔單抗對(duì)HKH-2細(xì)胞增殖活力影響

在KRAS-WT的西妥昔單抗敏感CRC細(xì)胞系HKH-2中，分別用不同濃度的EPHA2抗體DS-8895a、西妥昔單抗、DS-8895a聯(lián)合西妥昔單抗處理細(xì)胞，其中聯(lián)合用藥組中DS-8895a的濃度固定為10 nmol/L，采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示，藥物濃度以及不同細(xì)胞系有交互作用（F藥物=1 936.00，P<0.05;F細(xì)胞系=4 137.00，P<0.05;F藥物×細(xì)胞系=228.70，P<0.05）。DS-8895a與西妥昔單抗具有明顯的協(xié)同作用。見圖3。

2.4 EPHA2抗體或（和）西妥昔單抗對(duì)HKH-2/CR細(xì)胞繼發(fā)耐藥影響

在西妥昔單抗繼發(fā)耐藥的CRC細(xì)胞系HKH-2/CR中，分別使用不同濃度的EPHA2抗體DS-8895a、西妥昔單抗、DS-8895a聯(lián)合西妥昔單抗處理細(xì)胞，其中聯(lián)合用藥組中DS-8895a的濃度固定為10 nmol/L，采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果顯示，藥物濃度和不同細(xì)胞系存在交互作用（F藥物=600.70，P<0.05;F細(xì)胞系=8 031.00，P<0.05;F藥物×細(xì)胞系=91.13，P<0.05）。在對(duì)西妥昔單抗繼發(fā)耐藥的CRC細(xì)胞HKH-2/CR中，EPHA2抗體DS-8895可能有逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗繼發(fā)耐藥的作用。見圖4。

3 討" 論

EPH家族是人類基因組中最大的酪氨酸激酶受體家族，而EPHA2是EPH家族中的一個(gè)重要成員，其在多種上皮來源的組織和細(xì)胞系中廣泛表達(dá)[11]。EPHA2在正常細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移和治療耐藥中的作用已在多種腫瘤中得到廣泛研究，特別是在乳癌[15]、胰腺癌[16，17]、非小細(xì)胞肺癌[18]、黑色素瘤[19]和頭頸部鱗癌[20]等腫瘤中。在非小細(xì)胞肺癌中，EPHA2的過表達(dá)與EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）的治療耐藥相關(guān)，抗EPHA2治療可逆轉(zhuǎn)EGFR-TKI耐藥[11]。在頭頸部鱗癌中EPHA2的過表達(dá)與西妥昔單抗的療效相關(guān)[19]。既往我們對(duì)于EPHA2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義并不十分了解，但近年來研究結(jié)果顯示，EPHA2可能是促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)基因，結(jié)直腸癌中EPHA2表達(dá)與西妥昔單抗的療效呈負(fù)相關(guān)[10-11]，為西妥昔單抗提供了潛在的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物。然而，關(guān)于EPHA2靶向治療能否逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥尚無深入研究。

本研究在西妥昔單抗治療前及疾病進(jìn)展后配對(duì)的腫瘤組織中，觀察到繼發(fā)耐藥后存在EPHA2的表達(dá)上調(diào)。而既往研究多為檢測(cè)治療前EPHA2表達(dá)水平對(duì)西妥昔單抗療效影響[13，21]，即原發(fā)耐藥與EPHA2的關(guān)系，罕見報(bào)道EPHA2水平與西妥昔單抗繼發(fā)耐藥的關(guān)系。此外，本研究首次報(bào)道了新型EPHA2抗體DS-8895a與西妥昔單抗有協(xié)同增敏作用，而且在繼發(fā)耐藥細(xì)胞系中可逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的耐藥，結(jié)果與MARTINI等[21]報(bào)道的EPHA2抗體ALW-II-41-27可逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗的結(jié)論一致。因此，我們認(rèn)為EPHA2靶點(diǎn)可能成為結(jié)直腸癌中逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗耐藥的一個(gè)新方向。目前，EPHA2已逐漸成為多種腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)[22]，EPHA2抗體DS-8895a在實(shí)體瘤的Ⅰ期臨床研究中表現(xiàn)出了良好的安全性[23]，我們期待未來在結(jié)直腸癌病人中驗(yàn)證DS-8895a對(duì)西妥昔單抗的逆轉(zhuǎn)耐藥及增敏作用。然而，本研究尚未對(duì)EPHA2抗體逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗耐藥的機(jī)制做進(jìn)一步的探討。有研究表明，EPHA2受體及配體Ephrin-A1，可形成一個(gè)重要的細(xì)胞通訊系統(tǒng)[24]，EPHA2可通過調(diào)節(jié)配體依賴性和非配體依賴性信號(hào)傳導(dǎo)來抑制和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[20]。在無配體情況下，非配體依賴性的EPHA2通路在RAS/ERK/RSK下游信號(hào)通路中起關(guān)鍵作用[10]。EPHA2抗體逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌西妥昔單抗耐藥的作用機(jī)制仍有待深入探討。

綜上所述，EPHA2抗體與西妥昔單抗聯(lián)合應(yīng)用可能有逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗繼發(fā)耐藥的作用，以及潛在的協(xié)同增敏作用。本研究為結(jié)直腸癌治療中逆轉(zhuǎn)西妥昔單抗耐藥提供了新的理論依據(jù)，EPHA2有可能成為結(jié)直腸癌治療策略的新突破。

[參考文獻(xiàn)]

[1]BRAY F， FERLAY J， SOERJOMATARAM I， et al. Global cancer statistics 2018： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA： a Cancer Journal for Clinicians， 2018，68（6）：394-424.

[2]MODEST D P， HEINEMANN V， FOLPRECHT G， et al. Factors that influence conversion to resectability and survival after resection of metastases in RAS WT metastatic colorectal cancer （mCRC）： analysis of FIRE-3- AIOKRK0306[J]. Annals of Surgical Oncology， 2020，27（7）：2389-2401.

[3]KURRECK A， GEISSLER M， MARTENS U M， et al. Dynamics in treatment response and disease progression of metastatic colorectal cancer （mCRC） patients with focus on BRAF status and primary tumor location： analysis of untreated RAS-wild-type mCRC patients receiving FOLFOXIRI either with or without panitumumab in the VOLFI trial （AIO KRK0109）[J]. Journal of Cancer Research and Clinical Oncology， 2020，146（10）：2681-2691.

[4]HU H B， WANG K， HUANG M J， et al. Modified FOLFO-XIRI with or without cetuximab as conversion therapy inpatients with RAS/BRAF wild-type unresectable liver meta-stases colorectal cancer： the FOCULM multicenter phase Ⅱ trial[J]. The Oncologist， 2021，26（1）：e90-e98.

[5]CIARDIELLO F， NORMANNO N， MARTINELLI E， et al. Cetuximab continuation after first progression in metastatic colorectal cancer （CAPRI-GOIM）： a randomized phase Ⅱ trial of FOLFOX plus cetuximab versus FOLFOX[J]. Annals of Oncology： Official Journal of the European Society for Medical Oncology， 2016，27（6）：1055-1061.

[6]STINTZING S， MODEST D P， ROSSIUS L， et al. FOLFIRI plus cetuximab versus FOLFIRI plus bevacizumab for metastatic colorectal cancer （FIRE-3）： a post-hoc analysis of tumour dynamics in the final RAS wild-type subgroup of this randomised open-label phase 3 trial[J]. The Lancet Oncology， 2016，17（10）：1426-1434.

[7]VENOOK A P， NIEDZWIECKI D， LENZ H J， et al. Effect of first-line chemotherapy combined with cetuximab or bevacizumab on overall survival in patients with KRAS wild-type advanced or metastatic colorectal cancer： a randomized clinical trial[J]. JAMA， 2017，317（23）：2392-2401.

[8]MARTINELLI E， CIARDIELLO D， MARTINI G， et al. Implementing anti-epidermal growth factor receptor （EGFR） therapy in metastatic colorectal cancer： challenges and future perspectives[J]. Annals of Oncology： Official Journal of the European Society for Medical Oncology， 2020，31（1）：30-40.

[9]SEPULVEDA A R， HAMILTON S R， ALLEGRA C J， et al. Molecular biomarkers for the evaluation of colorectal cancer： guideline from the American society for clinical pathology， college of American pathologists， association for molecular pathology， and American society of clinical oncology[J]. Archives of Pathology amp; Laboratory Medicine， 2017，141（5）：625-657.

[10]DUNNE P D， DASGUPTA S， BLAYNEY J K， et al. EphA2 expression is a key driver of migration and invasion and a poor prognostic marker in colorectal cancer[J]. Clinical Cancer Research： an Official Journal of the American Association for Cancer Research， 2016，22（1）：230-242.

[11]STRIMPAKOS A， PENTHEROUDAKIS G， KOTOULA V， et al. The prognostic role of ephrin A2 and endothelial growth factor receptor pathway mediators in patients with advanced colorectal cancer treated with cetuximab[J]. Clinical Colorectal Cancer， 2013，12（4）：267-274.e2.

[12]DE ROBERTIS M， LOIACONO L， FUSILLI C， et al. Dysregulation of EGFR pathway in EphA2 cell subpopulation significantly associates with poor prognosis in colorectal cancer[J]. Clinical Cancer Research： an Official Journal of the American Association for Cancer Research， 2017，23（1）：159-170.

[13]DE ROBERTIS M， MAZZA T， FUSILLI C， et al. EphB2 stem-related and EphA2 progression-related miRNA-based networks in progressive stages of CRC evolution： clinical significance and potential miRNA drivers[J]. Molecular Cancer， 2018，17（1）：169.

[14]CUY S E， QUERALT B， MARTIN-CASTILLO B， et al. EphA2 receptor activation with ephrin-A1 ligand restores cetu-ximab efficacy in NRAS-mutant colorectal cancer cells[J]. Oncology Reports， 2017，38（1）：263-270.

[15]TORRES-ADORNO A M， VITRAC H， QI Y， et al. Eicosa-

pentaenoic acid in combination with EPHA2 inhibition shows efficacy in preclinical models of triple-negative breast cancer by disrupting cellular cholesterol efflux[J]. Oncogene， 2019，38（12）：2135-2150.

[16]MARKOSYAN N， LI J， SUN Y H， et al. Tumor cell-intrinsic EPHA2 suppresses anti-tumor immunity by regulating PTGS2 （COX-2） [J]. Journal of Clinical Investigation， 2019，130：3594-3609.

[17]RODRIGUES M， RICHARDS N， NING B， et al. Rapid lipid-based approach for normalization of quantum-dot-detected biomarker expression on extracellular vesicles in complex biological samples[J]. Nano Letters， 2019，19（11）：7623-7631.

[18]TAN Y H Carol， SRIVASTAVA S， WON B M， et al. EPHA2 mutations with oncogenic characteristics in squamous cell lung cancer and malignant pleural mesothelioma[J]. Oncogenesis， 2019，8：49.

[19]SAKAMOTO A， KATO K， HASEGAWA T， et al. An agonistic antibody to EPHA2 exhibits antitumor effects on human melanoma cells[J]. Anticancer Research， 2018，38（6）：3273-3282.

[20]IEGUCHI K， MARU Y. Roles of EphA1/A2 and ephrin-A1 in cancer[J]. Cancer Science， 2019，110（3）：841-848.

[21]MARTINI G， CARDONE C， VITIELLO P P， et al. EPHA2 is a predictive biomarker of resistance and a potential therapeutic target for improving antiepidermal growth factor receptor therapy in colorectal cancer[J]. Molecular Cancer Therapeutics， 2019，18（4）：845-855.

[22]HUANG C H， YUAN W J， LAI C， et al. EphA2-to-YAP pathway drives gastric cancer growth and therapy resistance[J]. International Journal of Cancer， 2020，146（7）：1937-1949.

[23]SHITARA K， SATOH T， IWASA S， et al. Safety， tolerabi-

lity， pharmacokinetics， and pharmacodynamics of the afucosylated， humanized anti-EPHA2 antibody DS-8895a： a first-in-human phase Ⅰ dose escalation and dose expansion study in patients with advanced solid tumors[J]. Journal for Immunotherapy of Cancer， 2019，7（1）：219.

[24]LI J Y， XIAO T， YI H M， et al. S897 phosphorylation of EphA2 is indispensable for EphA2-dependent nasopharyngeal carcinoma cell invasion， metastasis and stem properties[J]. Cancer Letters， 2019，444：162-174.

（本文編輯 于國(guó)藝）