PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性與山東漢族人群子癇前期遺傳易感性關(guān)系

[摘要] 目的

探討磷脂酶Cδ3（PLCD3）基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性與山東漢族人群子癇前期遺傳易感性關(guān)系。

方法 用Taqman探針熒光定量PCR技術(shù)，對842例子癇前期病人以及1 013例正常妊娠婦女的PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測，比較兩組基因型分布和等位基因頻率的差異。

結(jié)果 子癇前期組與對照組PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性（Pgt;0.05）。輕度及重度子癇前期組、早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組分別與對照組相比，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。輕度子癇前期與重度子癇前期相比、早發(fā)型子癇前期與晚發(fā)型子癇前期相比，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型和等位基因頻率差異均無顯著性（Pgt;0.05）。

結(jié)論 PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性可能與山東漢族人群子癇前期發(fā)病不相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 先兆子癇;磷脂酶Cδ;多態(tài)性，單核苷酸;疾病遺傳易感性

[中圖分類號] R714.24;R363.25

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號] 2096-5532（2021）03-0407-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2021.57.042

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20200903.0933.007.html;2020-09-03 15：56：50

ASSOCIATION OF PLCD3 GENE RS12946454 POLYMORPHISM WITH THE GENETIC SUSCEPTIBILITY TO PREECLAMPSIA IN THE CHINESE HAN POPULATION IN SHANDONG PROVINCE， CHINA

WANG Ling， TANG Qian， ZHANG Lu， LIU Shiguo， ZHANG Xiaoxiao， LIU Xuemei

（Department of Nephrology， The Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266003， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the association of PLCD3 gene rs12946454 polymorphism with the genetic susceptibility to preeclampsia in the Chinese Han population in Shandong province， China.

Methods TaqMan probe real-time PCR was used to determine the genotype of PLCD3 gene rs12946454 in 842 patients with preeclampsia and 1 013 normal pregnant women， and genotype distribution and allele frequencies were compared between the two groups.

Results There were no significant differences in genotype distribution and allele frequencies of PLCD3 gene rs12946454 between the preeclampsia group and the control group （Pgt;0.05）. There were no significant differences in genotype distribution and alleles of PLCD3 gene rs12946454 between the mild/severe/early-onset/late-onset preeclampsia groups and the control group （Pgt;0.05）. There were no significant differences in genotype distribution and allele frequencies of PLCD3 gene rs12946454 between the mild preeclampsia group and the severe preeclampsia group， as well as between the early-onset preeclampsia group and the late-onset preeclampsia group （Pgt;0.05）.

Conclusion The polymorphism of PLCD3 gene rs12946454 may not be associated with the onset of preeclampsia in the Chinese Han population in Shandong province.

[KEY WORDS]pre-eclampsia; phospholipase C delta; polymorphism， single nucleotide; genetic predisposition to disease

子癇前期是一種常見的妊娠期疾病，是造成孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一，與圍產(chǎn)兒死亡率增加顯著相關(guān)[1]。子癇前期表現(xiàn)為妊娠20周后新出現(xiàn)高血壓和蛋白尿，但在母體癥狀出現(xiàn)之前便可出現(xiàn)全身內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙[2]。目前子癇前期發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，研究認(rèn)為子癇前期發(fā)病與血管生成和抗血管生成失衡、免疫反應(yīng)、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和遺傳因素等密切相關(guān)[3-7]。研究發(fā)現(xiàn)，來自母體和胎兒的多種遺傳因素在子癇前期發(fā)病中起著重要作用[8]。關(guān)于子癇前期家族史的一項調(diào)查研究表明，除了種族、區(qū)域和社會經(jīng)濟(jì)因素以外，遺傳因素導(dǎo)致了50%以上子癇前期的發(fā)生[9]。對歐洲血統(tǒng)人群進(jìn)行的一項全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）發(fā)現(xiàn)，磷脂酶Cδ3（PLCD3）基因rs12946454位點(diǎn)與血壓增高有關(guān)[10]。但目前尚未有研究證實(shí)rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性是否與妊娠期婦女高血壓疾病有聯(lián)系。本研究旨在探討PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與山東漢族人群子癇前期易感性的關(guān)系，為子癇前期的診斷和篩查提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年3月—2019年6月期間，選取就診于青島大學(xué)附屬醫(yī)院、棗莊市婦幼保健院、聊城人民醫(yī)院、臨沂市人民醫(yī)院等子癇前期孕婦（子癇前期組）842例和年齡相匹配的足月分娩的正常妊娠婦女1 013例（對照組）作為研究對象。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會妊娠期高血壓疾病學(xué)組頒布的《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》[11]制定子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)疾病嚴(yán)重程度將子癇前期病人分為輕度子癇前期組與重度子癇前期組，根據(jù)發(fā)病時間分為早發(fā)型子癇前期（妊娠34周之前發(fā)?。┙M與晚發(fā)型子癇前期（妊娠34周之后發(fā)?。┙M。子癇前期組納入標(biāo)準(zhǔn)為：①妊娠20周以后出現(xiàn)血壓≥18.7/12.0 kPa;②24 h尿蛋白≥300 mg或尿蛋白/肌酐比值≥0.3或隨機(jī)尿蛋白gt;1+;③未發(fā)現(xiàn)蛋白尿但有其他器官或系統(tǒng)受累;④既往無原發(fā)性高血壓、腎功能異常、糖尿病和妊娠早期體質(zhì)量超標(biāo)（BMIgt;25 kg/m2）等病史。對照組孕婦無子癇前期病史，無自身免疫性疾病，無妊娠期并發(fā)癥等病史。兩組孕婦均為漢族。采集兩組孕婦年齡、家族史、生育史、胎齡等人口統(tǒng)計學(xué)資料信息及相關(guān)臨床檢查結(jié)果。本研究得到了青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，并獲得研究對象知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 基因組DNA提取 使用含EDTA的真空采血管采集受試者外周靜脈血5 mL，置于-20 ℃冰箱保存。使用基因組DNA提取試劑盒（北京天根）提取基因組DNA。

1.2.2 PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)的基因分型

采用實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)對PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測。rs12946454位點(diǎn)上游引物序列為：5′-CACTCTCCACACTCA-CTCCTGCCCA-3′;下游引物序列為：5′-GCCCTT-TCTGGGGCTCCTGATGCCC-3′。所使用的Taqman探針由美國ABI公司設(shè)計合成。qPCR反應(yīng)體系25.00 μL，內(nèi)含： 20×SNP探針1.25 μL，2×PCR Master Mix 12.50 μL，模板DNA和去離子水共11.25 μL。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃變性30 s，1個循環(huán);95 ℃、10 s，60 ℃、30 s延伸40個循環(huán);95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，95 ℃、15 s，1個循環(huán)。使用Bio-Rad CFX manager 3.0軟件分析基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。符合正態(tài)分布的計量資料結(jié)果以±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗;應(yīng)用卡方檢驗評估基因型頻率與Hardy-Weinberg平衡的一致性，皮爾森卡方檢驗和Cochran-Armitage 趨勢檢驗比較各組基因型分布和等位基因頻率的差異。Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)" 果

2.1 兩組一般資料比較

子癇前期組與對照組孕婦年齡、孕次及流產(chǎn)次數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。子癇前期組病人入院孕周、分娩孕周及新生兒體質(zhì)量均小于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-36.582～-26.956，P<0.01）。見表1。

與對照組比較，*t=-36.582～-26.956，P<0.01。

2.2 兩組PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布與等位基因頻率比較

子癇前期組及對照組PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（Pgt;0.05）。子癇前期組與對照組基因型分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.066，Pgt;0.05），兩組等位基因頻率差異亦無顯著意義（χ2=2.066，P=0.558，OR=0.954，95%CI=0.814～1.118）。見表2。

2.3 輕度子癇前期與重度子癇前期病人PLCD3基因 rs12946454位點(diǎn)基因型和等位基因頻率變化與對照組相比，輕度子癇前期及重度子癇前期病人PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布差異均無顯著性（χ2=0.164、0.269，Pgt;0.05），等位基因頻率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（輕度vs.對照：χ2=0.168，P=0.682，OR=0.934，95%CI=0.675～1.294;重度vs.對照：χ2=0.270，P=0.603，OR=0.957，95%CI=0.811～1.130）。輕度子癇前期和重度子癇前期病人相比，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性（基因型：χ2=0.021，P=0.884;等位基因：χ2=0.020，P=0.887，OR=0.976，95%CI=0.700～1.361）。見表2。

2.4 早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期病人PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率比較早發(fā)型子癇前期組、晚發(fā)型子癇前期組與對照組相比，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.690、0.001，Pgt;0.05），等位基因頻率差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義（早發(fā)組vs.對照組：χ2=0.693，P=0.405，OR=0.924，95%CI=0.768～1.113;晚發(fā)vs.對照：χ2=0.000，P=0.983，OR=0.998，95%CI=0.807～1.234）。早發(fā)型子癇前期與晚發(fā)型子癇前期組PLCD3基因12946454位點(diǎn)基因型和等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（基因型：χ2=0.416，P=0.519;等位基因：χ2=0.398，P=0.528，OR=0.926，95%CI=0.730～1.175）。見表2。

3 討" 論

研究表明，子癇前期發(fā)病涉及多種過程，包括異常的滋養(yǎng)層浸潤、血管痙攣、血小板活化、血管運(yùn)動調(diào)節(jié)因子失衡和胎盤缺血等[12]。雖然目前其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但子癇前期只發(fā)生在妊娠期間或胎盤（滋養(yǎng)層）腫瘤存在的情況下，因而子癇前期是由胎盤因素觸發(fā)的[13]。在正常妊娠中，滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)入母體子宮螺旋動脈，深入到螺旋動脈甚至肌層水平，使得母體螺旋小動脈廣泛重塑為高容量、高流量的血管，為胎兒提供營養(yǎng)[14]。在子癇前期胎盤中，滋養(yǎng)層細(xì)胞無法從增生的上皮細(xì)胞亞型轉(zhuǎn)變?yōu)榍忠u性內(nèi)皮細(xì)胞亞型，造成子宮螺旋動脈的不完全重塑，導(dǎo)致母體血管狹窄，胎盤相對缺血[15-16]。病變胎盤促進(jìn)母體循環(huán)中可溶性有毒因子的釋放，從而導(dǎo)致炎癥、內(nèi)皮功能障礙和母體系統(tǒng)疾病[17]。研究顯示，包括轉(zhuǎn)錄因子、生長因子及受體和其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子在內(nèi)的多種基因參與胎盤發(fā)育[18]。

PLCD3基因位于第17號染色體的17q21.31，包含有16個外顯子，其中的rs12946454位點(diǎn)位于PLCD3基因的內(nèi)含子中[10]。研究表明，PLCD3參與促進(jìn)神經(jīng)元遷移和軸突突起延長[19]，還在血管平滑肌信號傳導(dǎo)中起重要作用，可以被血管活性肽AngⅡ和內(nèi)皮素激活[20]。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)，同時敲除小鼠PLCD1基因和PLCD3基因可以造成小鼠滋養(yǎng)層缺陷而致妊娠中期胚胎死亡;PLCD1/PLCD3雙基因敲除小鼠胎盤迷路層結(jié)構(gòu)異常，胎盤血管減少[21]。因此，PLCD1和PLCD3基因在胎盤的正常發(fā)育中起著重要作用，PLCD3基因表達(dá)異常可能會造成胎盤發(fā)育不良，引發(fā)妊娠期疾病。

一項關(guān)于歐洲人群的GWAS研究結(jié)果顯示，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)與高血壓有關(guān)[10]，但該研究僅局限于歐洲人群及原發(fā)性高血壓疾病，目前尚未有相關(guān)研究證實(shí)PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)遺傳多態(tài)性是否與妊娠期女性尤其是我國漢族婦女血壓升高有關(guān)。本研究對842例子癇前期孕婦和1 013例正常妊娠婦女進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，與正常妊娠婦女相比較，子癇前期孕婦PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性，表明PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性可能與子癇前期發(fā)病不相關(guān)。進(jìn)一步將子癇前期組分為輕度及重度子癇前期、早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，與正常對照組相比，輕度子癇前期及重度子癇前期PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性;早發(fā)型子癇前期及晚發(fā)型子癇前期基因型分布和等位基因頻率差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義;輕度子癇前期和重度子癇前期相比、早發(fā)型子癇前期和晚發(fā)型子癇前期相比，PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性。提示PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)遺傳多態(tài)性可能與山東漢族人群子癇前期發(fā)病不相關(guān)。

本次研究首次在山東漢族人群中檢測PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性與子癇前期發(fā)病的關(guān)系，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)PLCD3基因rs12946454位點(diǎn)多態(tài)性與山東漢族人群子癇前期發(fā)病不相關(guān)，與歐洲人群的GWAS結(jié)果不一致[10]。其原因可能與種族、地區(qū)及研究人群差異等因素有關(guān)，也可能與妊娠期高血壓疾病自身特性有關(guān)系。還需要對不同地區(qū)、不同種族人群進(jìn)行更大樣本的相關(guān)遺傳研究，以闡明子癇前期與PLCD3基因多態(tài)性之間的關(guān)系。此外，目前尚缺乏PLCD3基因在高血壓相關(guān)疾病尤其是子癇前期中作用的研究報道，因此，深入研究PLCD3基因與子癇前期的關(guān)系，有利于完善子癇前期的發(fā)病機(jī)制，為子癇前期的治療和篩查提供理論依據(jù)。

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（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）