組織CXCL13和Dyrk1b表達預測卵巢癌預后的臨床意義

朱怡

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，其死亡率占女性惡性腫瘤之首，并且在我國近年來的發(fā)病率呈上升趨勢，嚴重威脅和影響女性的身體健康和生命安全[1]。卵巢癌的發(fā)病無典型的臨床特征和體征，發(fā)現(xiàn)時往往已經(jīng)屬于晚期。CXCL13在結直腸癌、胃癌、乳腺癌和宮頸癌等多種腫瘤浸潤，血管形成和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有明顯的相關性[2-4]。雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶1b(Dyrk1b)在乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和胃癌等腫瘤呈高表達，而在正常組織呈表達或者不表達，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。本研究通過免疫組織化學的方法對卵巢癌組織進行檢測，觀察其表達與臨床病理因素和預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2012年1月至2016年1月在我院行手術治療的卵巢癌患者116例為卵巢癌組，年齡31～76歲，平均年齡(56.37±12.38)歲；組織類型：漿液性101例，非漿液性15例；分化程度：高分化29例，中分化23例和低分化64例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期98例；淋巴結轉移：轉移61例，無轉移55例；腹腔積液：有71例，無45例。患者均行病理確診卵巢癌；術前未行化療和放療；病歷資料完整。選擇同期在我院行卵巢良性腫瘤98例，為良性腫瘤組，年齡25～72歲，平均年齡(55.76±14.19)歲；以卵巢良性腫瘤無病變區(qū)域的組織標本30例為對照組，所有標本經(jīng)醫(yī)院病理科高年資的醫(yī)師復核。

1.2 隨訪分組 卵巢癌患者術后以門診、電話和微信等隨訪方式進行隨訪，患者均隨訪2年，其中死亡患者62例，為死亡組，生存患者54例為生存組。

1.3 免疫組織化學檢測 卵巢癌，卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織采用免疫組織化學SP法進行染色。取出石蠟切片，用4 μm切片機連續(xù)切片，經(jīng)過脫水和水化后，使用檸檬酸液體進行抗原修復2 min，用PBS沖洗3次，5 min/次，然后經(jīng)過3%過氧化氫進行水浴10 min，然后用PBS沖洗3次，5 min/次，加入山羊血清50 μl封閉好抗原，并在37℃溫度下孵育，時間為15 min。去除山羊血清，加入CXCL13和Dyrk1b一抗(1∶100)，在室溫下孵育1 h，用PBS沖洗，在室溫下孵育15 min后，行DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色4～5 min，自來水沖洗后用蘇木素進行復染，PBS沖洗后返藍，梯度乙醇脫水后，使用二甲苯脫水，用中性樹脂封片，并固定。陽性表達的標準：以細胞核和細胞質為出現(xiàn)黃色、棕黃色和棕褐色為陽性表達。通過顯微鏡和圖像采集軟件Zoom Browser Ex在40倍物鏡下，隨機采取陽性部位的圖像，每個組織隨機采集10個陽性細胞的視野，使用Imagepro Plus圖像分析軟件測試每個陽性細胞視野的灰度值。根據(jù)參考文獻[6]，計算出代表陽性染色的相對陽性單位(positive unit，PU)，每張切片陽性密度最高的區(qū)域隨機選擇5個視野，并求出平均值PU。

1.4 觀察指標 比較3組表達CXCL13和Dyrk1b量的差別，卵巢癌組織表達CXCL13和Dyrk1b量與臨床病理指標的關系，隨訪2年后生存組和死亡組的差異，預測死亡的靈敏度和特異性。

2 結果

2.1 3組組織CXCL13和Dyrk1b表達量比較 卵巢癌組組織表達CXCL13和Dyrk1b的量明顯高于良性卵巢瘤組和正常對照組(P<0.01)，而良性腫瘤組明顯高于正常對照組(P<0.01)。見表1。

表1 3組組織CXCL13和Dyrk1b表達量比較 PU值,

2.2 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量與臨床指標的關系 卵巢癌組織表達CXCL13和Dyrk1b量與分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、腹腔積液、CA125水平和對化療藥物敏感性具有明顯的相關性(P<0.01)，而與年齡年齡、絕經(jīng)、組織類型和腫瘤直徑無明顯相關性(P>0.05)。見圖1，表2。

表2 卵巢癌患者組織CXCL13和Dyrk1b表達量與臨床指標的關系 PU值,

2.3 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量與預后的關系 死亡組的卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量明顯高于生存組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

表3 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量與預后的關系 PU值,

2.4 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量在預測預后的臨床價值 卵巢癌組織表達CXCL13和Dyrk1b量在預測死亡方面，通過受試者曲線進行分析，發(fā)現(xiàn)CXCL13和Dyrk1b表達量在預測死亡具有較高的靈敏度和特異性，并且發(fā)現(xiàn)兩個指標通過二元Logistic分析得曲線0.265X CXCL13+0.216XDyrk1b-19.111，形成聯(lián)合檢測指標，其靈敏度87.1%，特異性88.9%，曲線下面積明顯優(yōu)于單純指標CXCL13(Z=2.200，P=0.028)和Dyrk1b(Z=2.573，P=0.010)，而在預測死亡方面CXCL13和Dyrk1b兩指標無明顯差異(P>0.05)。見表4，圖2。

表4 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量在預測預后的臨床價值

3 討論

卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤，由于卵巢癌位置較深，早期癥狀不典型，發(fā)現(xiàn)往往屬于晚期，所以卵巢癌是婦科預后較差的惡性腫瘤。趨化因子參與了腫瘤的血管形成，在腫瘤細胞黏附，侵襲，增殖和轉移等過程中具有重要的作用。CXCL13是趨化因子中的重要成員，在調(diào)節(jié)炎癥和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面具有作用，對腫瘤的血管形成和腫瘤細胞的遠處轉移具有重要作用[7]。本研究表明卵巢癌組織標本表達CXCL13的量明顯高于卵巢良性腫瘤和正常對照組，并且發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織表達CXCL13量與分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、腹腔積液、CA125水平和對化療藥物敏感性具有明顯的相關性，說明CXCL13參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，并且與卵巢癌的惡性程度具有相關性，同時本研究提示CXCL13指標顯示CXCL13與卵巢癌患者化療耐藥具有一定的聯(lián)系。對乳腺癌患者進行研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織表達CXCL13明顯高于正常組織，并且發(fā)現(xiàn)與患者的預后不良具有顯著的關系[7]。另一項肺癌的研究中，發(fā)現(xiàn)CXCL13在肺癌組織的表達明顯高于癌旁組織和正常肺組織，并且其陽性率與腫瘤的分化程度，脈管內(nèi)癌栓和淋巴轉移等具有相關性[9]。本研究還發(fā)現(xiàn)2年隨訪出現(xiàn)死亡患者卵巢癌組織CXCL13表達量明顯高于存活者，說明CXCL13表達量與患者的預后密切相關。本研究還發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織CXCL13表達量在預測患者2年死亡方面具有較高的靈敏度和特異性，當卵巢癌組織標本CXCL13蛋白表達量>38.6 PU，其靈敏度79.0%，特異性88.9%，曲線下面積0.881，說明當卵巢癌組織標本表達CXCL13到一定的量，可能預示著預后不良，提示我們對這部分患者進行早期干預。

圖2 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達量在預測死亡的效能

本研究還顯示卵巢癌組織Dyrk1b表達量明顯高于卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織，并且發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織Dyrk1b表達量與分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、腹腔積液、CA125水平和對化療藥物敏感性具有明顯的相關性，說明Dyrk1b不僅參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程，還與卵巢癌患者的預后和化療耐藥具有明顯的相關性。Dyrk1b是屬于Minibrain/Dyrk家族成員，具有11個外顯子和10個內(nèi)含子，除骨骼肌細胞外在大多數(shù)細胞呈低表達，而在結腸癌，宮頸癌，肺癌和卵巢癌等腫瘤中呈高表達，在卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)其表達水平是正常卵巢上皮細胞的2～17倍[14]。在一項小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)將Dyrk1b敲除的小鼠為引起明顯的表型改變，提示Dyrk1b對生存能力并無明顯影響，不是生存必須的蛋白，但對卵巢癌的發(fā)生發(fā)展具有關鍵作用[11]。在一項研究中顯示宮頸癌組織Dyrk1b表達量與化療耐藥具有明顯的相關性[12]。Dyrk1b在對宮頸癌患者的影響，顯示隨著并且的進展Dyrk1b陽性表達率越高，使用Dyrk1b抑制劑能夠明顯抑制宮頸癌細胞的增殖，并誘導宮頸癌細胞的凋亡[13]。本研究還顯示在卵巢癌患者死亡組卵巢癌組織Dyrk1b表達量明顯高于存活組，說明卵巢癌組織Dyrk1b表達量是卵巢癌預后的重要指標。本組研究在研究卵巢癌組織Dyrk1b表達量在預測死亡方面的研究，但Dyrk1b表達量>43.17PU時，其預測2年內(nèi)死亡靈敏度為79.0%，特異性79.6%，曲線下面積0.862，說明卵巢癌組織Dyrk1b表達在預測預后方面具有重要參考價值。本研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合CXCL13和Dyrk1b表達量在預測2年死亡方面明顯優(yōu)于單個指標預測，其靈敏度高達87.1%，特異性88.9%，曲線下面積0.935，說明聯(lián)合檢測能夠提高預測不良預后的效能。

綜上所述，CXCL13和Dyrk1b參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測組織CXCL13和Dyrk1b表達量對預后判斷具有重要的臨床價值。