水楊酸甲酯糖苷對(duì)阿爾茨海默病模型鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

馬曉瑋， 顧紅燕，栗 芳，張?zhí)焯?/p>

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京 100038；2.臨床合理用藥評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100038；3.臨床合理用藥評(píng)價(jià)國(guó)際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，北京 100038；4.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京 100050)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以獲得性記憶減退、認(rèn)知功能障礙等為主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，記憶力減退，認(rèn)知功能障礙是AD的重要特征，與腦內(nèi)學(xué)習(xí)記憶部位神經(jīng)元的損傷有關(guān)。基于AD主要的特征性病理改變，科學(xué)家們提出了許多相關(guān)的病理假說(shuō)，包括著名的β淀粉樣蛋白假說(shuō)、tau蛋白過(guò)度磷酸化假說(shuō)，以及神經(jīng)元突觸丟失等假說(shuō)，這些假說(shuō)都與AD密切相關(guān)[1-2]。但是，這些假說(shuō)都是AD發(fā)生中后期的病理表現(xiàn)，并不能全面清楚地闡述AD發(fā)生的原因和內(nèi)在機(jī)制。近年來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)表明，神經(jīng)炎癥反應(yīng)在AD發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，神經(jīng)炎癥機(jī)制學(xué)說(shuō)逐步被領(lǐng)域內(nèi)科學(xué)家所認(rèn)可。

自1982年Eikelenboom等[3]首次發(fā)現(xiàn)AD病人Aβ斑塊中有炎性相關(guān)蛋白(補(bǔ)體因子，急性期反應(yīng)蛋白)以來(lái)，人們開始認(rèn)識(shí)到了先天性免疫和炎癥反應(yīng)在AD中的作用。此后的一系列研究顯示AD中有多種炎性細(xì)胞參與，包括小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等炎性細(xì)胞，尤其是小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是腦內(nèi)炎性反應(yīng)的主要參與者[4]。由于神經(jīng)炎癥機(jī)制在AD的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要的角色，抗炎治療AD成為了一種可能的選擇。神經(jīng)病理學(xué)、臨床流行病學(xué)、以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等的研究提示非甾體抗炎藥治療AD具有非常積極的作用[5]，但是，臨床治療研究尚未表現(xiàn)出理想的療效[6]，NSAIDs的抗AD作用機(jī)制還不十分明確。

水楊酸甲酯糖苷(methyl salicylate 2-O-β-D-lactoside，MSL)是來(lái)源于傳統(tǒng)民族中藥滇白珠的天然產(chǎn)物衍生物，我們前期的研究顯示其具有明確的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用，且沒有胃腸道副作用，是一種新型的非甾體抗炎藥[7-9]。本研究擬基于APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠AD模型，考察其對(duì)學(xué)習(xí)記憶改善的作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑MSL由北京協(xié)和藥廠提供(批號(hào)：20110323)，純度為99.8%。阿司匹林、羧甲基纖維素鈉購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；多聚甲醛、乙醇等購(gòu)自北京化工廠；Thioflavin T購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.2 儀器灌流儀(LongerPump公司，BT100-1/0602)；水迷宮實(shí)驗(yàn)裝置(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制)；冰凍切片機(jī)(德國(guó)徠卡，CM1860)；透射電鏡(Hitachi，日本日立公司)；正置熒光顯微鏡(NIKON ECLIPSE 80i)；光學(xué)顯微鏡(XSZ-HS3普通光學(xué)顯微鏡，重慶光學(xué)儀器廠)。

1.3 動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)分組APP/PS1(APPswe/PSEN1dE9)雙轉(zhuǎn)基因小鼠，野生型C57BL/6小鼠均購(gòu)自南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所，8月齡，體質(zhì)量(28±2) g，許可證號(hào)：SCXK(蘇)2010-0001，合格證號(hào)：0006903。自由攝食、飲水，室溫(2±3) ℃，相對(duì)濕度40%-50%，安靜，通風(fēng)干燥，12 h光照周期飼養(yǎng)。將APP/PS1小鼠及同窩野生型小鼠(Wide type，WT)按體重隨機(jī)分為8個(gè)組，分別為WT control，WT MSL 150 mg·kg-1，WT MSL 300 mg·kg-1，WT aspirin 80 mg·kg-1，APP/PS1 control，APP/PS1 MSL 150 mg·kg-1，APP/PS1 MSL 300 mg·kg-1，APP/PS1 aspirin 80 mg·kg-1，n=8。野生型對(duì)照組和APP/PS1對(duì)照組灌胃給予0.5% CMC-Na，野生型藥物對(duì)照組和APP/PS1治療組分別灌胃給予以0.5% CMC-Na溶解的MSL和阿司匹林，每天1次，每周6次，連續(xù)給藥5個(gè)月。

1.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)裝置由圓形水池，圖像自動(dòng)采集和軟件分析系統(tǒng)構(gòu)成，圖像自動(dòng)采集和軟件分析系統(tǒng)主要由攝像機(jī)、計(jì)算機(jī)、圖像監(jiān)視器組成，動(dòng)物放入水中后啟動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，實(shí)驗(yàn)完畢自動(dòng)分析報(bào)告結(jié)果參數(shù)，包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)行軌跡，找到平臺(tái)的時(shí)間，游泳速度等。水迷宮直徑100 cm，高度35 cm，水池水深約為15.5 cm。水溫維持在(23±1) ℃。在其中一個(gè)象限放置一個(gè)直徑為4.5 cm，高度14.5 cm的平臺(tái)，保證平臺(tái)在水面之下1 cm。在水池上緣等距離地設(shè)東、西、南、北4個(gè)標(biāo)記作為動(dòng)物入水點(diǎn)，同時(shí)依據(jù)這4個(gè)入水點(diǎn)在水面和水池底部的投影點(diǎn)，將整個(gè)裝置平均分為4個(gè)象限。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，保持環(huán)境安靜并且水迷宮周圍的物品位置和光源固定不變[10]。

水迷宮實(shí)驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩部分，定位航行實(shí)驗(yàn)用于考察小鼠學(xué)習(xí)和記憶的獲取能力。每只小鼠每天從2個(gè)不同象限面向池壁入水，記錄搜尋并登上平臺(tái)所用時(shí)間，即潛伏期(s)，如果在60s的時(shí)間內(nèi)小鼠沒能找到隱匿平臺(tái)，則將小鼠引導(dǎo)至平臺(tái)，并停留30 s，以此類推。同時(shí)記錄下每只小鼠的游泳速度，如此連續(xù)訓(xùn)練5 d即完成定位航行試驗(yàn)。d 6進(jìn)行空間探索試驗(yàn)，用于考察小鼠學(xué)會(huì)尋找平臺(tái)后對(duì)平臺(tái)空間位置記憶的保持能力。將水下平臺(tái)撤掉，每只小鼠自由游泳60 s，記錄小鼠在目標(biāo)區(qū)域(前5 d放置水下平臺(tái)的區(qū)域)的停留時(shí)間和穿越平臺(tái)次數(shù)。所有數(shù)據(jù)均用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)自動(dòng)記錄。

1.5 灌流、取材、固定及大腦切片制作小鼠于末次行為學(xué)測(cè)試后，禁食12 h，不禁水，次日進(jìn)行腦組織取材。小鼠用干冰麻醉。取仰臥體位，打開小鼠胸腔，充分暴露心臟，自左心室插入鈍針頭至主動(dòng)脈，剪開右心耳，快速灌注生理鹽水50 mL以沖洗血液，4%多聚甲醛溶液灌注至肝臟發(fā)白，全身僵硬為止?？焖贁囝^取出全腦，冰浴中分離腦組織，用于冰凍切片的腦組織置于4%多聚甲醛溶液中于4 ℃后固定1 d，換入含30%蔗糖的4%多聚甲醛溶液中。用于石蠟切片的腦組織放入4%多聚甲醛中后固定。制作冰凍切片和石蠟切片。

1.6 尼氏染色冰凍切片置于丙酮中固定30 min，PBS沖洗，3 min×3次。然后，甲苯胺藍(lán)染料中染色20-30 min，水洗15 min。最后，酒精梯度脫水(依次70%、95%、100%)，二甲苯透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察、照相。

1.7 透射電鏡(TEM)檢測(cè)小鼠麻醉后暴露心臟，自左心室灌注0.9%生理鹽水，隨后灌注4%多聚甲醛?？焖贁囝^取出全腦，冰浴中分離皮層和海馬，置固定液(2%多聚甲醛-戊二醛)中固定2 h；磷酸緩沖液(pH 7.2)10 min×3次；1%鋨酸4 ℃后固定2 h；雙蒸水沖洗10 min×3次；梯度乙醇脫水，環(huán)氧丙烷置換，純樹脂包埋，聚合；制備超薄切片，醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染色。干燥后的切片于電鏡下觀察，拍照。

1.8 硫磺素T(Thioflavin T)染色熒光染料硫磺素T通過(guò)與淀粉樣蛋白中β折疊結(jié)合，從而標(biāo)記組織中沉積的纖維樣斑塊。冰凍切片經(jīng)PBS清洗后浸入蘇木精溶液中染色，再經(jīng)PBS水洗、1% Thioflavin T溶液染色、PBS清洗，于中性甘油中封片。切片于正置熒光顯微鏡下觀察、拍照，通過(guò)Image Pro Plus軟件計(jì)算熒光強(qiáng)度，以平均熒光強(qiáng)度表示老年斑數(shù)量及面積的變化。

2 結(jié)果

2.1 MSL對(duì)AD小鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響水迷宮實(shí)驗(yàn)用來(lái)測(cè)試MSL用藥小鼠的學(xué)習(xí)記憶情況，該實(shí)驗(yàn)潛伏期數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析。結(jié)果顯示，在前5 d的定位航行試驗(yàn)中，小鼠逃避潛伏期隨訓(xùn)練次數(shù)增加而逐漸縮短(P<0.001)，潛伏期的變化因分組的不同而表現(xiàn)出差異(P<0.001)。事后分析不同處理組的比較結(jié)果顯示，與WT對(duì)照組相比，APP/PS1模型組小鼠的潛伏期明顯延長(zhǎng)，與模型組相比，MSL中高劑量組潛伏期明顯縮短，而阿司匹林對(duì)潛伏期的影響差異沒有顯著性，提示MSL對(duì)APP/PS1小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有一定的改善作用，而阿司匹林對(duì)APP/PS1小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)明顯影響(Tab 1)。

Tab 1 Latency (s) of APP/PS1 mice during training days in Morris water

此外，口服MSL沒有改變野生型小鼠的逃避潛伏期，提示MSL僅能明顯提高AD小鼠的學(xué)習(xí)能力，長(zhǎng)期口服同等劑量MSL對(duì)正常小鼠學(xué)習(xí)能力沒有影響。

同時(shí)評(píng)價(jià)了MSL 對(duì)AD 小鼠游泳速度的影響，結(jié)果顯示在前5d定位航行實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練天數(shù)的變化，各組小鼠的游泳速度趨勢(shì)相同(P>0.05)，并且各組小鼠之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)，排除了小鼠個(gè)體間由于外周神經(jīng)運(yùn)動(dòng)障礙、漂浮等因素所引起的潛伏期差異。

2.2 MSL對(duì)AD小鼠空間記憶能力的影響于實(shí)驗(yàn)的d 6撤掉平臺(tái)進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如Fig 1A所示，野生型和用藥組能夠依靠空間記憶尋找平臺(tái)，其運(yùn)動(dòng)軌跡多位于原平臺(tái)所在象限，而模型組軌跡沒有趨向性，隨機(jī)分布于各象限。

與野生型小鼠相比，APP/PS1小鼠在平臺(tái)象限的停留時(shí)間及穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)明顯減少。經(jīng)MSL治療后，模型小鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)，穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)增加。長(zhǎng)期口服等量MSL未改變野生型小鼠的停留時(shí)間和穿越次數(shù)，提示MSL可提高AD小鼠的空間記憶能力，而對(duì)正常小鼠沒有影響(Fig 1B)。

2.3 MSL對(duì)AD小鼠皮層和海馬區(qū)神經(jīng)損傷的影響在皮層組織中，WT對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞體積較大，形態(tài)規(guī)則，尼氏體致密，而APP/PS1模型組神經(jīng)細(xì)胞體積較小，尼氏體稀疏、部分缺失提示神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)損傷或功能障礙，由此導(dǎo)致尼氏小體溶解、缺失或合成障礙。經(jīng)MSL 150 mg·kg-1、300 mg·kg-1治療后，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)較為正常，尼氏體染色較為致密，無(wú)明顯缺失(Fig 2A)。尼氏染色陽(yáng)性區(qū)域平均光密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與WT對(duì)照組相比，APP/PS1模型組的平均光密度值明顯降低(P<0.01)，與APP/PS1模型組比較，MSL 300 mg·kg-1組平均光密度值明顯升高(P<0.05)(Fig 2B)。而阿司匹林治療組在神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和平均光密度值兩方面均沒有明顯改變神經(jīng)細(xì)胞的損傷。此外，口服MSL沒有改變野生型小鼠皮層組織尼氏染色陽(yáng)性區(qū)域的平均光密度值。

Fig 1 Spatial learning and memory in APP/PS1 mice improved by MSLA:Moving trajectory of APP/PS1 mice on sixth day by Morris water maze test; B:The time spent in target quadrant and number of crossings of APP/PS1 mice in Morris water maze test ##P<0.01 vs WT control group;**P<0.01 vs APP/PS1 model group.

在海馬組織中，APP/PS1模型組神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)尼氏體稀疏，MSL治療對(duì)神經(jīng)細(xì)胞尼氏體缺失的改善不明顯(Fig 2A)，與WT比較，尼氏染色陽(yáng)性區(qū)域平均光密度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 2B)?？诜﨧SL沒有改變野生型小鼠海馬組織尼氏染色陽(yáng)性區(qū)域的平均光密度值。

2.4 MSL對(duì)AD小鼠皮層和海馬區(qū)神經(jīng)氈的影響透射電鏡結(jié)果顯示，WT對(duì)照組小鼠皮層和海馬組織中神經(jīng)元胞體較大，胞核呈圓形，核膜清晰，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器；神經(jīng)氈軸索、微管形態(tài)正常。APP/PS1模型組小鼠神經(jīng)氈中出現(xiàn)大量帶有核心斑塊和變性軸索的老年斑，神經(jīng)氈內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞的突起呈現(xiàn)空泡化，軸索密集、變性，老年斑周邊的神經(jīng)元發(fā)生不同程度的固縮，胞核皺縮、變形，核染色質(zhì)聚集，間質(zhì)水腫。與模型組相比，MSL 150 mg·kg-1、300 mg·kg-1治療后，APP/PS1小鼠腦內(nèi)老年斑面積減小，神經(jīng)氈空泡化減輕，神經(jīng)氈排列較為緊密，多數(shù)神經(jīng)元得到修復(fù)，神經(jīng)細(xì)胞胞核扭曲變形及染色質(zhì)聚集均得到改善。阿司匹林治療組對(duì)上述神經(jīng)氈的病變改善作用不明顯?？诜﨧SL對(duì)野生型小鼠皮層和海馬組織神經(jīng)氈區(qū)域未見明顯影響(Fig 3)。

Fig 2 Effect of MSL on neuronal dysfunction in APP/PS1 mice with Nissl stainingA:Representative photographs of tissue sections stained with cresyl violet in the cerebral cortex and hippocampus (×200); B:The mean density of positive area in cerebral cortex and hippocampus ##P<0.01 vs WT cortex control group,*P<0.05 vs APP/PS1 cortex model group.

2.5 MSL對(duì)AD小鼠皮層和海馬區(qū)Aβ沉積的影響硫磺素T染色可以標(biāo)記APP/PS1小鼠腦組織中Aβ的沉積。在大腦皮層及海馬組織中，WT鼠均未檢測(cè)到明顯的老年斑出現(xiàn)。與WT對(duì)照組相比，APP/PS1模型組小鼠在皮層和海馬組織均呈現(xiàn)大量陽(yáng)性綠色熒光，提示腦組織中有大量Aβ斑塊沉積，即老年斑形成(Fig 4A)。同時(shí)，硫磺素T染色陽(yáng)性區(qū)域平均熒光密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與WT對(duì)照組相比，APP/PS1模型組皮層和海馬區(qū)域的平均熒光密度均明顯增大(P<0.01)；與APP/PS1模型組相比，MSL治療組對(duì)皮層Aβ沉積所形成的綠色熒光明顯減少，硫磺素T染色陽(yáng)性區(qū)域平均熒光密度明顯減小，在海馬組織中，老年斑的熒光密度雖有所降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；阿司匹林治療對(duì)老年斑沉積的改善作用不明顯(Fig 4B)。

Fig 4 Effects of MSL on Aβ deposition in cerebral cortex and hippocampus with Thioflavin T stainingA:Representative photographs of the Thio-T positive plaques in cerebral cortex and hippocampus of APP/PS1 mice. (×200); B:The proportion of Thio-T positive plaque in cerebral cortex and hippocampus ##P<0.01 vs WT cortex control group,**P<0.01 vs cortex APP/PS1 group.

3 討論

雖然以記憶力減退和認(rèn)知功能障礙為特征的AD發(fā)病機(jī)制還未完全闡明，但神經(jīng)炎癥反應(yīng)貫穿著疾病發(fā)生發(fā)展的整個(gè)過(guò)程，通過(guò)抗炎改善AD的癥狀能否成為可行的治療措施還需要多方面的深入研究。本研究基于APP/PS1小鼠建立AD模型探討了來(lái)源于天然產(chǎn)物的新型非甾體抗炎藥MSL對(duì)AD模型鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，發(fā)現(xiàn)MSL具有明顯的改善AD鼠空間記憶和學(xué)習(xí)的能力，這種作用可能與保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞炎癥損傷和減少Aβ沉積等有密切關(guān)系。

AD病理進(jìn)展過(guò)程中Aβ沉積導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞活化是神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)重要原因，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化誘發(fā)了大量前炎性因子的分泌，從而誘發(fā)神經(jīng)元的凋亡，神經(jīng)元凋亡和突觸丟失是AD病人學(xué)習(xí)記憶減退的主要原因[11-13]。雖然神經(jīng)炎癥反應(yīng)在AD中的作用已經(jīng)被廣泛認(rèn)可，但針對(duì)腦內(nèi)神經(jīng)炎癥反應(yīng)的抗炎治療改善AD癥狀還沒有確切的定論，所以探索通過(guò)抗炎治療改善AD癥狀的機(jī)制研究和新藥發(fā)現(xiàn)不失為一種積極的策略。本研究水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，長(zhǎng)期口服等量MSL未改變野生型小鼠的逃避潛伏期、停留時(shí)間和穿越次數(shù)等指標(biāo)，說(shuō)明長(zhǎng)期口服MSL對(duì)正常小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力沒有影響。經(jīng)MSL治療后，模型小鼠的逃避潛伏期明顯縮短，找到平臺(tái)所用訓(xùn)練次數(shù)減少，路線更為理想，其在目標(biāo)象限停留時(shí)間延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)增加，這些指標(biāo)均提示MSL對(duì)APP/PS1小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有較好的改善作用。另外，值得注意的是各組小鼠之間的游泳速度沒有明顯差異，一方面排除了游泳速度可能對(duì)潛伏期造成影響，另一方面說(shuō)明MSL對(duì)潛伏期的影響源于MSL對(duì)大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的直接作用，該作用與改善外周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的傳導(dǎo)因素?zé)o關(guān)。

盡管AD的特征性病變包括區(qū)域性細(xì)胞缺失、神經(jīng)元內(nèi)纖維纏結(jié)和細(xì)胞外β淀粉樣蛋白沉積，但最終決定AD患者認(rèn)知功能障礙的是神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)目減少及功能缺失。尼氏體是神經(jīng)細(xì)胞的一種正常結(jié)構(gòu)，分布于胞質(zhì)和樹突，由大量平行排列的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖核蛋白體組成，可作為觀察神經(jīng)細(xì)胞功能狀態(tài)的靈敏指標(biāo)，當(dāng)神經(jīng)元損傷或代謝機(jī)能發(fā)生障礙時(shí)，尼氏體即出現(xiàn)形態(tài)變化，甚至消失[14]。在本研究中，APP/PS1模型小鼠大腦皮層和海馬區(qū)域尼氏體著色稀疏、形態(tài)模糊、體積較小，呈現(xiàn)不同程度的缺失，提示神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)損傷或功能障礙。經(jīng)MSL治療后，尼氏體著色程度增加，明顯提高了尼氏染色的平均光密度值，提示MSL對(duì)APP/PS1小鼠神經(jīng)細(xì)胞的功能性損傷具有一定的改善作用。在對(duì)神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)氈的超微結(jié)構(gòu)檢測(cè)中，我們觀察到了APP/PS1小鼠腦中伴有老年斑沉積的神經(jīng)退行性變化?？诜﨧SL可使APP/PS1小鼠腦內(nèi)老年斑面積減小，使神經(jīng)氈空泡化減輕并緊密排列。此外，上述治療組中的多數(shù)神經(jīng)元的形態(tài)損傷得到了修復(fù)，說(shuō)明MSL既可能從形態(tài)學(xué)上緩解神經(jīng)損傷，又可能在代謝機(jī)能等方面改善神經(jīng)功能。此外，由于長(zhǎng)期口服同等劑量MSL對(duì)野生型對(duì)照小鼠沒有影響，進(jìn)一步說(shuō)明MSL對(duì)AD病變小鼠具有防治作用。

Aβ是AD的特征性生物學(xué)指標(biāo)，Aβ沉積也同樣是檢測(cè)AD顱內(nèi)神經(jīng)退行性變化的有效窗口，同時(shí)Aβ在腦內(nèi)的沉積也是誘發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的重要因素[15]。本研究通過(guò)硫磺素T染色及電鏡檢測(cè)特異性觀察了APP/PSl小鼠腦組織的Aβ沉積及MSL的作用，證實(shí)MSL對(duì)APP/PS1小鼠皮層Aβ沉積及老年斑的形成有一定的改善作用。提示MSL可能延緩Aβ沉積，亦或?qū)β的產(chǎn)生過(guò)程及代謝通路具有一定緩解作用。然而，海馬組織與空間位置的學(xué)習(xí)有關(guān)，是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵區(qū)域，但MSL僅在降低皮層Aβ沉積中發(fā)揮了較好的作用，而對(duì)海馬區(qū)域的Aβ沉積作用較弱，由此提示，MSL抑制Aβ沉積機(jī)制在治療AD的作用中較為有限，MSL或許只能在局限部位發(fā)揮抑制Aβ沉積作用，那么其在APP/PS1小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中呈現(xiàn)出的學(xué)習(xí)記憶改善作用，很有可能還有另外機(jī)制的參與，而電鏡結(jié)果中神經(jīng)元周圍大量老年斑的出現(xiàn)及Aβ本身的致炎性提示，我們應(yīng)該考慮到由其引發(fā)的神經(jīng)炎癥損傷及MSL通過(guò)抗神經(jīng)炎癥機(jī)制發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能性。

綜上，通過(guò)對(duì)AD鼠動(dòng)物模型的行為學(xué)評(píng)價(jià)，以及腦組織神經(jīng)元功能性損傷、形態(tài)學(xué)變化及Aβ沉積等指標(biāo)的考察，發(fā)現(xiàn)來(lái)源于天然產(chǎn)物的新型非甾體抗炎藥MSL具有明顯的改善APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，這種作用可能與MSL發(fā)揮抗炎作用而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、減少Aβ沉積等有關(guān)。