新疆血脂異?；颊逜BCB1 C3435T與ABCB1 T2677G基因多態(tài)性分析

王婷婷，徐 莉，馮 杰，趙 婷，李紅健，于魯海，孫 力

血脂異常是一類較常見(jiàn)的疾病，主要包括膽固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平升高或高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低等。血脂異常是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素之一，動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病(atherosclerotic cardiovascular disease, ASCVD)已經(jīng)占全球總死亡率的31%，目前中國(guó)成人血脂異?？傮w患病率高達(dá)40.40%，臨床上首選他汀類藥物防治心血管疾病。他汀類藥物是ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白B1(ATP-binding cassette transporter B1,ABCB1)的特異性轉(zhuǎn)運(yùn)底物，ABCB1可影響其藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程，從而導(dǎo)致不同患者間產(chǎn)生調(diào)脂療效的個(gè)體差異，其中ABCB1 T2677G、ABCB1 C3435T是與他汀類藥物的療效相關(guān)性較強(qiáng)的基因。新疆維吾爾族成人血脂異?；疾÷矢哌_(dá)49.4%，高于我國(guó)成人平均水平。該研究分析ABCB1C3435T與T2677G在新疆維吾爾族、漢族及回族血脂異?；颊咧械姆植记闆r，可為新疆不同民族血脂異?；颊咧贫ㄋ☆愃幬飩€(gè)體化調(diào)脂治療方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料

2017年3月—2020年1月，就診于新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，經(jīng)臨床診斷為血脂異常的患者共773例，其中維吾爾族患者311例，漢族患者409例，回族患者53例，年齡30～65 (50.17±11.65)歲。本研究經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書。

1.1.1

入選標(biāo)準(zhǔn) 病例入選標(biāo)準(zhǔn)如下。① 年齡：≥30周歲且≤65周歲。② 患者血脂是否異常指標(biāo)依據(jù)《2016版中國(guó)成人血脂異常防治指南》，若患者清晨空腹血脂水平滿足以下任何一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)便可確診高脂血癥(血脂異常)：血清TC≥5.72 mmol/L(240 mg/dl)；血清TG≥2.3 mmol/L(200 mg/dl)；血清LDL-C≥4.1 mmol/L(160 mg/dl)；血清HDL-C 1.0 mmol/L(40 mg/dl)。③ 服用治療劑量的阿托伐他汀(40 mg，每日一次)進(jìn)行調(diào)脂治療；④ 患者間無(wú)親緣關(guān)系；⑤ 服藥前4周內(nèi)未服用過(guò)他汀類或貝特類、煙酸類等其他類型調(diào)脂藥物；⑥ 服藥前4周內(nèi)未服用過(guò)影響他汀類藥物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物，如維拉帕米、胺碘酮、地高辛、紅霉素、克拉霉素、酮康唑、伊曲康唑、環(huán)孢素、他克莫司、三環(huán)類抗抑郁藥、西咪替丁、苯妥英鈉、利福平等。

1.1.2

排除標(biāo)準(zhǔn) 病例排除標(biāo)準(zhǔn)如下：① 不符合上述納入標(biāo)準(zhǔn)患者；② 對(duì)阿托伐他汀過(guò)敏或不能耐受患者；③ 半年內(nèi)曾患急性心肌梗塞、腦血管意外、嚴(yán)重創(chuàng)傷或重大手術(shù)患者；④ 合并肝、腎和造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾病患者；⑤孕婦或哺乳期婦女、酗酒或藥物濫用者、惡性腫瘤、精神病患者等；⑥繼發(fā)性血脂異常者。

1.2 方法

1.2.1

樣本的收集 取外周靜脈血2 ml置于EDTA抗凝管中，1～2 h內(nèi)送檢備用。

1.2.2

儀器與試劑 TL998A型熒光檢測(cè)儀(西安天隆科技有限公司)；熒光染色原位雜交及染色體核型分析系統(tǒng)(北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司)；XW-3微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；Centrifuge 5430R低溫離心機(jī)(德國(guó)eppendorf公司)；血液樣本預(yù)處理溶液、核酸純化試劑、測(cè)序反應(yīng)試劑盒(北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司)。

1.2.3

檢測(cè)方法 精密量取滅菌注射用水900 μl與預(yù)處理溶液100 μl混合于1.5 ml離心管中，加入EDTA抗凝管中全血標(biāo)本200 μl，渦旋混合，靜置5 min后，以3 500 r/min離心5 min，去上清液，保留底部富集的白細(xì)胞沉淀；加入核酸純化試劑50 μl，反復(fù)吹打混勻，室溫靜置20～40 min，獲得白細(xì)胞混懸液；吸取上述白細(xì)胞混懸液2.0 μl分別加至ABCB1 C3435T與T2677G位點(diǎn)測(cè)序反應(yīng)試劑中，充分混勻，置于熒光檢測(cè)儀中，采用熒光原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)熒光染色原位雜交及染色體核型分析系統(tǒng)直接讀取基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)樣本的群體代表性，基因型頻率和等位基因頻率采用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算，計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，各組間基因型頻率和等位基因頻率的比較用Fisher精確檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，

P

<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

維吾爾族、漢族及回族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T與T2677G基因型頻率和等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(

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>0.05)，說(shuō)明本研究研究對(duì)象具有群體代表性。

2.2 ABCB1 C3435T基因在新疆維吾爾族、漢族及回族血脂異?；颊咧械姆植?/p>3個(gè)民族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，其中維吾爾族與漢族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，維吾爾族與回族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，但漢族與回族血脂異常患者ABCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

2.3 ABCB1 T2677G基因在新疆維吾爾族、漢族及回族血脂異?；颊咧械姆植?/p>3個(gè)民族血脂異?；颊逜BCB1 T2677G基因型頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，等位基因頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中維吾爾族與漢族血脂異?；颊逜BCB1 T2677G基因型頻差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)。見(jiàn)表2。

3 討論

近年來(lái)，心腦血管疾病的發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。大量的流行病學(xué)調(diào)查顯示血脂異常是多種心腦血管疾病重要的危險(xiǎn)因素。血脂水平不僅與年齡、性別、職業(yè)、文化程度、經(jīng)濟(jì)條件以及不同地域的人群的生活飲食習(xí)慣等諸多環(huán)境因素密切相關(guān)，還與個(gè)體的遺傳因素有關(guān)。新疆位于祖國(guó)西北，地處中亞腹地，是多民族聚居的地區(qū)，飲食結(jié)構(gòu)中動(dòng)物性脂肪、甜食及鹽分?jǐn)z入量較高，其獨(dú)特的飲食習(xí)慣導(dǎo)致新疆維吾爾族成人血脂異?；疾÷矢哂谌珖?guó)平均水平。且新疆維吾爾族人群肥胖的程度較新疆漢族人群的值稍高，高血壓的檢出率也高于漢族人群，隨著體質(zhì)指數(shù)的增加，總膽固醇、低密度脂蛋白異常的檢出水平也高于漢族人群。

表1 漢族、維吾爾族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型、等位基因頻數(shù)和頻率分布比較[n(%)]

表2 漢族、維吾爾族血脂異常患者ABCB1 T2677G基因型、等位基因頻數(shù)和頻率分布比較[n(%)]

因新疆血脂異?；颊弑姸?，臨床上常選用他汀類藥物進(jìn)行調(diào)脂治療，且部分患者為新疆偏遠(yuǎn)地區(qū)農(nóng)牧民，經(jīng)濟(jì)狀況較差，因此提高他汀類藥物調(diào)脂療效、降低患者用藥負(fù)擔(dān)尤為重要。Su et al通過(guò)Meta分析研究發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物降低LDL-C和TC水平療效與ABCB1 C3435T基因多態(tài)性相關(guān)，檢測(cè)ABCB1 C3435T基因型可以對(duì)患者使用他汀類藥物的療效起到很好的預(yù)測(cè)作用。當(dāng)ABCB1 T2677G位點(diǎn)等位基因T突變?yōu)镚時(shí)，改變編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列，使絲氨酸變?yōu)楸彼幔瑢?duì)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝產(chǎn)生影響，因此會(huì)影響他汀類藥物的療效。

他汀類藥物的調(diào)脂療效具有種族間與個(gè)體間差異，而基因多態(tài)性是造成這種差異的主要原因。本次研究著重分析他汀類藥物療效相關(guān)基因ABCB1 C3435T、ABCB1 T2677G在新疆維吾爾族、漢族及回族血脂異?；颊咧械幕蚨鄳B(tài)性分布特征，結(jié)果表明3個(gè)民族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，其中維吾爾族與漢族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)，維吾爾族與回族血脂異常患者ABCB1 C3435T等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)；維吾爾族與漢族血脂異?；颊逜BCB1 T2677G基因型頻差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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<0.05)。

通過(guò)測(cè)定血脂異?；颊逜BCB1 C3435T、ABCB1 T2677G基因型，可以提高患者選擇使用他汀類藥物的針對(duì)性，減輕患者用藥負(fù)擔(dān)，指導(dǎo)臨床安全、有效地合理用藥。新疆維吾爾族與漢族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T基因型頻率及等位基因頻率具有差異性，維吾爾族與回族血脂異?；颊逜BCB1 C3435T等位基因頻率具有差異性；維吾爾族與漢族血脂異常患者ABCB1 T2677G基因型頻率具有差異性。因此，在ABCB1基因與他汀類藥物療效的相關(guān)研究機(jī)制中，民族差異是不容忽視的重要因素。為不同民族血脂異?；颊哒{(diào)脂治療提供最佳的個(gè)體化治療方案，使血脂異常臨床用藥更具針對(duì)性、高效性和安全性。