芹菜素聯(lián)合其它藥物在疾病治療中藥理作用及機(jī)制的研究進(jìn)展

盧慧穎 王天陽 王浩澤 周婕

摘 要 目的：研究芹菜素聯(lián)合其它藥物在疾病治療中的藥理作用及機(jī)制。方法：以“芹菜素”“抗腫瘤”“抗菌”“抗氧化損傷”“作用機(jī)制”“聯(lián)合應(yīng)用”“Apigenin”“Anti-tumor”“Anti-bacterial”“Anti-oxidative”“Mechanisms”“Combined application”等為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)、維普網(wǎng)、PubMed等數(shù)據(jù)庫中組合查詢2000年1月-2019年12月發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，對芹菜素聯(lián)合其它藥物在疾病治療中的藥理作用及機(jī)制的進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果與結(jié)論：芹菜素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化損傷等藥理活性。隨著對該成分研究的深入，其在聯(lián)合用藥中的優(yōu)勢也逐漸顯現(xiàn)。在與生物制品、經(jīng)典化療藥物、中藥活性成分、抗菌藥物等聯(lián)用時，其可以通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞周期阻滯、抑制細(xì)胞遷移、改變代謝酶活性等途徑來發(fā)揮對惡性腫瘤、細(xì)菌感染、高血壓、缺血再灌注等疾病的治療作用，并能顯著增強(qiáng)后用藥物的治療效果、降低毒副作用、減少用藥劑量，具有良好的應(yīng)用前景。但目前對API聯(lián)合用藥的作用機(jī)制尚不明確，有關(guān)聯(lián)合用藥中劑量的調(diào)整、給藥方案的改善等方面的研究較少，且相關(guān)文獻(xiàn)多集中于細(xì)胞與動物研究，缺少臨床方面的試驗驗證。因此，應(yīng)進(jìn)一步加深對API聯(lián)合用藥方案的優(yōu)化、創(chuàng)新及臨床應(yīng)用的研究，以充分發(fā)揮API聯(lián)合用藥在疾病治療中的優(yōu)勢，為臨床治療提供安全有效的用藥新方案。

關(guān)鍵詞 芹菜素;抗腫瘤;抗菌;抗氧化損傷;作用機(jī)制;聯(lián)合應(yīng)用

芹菜素（Apigenin，API）又稱芹黃素、洋芹素，是一種黃酮類化合物，化學(xué)名稱為4，5，7-三羥基黃酮，分子式為C15H10O5，廣泛分布在芹菜、歐芹和洋甘菊等植物中[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，API具有抗抑郁、抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗損傷、抗衰老、抗肥胖等多種藥理作用，是一種療效多樣、安全低毒的天然活性成分[2-9]。

聯(lián)合用藥是指為了達(dá)到治療目的而采用的兩種或兩種以上藥物同時或先后應(yīng)用，其目的主要是為了發(fā)揮藥物的協(xié)同治療作用以提高療效、延遲或減少耐藥性的發(fā)生、減少個別藥物的劑量，從而降低不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險[10]。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)與藥理學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，API廣泛的生物活性逐漸被研究證實，多通路、多途徑的作用機(jī)制是API治療疾病的一大優(yōu)勢，當(dāng)其與多種治療作用不同的藥物聯(lián)用時，不易發(fā)生競爭性抑制，在維持原有作用效果的基礎(chǔ)上可減少用藥劑量、延緩機(jī)體耐受發(fā)生、減輕患者不良反應(yīng)、滿足臨床高效安全用藥的需求。因此，本文以“芹菜素”“抗腫瘤”“抗菌”“抗氧化損傷”“作用機(jī)制”“聯(lián)合應(yīng)用”“Apigenin”“Anti-tumor”“Anti-bacterial”“Anti-oxidative”“Mechanisms”“Combined application”等為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)、維普網(wǎng)、PubMed等數(shù)據(jù)庫中組合查詢2000年1月-2019年12月發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，就API聯(lián)合用藥的相關(guān)研究進(jìn)行整理、分析，為臨床治療提供安全有效的用藥新方案。

1 抗腫瘤作用

1.1 與生物制品聯(lián)用

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）是腫瘤壞死因子（TNF）超家族成員之一，能通過與特異性受體結(jié)合來誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生凋亡，對腫瘤細(xì)胞具有選擇性的殺傷作用，而對正常細(xì)胞毒性較低，是治療腫瘤的潛在新型藥物[11]。然而有研究表明，大多數(shù)腫瘤細(xì)胞對TRAIL誘導(dǎo)的凋亡并不敏感，如肝癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞[12]。唐愛瓊等[13]研究發(fā)現(xiàn)，API（20 μmol/L）與TRAIL（20 ng/mL）聯(lián)用時，人卵巢癌CoC1細(xì)胞的凋亡率為（69.50±4.65）%，為二者單用凋亡率之和的4.05倍;在此過程中，API能通過抑制核因子κB抑制蛋白（IκBα）磷酸化和核因子κB（NF-κB）活性來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而顯著增強(qiáng)TRAIL對CoC1細(xì)胞的殺傷作用。劉杰等[14]研究發(fā)現(xiàn)，API（20 μmol/L）與 TRAIL（20 ng/mL）聯(lián)用后，人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡率為（59.87±4.20）%，為同等劑量下兩藥單用時細(xì)胞凋亡率之和的5.8倍;其機(jī)制為促進(jìn)c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化和活性氧（ROS）生成，上調(diào)JNK信號通路下游凋亡相關(guān)調(diào)控蛋白[如胱天蛋白酶3（Caspase-3）]的表達(dá)，誘導(dǎo)ROS堆積，引起細(xì)胞損傷，從而促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡[15]。蔣迪[16]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)20 μmol/L API預(yù)處理后，TRAIL對人胃癌BGC-823細(xì)胞活性的抑制作用明顯增強(qiáng)，且兩者（API 20 μmol/L+TRAIL 100 ng/mL）聯(lián)用后，BGC-823細(xì)胞的凋亡率是兩藥單用時細(xì)胞凋亡率之和的3.4倍;其機(jī)制是API可通過消耗BGC-823細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶，上調(diào)TRAIL受體DR5表達(dá)，隨后DR5通過其死亡結(jié)構(gòu)域與TRAIL結(jié)合以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而增強(qiáng)TRAIL對BGC-823細(xì)胞的殺傷作用。Apo2配體（Apo2L）/TRAIL也是TNF家族中的一種細(xì)胞因子，Oishi等[17]同樣發(fā)現(xiàn)，API可通過結(jié)合并抑制腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白2上調(diào)DR5活性，增加Apo2L/TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。Horinaka等[18]研究表明，API還能與TRAIL聯(lián)合誘導(dǎo)人淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞、人前列腺癌DU145細(xì)胞和人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞的調(diào)亡，其機(jī)制是通過誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）與其他蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域發(fā)生裂解，并激活Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-10，從而增強(qiáng)TRAIL的抑制效果。

西妥昔單抗（CET）是一種針對細(xì)胞表面表皮生長因子受體（EGFR）的單克隆抗體，對多種腫瘤具有良好的治療效果，如非小細(xì)胞肺癌[19]、結(jié)直腸癌[20]等。Hu等[21]研究發(fā)現(xiàn)，API（50 μmol/L）與CET（0.25 mg/mL）聯(lián)用可顯著提高人鼻咽癌HONE1、CNE2細(xì)胞中Bax/Bcl-2比值與已切割的胱天蛋白酶3（Cleaved-caspase-3）的含量，下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表達(dá)，增加G2/M期的細(xì)胞占比，抑制EGFR磷酸化，促進(jìn)CET對EGFR的抑制作用，下調(diào)磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（p-STAT3）的表達(dá)，抑制與細(xì)胞增殖相關(guān)的Akt/STAT信號通路，最終促進(jìn)CET誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

酪絲纈肽（YSV）一種由酪氨酸-絲氨酸-纈氨酸構(gòu)成的多肽類抗腫瘤制劑。Jin等[22]研究發(fā)現(xiàn)，API（2.7 μg/mL）與YSV（270 μg/mL）聯(lián)用后，人肺腺癌A549細(xì)胞的凋亡率為19.6%，分別是API、YSV單用的3.84、1.91倍;其作用機(jī)制是上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9以及Caspase的切割底物多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表達(dá)水平，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)水平，顯著增加G2/M期的細(xì)胞比例，并增強(qiáng)了YSV的抗侵襲作用，提示兩者發(fā)揮了協(xié)同促凋亡作用。

N-（4-羥基苯基）維生素甲酰胺（4-HPR）是一類視黃酮類似物，已被證明能夠?qū)Ω伟?、肺癌、膀胱癌等發(fā)揮治療作用[23-25]。Mohan等[26]研究發(fā)現(xiàn)，API（50 μmol/L）與 4-HPR（0.5 μmol/L）聯(lián)用能協(xié)同降低人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y、SK-N-BE2、IMR-32細(xì)胞的存活率，并可協(xié)同抑制細(xì)胞自噬、促進(jìn)細(xì)胞凋亡;其作用機(jī)制為下調(diào)自噬誘導(dǎo)蛋白如Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白1（Beclin-1）、Toll樣受體4、髓樣分化因子等，激活參與自噬抑制的p-Akt/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路;下調(diào)NF-κB、Bcl-2表達(dá)，上調(diào)Bax、Cleaved-caspase-3、已切割的聚腺苷二磷酸一核糖聚合酶（Cleaved-PARP）含量，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

1.2 與經(jīng)典化療藥聯(lián)用

5-氟尿嘧啶（5-FU）是一種廣泛應(yīng)用于臨床的抗腫瘤藥物，其可通過抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶抑制DNA合成，引起細(xì)胞周期阻滯并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最終抑制腫瘤細(xì)胞生長;由于該藥在腫瘤治療中的療效有限，目前臨床上多將5-FU與其它藥物進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用。Hu等[27]發(fā)現(xiàn)，API與5-FU聯(lián)用能顯著促進(jìn)人肝癌SK-Hep-1、BEL-7402細(xì)胞進(jìn)入凋亡早期，且效果遠(yuǎn)超單用藥組;其作用機(jī)制為二者合用可通過增加肝癌細(xì)胞中ROS水平，對抗ROS介導(dǎo)的耐藥性，同時觸發(fā)線粒體凋亡通路，下調(diào)Bcl-2表達(dá)，降低線粒體膜電位（MMP），并激活Caspase-3和PARP，從而增強(qiáng)5-FU的細(xì)胞毒作用。此外，API還可通過激活線粒體凋亡通路來增強(qiáng)5-FU對人乳腺癌細(xì)胞和人頭頸部鱗癌細(xì)胞的殺傷作用[28]。Hanaa等[29]對埃利希氏腹水癌模型小鼠開展的研究發(fā)現(xiàn)，API[100 mg/（kg·d）]與5-FU（20 mg/kg）聯(lián)用后不僅能顯著增加Caspase-3、Caspase-9活性和丙二醛（MDA）含量，上調(diào)Beclin-1含量，增加JNK活性，下調(diào)抗凋亡因子髓細(xì)胞白血病1表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，縮小瘤體體積，減輕組織病理學(xué)變化，并顯著降低腫瘤的Ki-67增殖指數(shù)，最終增強(qiáng)5-FU對埃利希氏腹水癌的治療效果。

順鉑是一種具有DNA損傷作用的抗腫瘤藥物，目前已被廣泛用于治療肺癌、卵巢癌和宮頸癌等多種腫瘤[30]。在治療過程中，順鉑單獨使用易導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生耐藥性，但其交叉耐藥的情況較為少見，因此臨床上常將其與其它藥物聯(lián)用，以減少腫瘤細(xì)胞耐藥的發(fā)生、發(fā)展[31]。朱鴻武等[32]研究發(fā)現(xiàn)，API（10 μmol/L）與順鉑（0.2 μg/mL）聯(lián)用可協(xié)同促進(jìn)人食管鱗癌TE-1細(xì)胞凋亡，并下調(diào)應(yīng)激保護(hù)蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78的表達(dá)，從而減弱該細(xì)胞抗凋亡、抗應(yīng)激的能力，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對順鉑的敏感性。Erdogan等[33]研究發(fā)現(xiàn)，API（15 μmol/L）與順鉑（7.5 μmol/L）聯(lián)用能顯著增強(qiáng)順鉑對人前列腺癌CD44+Pca干細(xì)胞的毒性，并有一定的促凋亡作用，可使順鉑的半數(shù)抑制濃度從7.5 μmol/L降至2.2 μmol/L;此外，兩藥聯(lián)用后還可顯著提高細(xì)胞中Caspase-8、凋亡蛋白酶激活因子1和p53的mRNA表達(dá)量，降低Bcl-2的表達(dá)水平，抑制磷脂酰肌醇3-激酶和Akt的磷酸化，下調(diào)癌前基因sharpin和凋亡抑制蛋白Survivin以及NF-κB的表達(dá)，并通過上調(diào)p21和Cyclin，抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2（CDK-2）、CDK-4、CDK-6的表達(dá)，最終抑制腫瘤細(xì)胞的生長;與此同時，二者還可通過抑制Akt信號通路、下調(diào)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白Snail的表達(dá)而增強(qiáng)順鉑對細(xì)胞遷移能力的抑制作用。

紫杉醇是一種萜類化合物，可通過穩(wěn)定微管、阻止其解聚，抑制腫瘤細(xì)胞的分裂與增殖來發(fā)揮抗腫瘤作用[34]。然而臨床研究顯示，紫杉醇存在較為嚴(yán)重的不良反應(yīng)（如過敏、骨髓抑制等）而影響患者預(yù)后，故亟需對紫杉醇的減毒方案進(jìn)行研究[35]。Xu等[36]研究發(fā)現(xiàn)，單用紫杉醇（10 nmol/L）僅可使人宮頸癌HeLa細(xì)胞的存活率下降24%，而紫杉醇（4 nmol/L）與API（15 μmol/L）聯(lián)用后，該細(xì)胞的存活率下降了50%;主要原因是API可通過抑制超氧化物歧化酶（SOD）活性，促進(jìn)ROS介導(dǎo)的Caspase-2裂解和MMP去極化，從而協(xié)同了紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用;此外，在此協(xié)同效應(yīng)中，紫杉醇的使用劑量明顯減少，提示API的聯(lián)用可一定程度地減輕紫杉醇的毒性反應(yīng)。

環(huán)氧合酶2（COX-2）是一種在炎癥、腫瘤中呈高表達(dá)的蛋白，是治療結(jié)腸癌的重要靶點，其抑制劑阿司匹林目前已成為防治結(jié)腸癌的重要藥物[37-38]。劉斌等[39]研究發(fā)現(xiàn)，10 μmol/L的API即可將阿司匹林對人結(jié)腸癌HT-29、HCT-7和Moser細(xì)胞的抑制率再提高20%～40%，顯著增強(qiáng)阿司匹林的療效;其作用機(jī)制是API協(xié)同阿司匹林抑制了TNF-α誘導(dǎo)的IκBα降解，從而抑制NF-κB入核，減少其下游基因COX-2表達(dá)，最終抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖。

吉西他濱（GEM）是一種嘧啶類抗代謝化療藥物，可通過抑制DNA合成而抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[40]。Lee等[41]研究發(fā)現(xiàn)，API（30 mmol/L）與GEM（0.5或2 μmol/L）聯(lián)用后，可顯著誘導(dǎo)人胰腺癌MiaPaCa-2、AsPC-1細(xì)胞凋亡，其凋亡率遠(yuǎn)高于GEM單用組;其機(jī)制為API可通過抑制Akt、NF-κB活化，下調(diào)Bcl-2表達(dá)并過表達(dá)Bax，從而增強(qiáng)了GEM對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。

阿霉素（ADM）是細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤藥物，可抑制腫瘤細(xì)胞RNA和DNA的合成，常用于肝癌等惡性腫瘤的治療[42-43]。Gao等[44]研究發(fā)現(xiàn)，在人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/ADM中，兩者聯(lián)用可使細(xì)胞的耐藥率與胞內(nèi)miR-520b含量上調(diào);API可以通過降低自噬因子ATG7的蛋白水平來增加miR-520b的表達(dá)，從而一定程度上恢復(fù)BEL-7402/ADM細(xì)胞對ADM的敏感性。

環(huán)磷酰胺（CTX）是一種氮芥類衍生物，在體內(nèi)代謝活化生成磷酰胺氮芥，從而干擾細(xì)胞DNA復(fù)制以發(fā)揮抗腫瘤作用[45]。孫倩[46]研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠宮頸癌細(xì)胞（U14）荷瘤模型中，與單用CXT組相比，API（100 mg/kg）與CTX（50 mg/kg）聯(lián)用可對小鼠腫瘤組織表現(xiàn)出明顯的協(xié)同殺傷作用，并能顯著增加小鼠的體質(zhì)量，減輕CTX引起的毒副作用。

1.3 與中藥活性成分聯(lián)用

Huang等[47]研究發(fā)現(xiàn)，與單用藥組相比，API（10 μmol/L）聯(lián)合白楊素（10 μmol/L）可顯著降低人肝癌HepG2細(xì)胞和人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的存活率，并通過下調(diào)低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6（LRP6）/Wnt/β-聯(lián)蛋白通路中LRP6的表達(dá)水平，下調(diào)通路下游分子S相激酶相關(guān)蛋白2表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;此外，聯(lián)合用藥還能顯著下調(diào)MDA-MB-231細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、纖連蛋白和Snail的表達(dá)，減弱腫瘤細(xì)胞的遷移能力;在體內(nèi)試驗中，該團(tuán)隊發(fā)現(xiàn)除上述機(jī)制外，API與白楊素聯(lián)合還可通過下調(diào)Cyclin A、周期素依賴性激酶1/細(xì)胞分裂周期蛋白2（CDC2）表達(dá)，上調(diào)Cleaved-caspase 3、Caspase-8、Cleaved- PARP蛋白的水平來發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。

激活雌激素受體β（ER-β）是一種預(yù)防結(jié)腸癌的重要機(jī)制，其主要通過調(diào)控與炎癥、凋亡、細(xì)胞周期相關(guān)的靶基因表達(dá)而抑制結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展。Yang等[48]研究發(fā)現(xiàn)，與單用藥組相比，API與柚皮素聯(lián)用能增強(qiáng)小鼠結(jié)腸上皮YAMC細(xì)胞的ER活化，降低ER-β介導(dǎo)的YAMC細(xì)胞生長水平，從而抑制其增殖。

王毅[49]研究發(fā)現(xiàn)，API與羥基蕪花素（HGK）聯(lián)用可表現(xiàn)出協(xié)同增效的抗膠質(zhì)瘤活性，且API能顯著縮短HGK發(fā)揮最佳藥效的時間。其機(jī)制為二者協(xié)同損傷細(xì)胞DNA和線粒體，激活TNF-α介導(dǎo)的Casepase活化;此外，API還可增強(qiáng)HGK引起的細(xì)胞周期S期阻滯并激活非典型線粒體凋亡通路，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

1.4 與其它藥物聯(lián)用

API在藥物聯(lián)用中除起協(xié)同輔助外，還能在其它藥物輔助下發(fā)揮作用。Lee等[50]研究發(fā)現(xiàn)，API（10 μmol/L）與谷氨酰胺抑制劑（5 μmol/L）聯(lián)用后，后者能通過引起嚴(yán)重代謝應(yīng)激、促進(jìn)API下調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1、降低糖酵解和戊糖磷酸代謝、抑制腫瘤細(xì)胞對葡萄糖的利用來抑制人肺癌H1299、H460細(xì)胞的增殖及所需腺苷三磷酸、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的生成，從而增強(qiáng)API的抗腫瘤作用。

2 抗氧化應(yīng)激損傷作用

現(xiàn)有研究表明，氧化應(yīng)激反應(yīng)是高血壓腎損傷發(fā)生、發(fā)展的重要因素[51]。馬春艷等[7]研究發(fā)現(xiàn)，給予自發(fā)性高血壓模型大鼠16 mg/kg大黃素聯(lián)用110 mg/kg API后，兩種方案均可通過提高大鼠腎組織SOD活性、降低MDA含量來對抗高血壓所致的腎氧化損傷，且聯(lián)合用藥組的效果更顯著;此外，兩藥合用也可通過降低腎組織中血管緊張素Ⅱ的含量、緩解腎纖維化而發(fā)揮保護(hù)腎臟的作用。

史婷婷等[52]研究發(fā)現(xiàn)，在心肌缺血再灌注損傷模型SD大鼠中，以同劑量（100 mg/kg）的API和銀杏酮酯共同灌胃預(yù)處理后，與單獨用藥相比，聯(lián)用組大鼠心臟組織中SOD的含量顯著升高，血漿中MDA、肌酸激酶同工酶、肌鈣蛋白、肌酸激酶的含量均顯著降低，病理損傷明顯減輕，表明聯(lián)合用藥改善心臟缺血再灌注損傷的效果更佳。

3 抗菌作用

Eumkeb等[53]在對耐頭孢他啶的陰溝腸桿菌（CREC）的耐藥性研究中發(fā)現(xiàn)，API（3 g/mL）與頭孢他啶（3 g/mL）聯(lián)用對該耐藥菌株的部分抑菌濃度指數(shù)為<0.01～<0.07，提示API能顯著逆轉(zhuǎn)CREC對頭孢菌素的耐藥性;此外該研究還發(fā)現(xiàn)，單用20 g/mL頭孢他啶時，僅有部分細(xì)菌出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)外膜間隙增寬現(xiàn)象，而兩藥聯(lián)合可使該菌株胞質(zhì)內(nèi)大量細(xì)胞器丟失、細(xì)胞壁損傷變形脫落、質(zhì)膜脫落等，出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)損傷;聯(lián)合用藥時，API可增強(qiáng)頭孢他啶的殺傷作用，使CREC的菌落形成單位（CFU）計數(shù)下降超過1×103 CFU/mL，且24 h內(nèi)無好轉(zhuǎn)。兩藥的協(xié)同抗菌作用主要是通過抑制肽聚糖合成、抑制β-內(nèi)酰胺酶的活性、增加胞膜通透性等來實現(xiàn)的。張新娟等[6]研究發(fā)現(xiàn)，API與部分喹諾酮類抗生素（如左氧氟沙星、環(huán)丙沙星）或氨基糖苷類抗生素（如慶大霉素、阿米卡星、依替米星等）聯(lián)用具有明顯的協(xié)同作用，其聯(lián)合抗菌指數(shù)為0.25～0.50。

4 抗炎作用

噬菌體裂解酶是由噬菌體產(chǎn)生的一種特殊分子，具有在細(xì)菌表面打孔并造成其迅速裂解和死亡的作用[54]。夏翡翡[54]發(fā)現(xiàn)，在金黃色葡萄球菌肺炎模型小鼠中，500 μg API與60 μg金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶（LysGH15）聯(lián)合給藥能顯著提高LysGH15對該模型小鼠的治療效果，并改善其健康狀況。與兩藥單獨治療比較，聯(lián)合治療組小鼠血清中TNF-α、白細(xì)胞介素1β（IL-? ?1β）、IL-6水平及肺組織菌落數(shù)均顯著降低;其肺泡輪廓相對完整、腔內(nèi)炎細(xì)胞浸潤明顯減少、肺臟濕質(zhì)量與干質(zhì)量的比值顯著降低，并與健康小鼠無明顯差異。這主要是源于API的抗炎作用，即API能抑制JNK、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶和p38的磷酸化，通過絲裂原活化蛋白激酶與NF-κB信號通路抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)與分泌。

5 其他作用

5.1 抗肥胖

Guo等[9]研究發(fā)現(xiàn)，相較于其他天然化合物（如柚皮苷、槲皮素），API（40 μmol/L）與大黃素（80 μmol/L）聯(lián)用協(xié)同抑制小鼠前脂肪3T3-L1細(xì)胞分化和胰脂肪酶活性的作用最強(qiáng)，這種聯(lián)用可顯著抑制前脂肪細(xì)胞的分化成熟以及脂肪細(xì)胞的肥大，對肥胖的預(yù)防與治療具有指導(dǎo)意義。Ma等[55]研究發(fā)現(xiàn)，金合歡素與API以劑量比1 ∶ 1聯(lián)用時，具有協(xié)同作用，能共同促進(jìn)小鼠前脂肪3T3-L1細(xì)胞中腺苷一磷酸依賴的蛋白激酶和乙酰輔酶 A 羧化酶的磷酸化，進(jìn)而抑制膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白、過氧化物酶體增殖劑激活受體γ、甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶、增強(qiáng)子結(jié)合蛋白的表達(dá)水平，下調(diào)脂肪細(xì)胞特異性因子硬脂酰輔酶A去飽和酶1、脂肪細(xì)胞相關(guān)基因脂肪酸合成酶的表達(dá)，最終影響脂肪形成、調(diào)節(jié)脂類代謝。

5.2 抗寄生蟲感染

利什曼病是由利什曼原蟲感染而引起的皮膚寄生蟲病，米替福辛已被批準(zhǔn)用于該病的治療，但該藥易引起腹瀉、嘔吐和肝酶水平升高等不良反應(yīng)[56-57]，故需要聯(lián)合其它藥物來改善這一現(xiàn)象。Emiliano等[57]研究發(fā)現(xiàn)，與API聯(lián)用可降低米替福辛的使用劑量并減少米替福辛的不良反應(yīng)。與未用藥組、單用藥組相比，1 mg/（kg·d）API和4 mg/（kg·d）米替福辛聯(lián)合使用能顯著改善亞馬遜利什曼原蟲感染BALB/c小鼠的病變程度與亞馬遜利什曼原蟲的負(fù)載量，且米替福平的腎毒性與肝毒性亦顯著降低。

5.3 抗病毒感染

阿昔洛韋是一種核苷類似物抗病毒藥物，在體內(nèi)經(jīng)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1（OAT1）介導(dǎo)的途徑代謝，其不良反應(yīng)以腎毒性為主。Wu等[58]研究發(fā)現(xiàn)，阿昔洛韋與API聯(lián)用能使穩(wěn)定表達(dá)人OAT1的犬腎上皮細(xì)胞的存活率從50.6%提高到112.62%，并可有效降低阿昔洛韋引起的腎毒性;其機(jī)制是API通過抑制OAT1介導(dǎo)的代謝途徑來顯著減少腎臟細(xì)胞對阿昔洛韋的攝取，從而增強(qiáng)和延長阿昔洛韋的療效、減輕不良反應(yīng)。

5.4 抗骨質(zhì)疏松

雷洛昔芬是一種苯噻吩類化合物，在調(diào)節(jié)骨和血清膽固醇水平時具有擬雌激素作用，可使骨礦物質(zhì)密度增加，防止骨質(zhì)丟失，臨床上多用于女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療[59]。Chen 等[60]研究發(fā)現(xiàn)，API減少了雷洛昔芬的一級代謝并降低了其在腸道內(nèi)的葡萄糖醛酸化、硫酸化水平，抑制腸道代謝和外排轉(zhuǎn)運功能，提高了該藥的生物利用度，從而增強(qiáng)了其治療骨質(zhì)疏松的效果。

6 結(jié)語

API作為一種具有多種生物學(xué)活性的天然、高效、低毒的黃酮類化合物，在與其它藥物聯(lián)用時，能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多條信號通路（如自噬、凋亡、遷移、氧化應(yīng)激、炎癥等）以及多種相關(guān)的酶活性（如胰脂肪酶、脂肪酸合成酶、甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶、肝酶等），在藥動學(xué)與藥效學(xué)兩個方面發(fā)揮作用，從而在抗腫瘤、抗氧化損傷、抗菌等方面表現(xiàn)出了良好的協(xié)同與輔助效果。

盡管API聯(lián)合用藥在前述研究中展現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢，但目前對API聯(lián)合用藥的作用機(jī)制尚有未明確之處，有關(guān)聯(lián)合用藥中劑量的調(diào)整、給藥方案的改善等方面的研究較少，且相關(guān)文獻(xiàn)多集中于細(xì)胞與動物研究，缺少臨床方面的試驗驗證。因此，應(yīng)進(jìn)一步加深對API聯(lián)合用藥方案的優(yōu)化、創(chuàng)新及臨床應(yīng)用的研究，以充分發(fā)揮API聯(lián)合用藥在疾病治療中的優(yōu)勢，為臨床治療提供安全有效的用藥新方案。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] TANG D，CHEN K，HUANG L，et al. Pharmacokinetic properties and drug interactions of apigenin，a natural flavone[J]. Expert Opin Drug Metab Toxicol，2017，13（2）：323-330.

[ 2 ] WENG L，GUO X，LI Y，et al. Apigenin reverses depression-like behavior induced by chronic corticosterone treatment in mice[J]. Eur J Pharmacol，2016，774：50-54.

[ 3 ] BASIOS N，LAMPROPOULOS P，PAPALOIS A，et al. Apigenin attenuates inflammation in experimentally induced acute pancreatitis-associated lung injury[J]. J Invest Surg，2016，29（3）：121-127.

[ 4 ] CHAN LP，CHOU TH，DING HY，et al. Apigenin induces apoptosis via tumor necrosis factor receptor-and Bcl-2-mediated pathway and enhances susceptibility of head and neck squamous cell carcinoma to 5-fluorouracil and cisplatin[J]. Biochim Biophys Acta，2012，1820（7）：1081-1091.

[ 5 ] AN F，CAO X，QU H，et al. Attenuation of oxidative stress of erythrocytes by the plant-derived flavonoids vitexin and apigenin[J]. Pharmazie，2015，70（11）：724-732.

[ 6 ] 張新娟，左國營，張云玲，等.芹菜素聯(lián)合抗生素的抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（10）：755-758.

[ 7 ] 馬春艷，陳雨微，黃家君，等.大黃素和芹菜素對高血壓大鼠的腎臟保護(hù)及抗氧化作[J].中藥藥理與臨床，2018，34（4）：69-73.

[ 8 ] LIM H，PARK H，KIM HP，et al. Effects of flavonoids on senescence-associated secretory phenotype formation from bleomycin-induced senescence in BJ fibroblasts[J].Biochem Pharmacol，2015，96（4）：337-348.

[ 9 ] GUO X，LIU J，CAI S，et al. Synergistic interactions of apigenin，naringin，quercetin and emodin on inhibition of 3T3-L1 preadipocyte differentiation and pancreas lipase activity[J]. Obes Res Clin Pract，2016，10（3）：327-339.

[10] 徐魏，羅非君.芹菜素生物學(xué)活性及其機(jī)理研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2019，31（10）：1077-1087.

[11] GANTEN TM，HAAS TL，SYKORA J，et al. Enhanced caspase 8 recruitment to and activation at the DISC is critical for sensitisation of human hepatocellular carcinoma cells to TRAIL-induced apoptosis by chemotherapeutic drugs[J]. Cell Death Differ，2004，11（Suppl 1）：S86-S96.

[12] ABBASZADEH H，VALIZADEH A，MAHDAVINIA M，et al. 3-Bromopyruvate potentiates TRAIL-induced apoptosis in human colon cancer cells through a reactive oxygen species- and caspase-dependent mitochondrial pathway[J]. Can J Physiol Pharmacol，2019，97（12）：1176- 1184.

[13] 唐愛瓊，劉杰，劉飛，等.芹菜素增敏TRAIL誘導(dǎo)卵巢癌CoC1細(xì)胞凋亡[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志，2011，39（1）：37-40.

[14] 劉杰，劉飛，夏紅，等.芹菜素通過組成性激活JNK敏化TRAIL誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（25）：3095-3105.

[15] 陳建勇，王聰，王娟，等. MAPK信號通路研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2011，4（1）：32-34.

[16] 蔣迪.芹菜素和TRAIL聯(lián)合應(yīng)用對人胃癌細(xì)胞凋亡的影響[D].衡陽：南華大學(xué)，2010.

[17] OISHI M，IIZUMI Y，TANIGUCHI T，et al. Apigenin sensitizes prostate cancer cells to Apo2L/TRAIL by targeting adenine nucleotide translocase-2[J]. PLoS One，8（2）：e55922.

[18] HORINAKA M，YOSHIDA T，SHIRAISHI T，et al. The dietary flavonoid apigenin sensitizes malignant tumor cells to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing[J]. Mol Cancer Ther，2006，5（4）：945-951.

[19] MAZZARELLA L，GUIDA A，CURIGLIANO G，et al. Cetuximab for treating non-small cell lung cancer[J]. Expert Opin Biol Ther，2018，18（4）：483-493.

[20] HOLUBEC L，POLIVKA J JR，SAFANDA M，et al. The role of cetuximab in the induction of anticancer immune response in colorectal cancer treatment[J]. Anticancer Res，2016，36（9）：4421-4426.

[21] HU WJ，LIU J，ZHONG LK，et al. Apigenin enhances the antitumor effects of cetuximab in nasopharyngeal carcinoma by inhibiting EGFR signaling[J]. Biomed Pharmacother，2018，102：681-688.

[22] JIN X，YANG Q，ZHANG Y，et al. Synergistic apoptotic effects of apigenin TPGS liposomes and tyroservatide：implications for effective treatment of lung cancer[J]. Int J Nanomedicine，2017，12：5109-5118.

[23] 張玲，魏翔，張素梅，等. PMA對4-HPR抑制HepG2細(xì)胞體外遷移的影響[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2019，54（2）：169-173.

[24] 張玲，黃道斌，呂俊，等. N-（4-羥基苯基）維生素甲酰胺抑制人肺腺癌A549細(xì)胞體外遷移機(jī)制[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，49（2）：137-140.

[25] CAO Y，WANG X，XU C，et al. 4-HPR impairs bladder cancer cell migration and invasion by interfering with the Wnt5a/JNK and Wnt5a/MMP-2 signaling pathways[J]. Oncol Lett，2016，12（3）：1833-1839.

[26] MOHAN N，BANIK NL，RAY SK. Combination of N-（4-hydroxyphenyl）retinamide and apigenin suppressed starvation-induced autophagy and promoted apoptosis in malignant neuroblastoma cells[J]. Neurosci Lett，2011，502（1）：24-29.

[27] HU XY，LIANG JY，GUO XJ，et al. 5-fluorouracil combined with apigenin enhances anticancer activity through mitochondrial membrane potential（ΔΨm）-mediated apoptosis in hepatocellular carcinoma[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol，2015，42（2）：146-153.

[28] CHOI EJ，KIM GH. 5-fluorouracil combined with apigenin enhances anticancer activity through induction of apoptosis in human breast cancer MDAMB-453 cells[J]. Oncol Rep，2009，22（6）：1533-1537.

[29] HANAA H，GABALLAH RA，MOHAMED DA，et al.Apigenin potentiates the antitumor activity of 5-FU on solid Ehrlich carcinoma：Crosstalk between apoptotic and JNK-mediated autophagic cell death platforms[J]. Toxicol Appl Pharmacol，2017，316：27-35.

[30] 楊一昆，普紹平，高文桂，等.順鉑的應(yīng)用及鉑族金屬抗癌藥物的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，1999，8（2）：797-800.

[31] FANTINI M，BENVENUTO M，MASUELLI L，et al. In vitro and in vivo antitumoral effects of combinations of polyphenols，or polyphenols and anticancer drugs：perspectives on cancer treatment[J]. Int J Mol Sci，2015，16（5）：9236-9282.

[32] 朱鴻武，謝子英，李炳玲，等.芹菜素對食管鱗狀細(xì)胞癌TE-1細(xì)胞順鉑敏感性的影響及機(jī)制[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2016，13（2）：12-15.

[33] ERDOGAN S，TURKEKUL K，SERTTAS R，et al. The natural flavonoid apigenin sensitizes human CD44+ prostate cancer stem cells to cisplatin therapy[J]. Biomed Pharmacother，2017，88：210-217.

[34] 陳清浦，廖衛(wèi)芳，付春華，等.紫杉醇生物合成途徑中羥化酶的研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報，2016，32（5）：554-564.

[35] 劉曉霞，劉英新，王立燕，等.腫瘤患者應(yīng)用紫杉醇后出現(xiàn)的不良反應(yīng)及護(hù)理[J].中國誤診學(xué)雜志，2011，11（22）：5476-5477.

[36] XU Y，XIN Y，DIAO Y，et al. Synergistic effects of apigenin and paclitaxel on apoptosis of cancer cells[J]. PLoS One，2011，6（12）：e29169.

[37] 李玉琴，施建平.環(huán)氧合酶-2抑制劑在抗結(jié)腸癌中的研究進(jìn)展[J].國際消化病雜志，2019，39（3）：185-188.

[38] OSHIMA M，DINCHUK J，EKARGMAN SL，et al. Suppression of intestinal polyposis in Apc delta716 knockout mice by inhibition of cyclooxygenase 2（COX-2）[J]. Cell，1996，87（5）：803-809.

[39] 劉斌，劉太香，白明，等.芹菜素增強(qiáng)阿司匹林對結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制研究[J].中國腫瘤臨床，2013，40（8）：436-439.

[40] 賴鴻章，張玉平，吳錫龍，等.伊馬替尼聯(lián)合吉西他濱治療非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2019，19（8）：968-969、974.

[41] LEE SH，RYU JK，LEE KY，et al. Enhanced anti-tumor? effect of combination therapy with gemcitabine and apigenin in pancreatic cancer[J]. Cancer Lett，2008，259（1）：39-49.

[42] 沈文狀，董鴻，張林，等.抗CTLA-4抗體聯(lián)合阿霉素治療小鼠乳腺癌的療效及機(jī)制分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015，44（23）：3172-3175.

[43] 茹仁萍，紀(jì)倩，王琦，等.蘿卜硫素對阿霉素誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷保護(hù)作用及其與氧化應(yīng)激關(guān)系的研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2019，36（7）：799-803.

[44] GAO AM，ZHANG XY，HU JN，et al. Apigenin sensitizes hepatocellular carcinoma cells to doxorubic through regulating miR-520b/ATG7 axis[J]. Chem Biol Interact，2017，280：45-50.

[45] 黃燦，何法靜，楊瀟，等.環(huán)磷酰胺所致小鼠肝損傷的動態(tài)變化[J].藥學(xué)學(xué)報，2019，54（6）：1062-1068.

[46] 孫倩.芹菜素聯(lián)合環(huán)磷酰胺對小鼠宮頸癌U14細(xì)胞的抑制作用[J]. 武警后勤學(xué)院學(xué)報，2012，21（12）：964-967.

[47] HUANG C，WEI YX，SHEN MC，et al. Chrysin，abundant in morinda citrifolia fruit water-EtOAc extracts，combined with apigenin synergistically induced apoptosis and inhibited migration in human breast and liver cancer cells[J]. J Agric Food Chem，2016，64（21）：4235-4245.

[48] YANG L，ALLRED KF，DYKES L，et al. Enhanced action of apigenin and naringenin combination on estrogen receptor activation in non-malignant colonocytes：implications on sorghum derived phytoestrogens[J]. Food Funct，2014，6（3）：749-755.

[49] 王毅.羥基芫花素配伍芹菜素體外協(xié)同抗膠質(zhì)瘤作用及其機(jī)制研究[D].大連：大連醫(yī)科大學(xué)：2014.

[50] LEE YM，LEE G，OH TI，et al. Inhibition of glutamine utilization sensitizes lung cancer cells to apigenin-induced apoptosis resulting from metabolic and oxidative stress[J].Int J Oncol，2016，48（1）：399-408.

[51] IVANOV M，MIHAILOVIC-STANOJEVIC N，GRUJIC MILANOVIC J，et al. Losartan improved antioxidant defense，renal function and structure of postischemic hypertensive kidney[J]. PLoS One，2014，9（5）：e96353.

[52] 史婷婷，莊讓笑，周紅萍，等.銀杏酮酯聯(lián)合芹菜素預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響[J].中藥藥理與臨床，2014，30（5）：81-84.

[53] EUMKEB G，CHUKRATHOK S. Synergistic activity and mechanism of action of ceftazidime and apigenin combination against ceftazidime-resistant Enterobacter cloacae[J]. Phytomedicine，2013，20（3/4）：262-269.

[54] 夏翡翡.噬菌體裂解酶LysGH15與芹菜素聯(lián)合應(yīng)用治療金黃色葡萄球菌肺炎的研究[D].吉林：吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，2016.

[55] MA Q，CUI Y，XU S，et al. Synergistic inhibitory effects of acacetin and eleven other flavonoids isolated from Artemisia sacrorum on lipid accumulation in 3T3-L1 cells[J]. J Agric Food Chem，2018，66（49）：12931-12940.

[56] 岳鳳嬌，呂建麗，張莉，等.皮膚利什曼病診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國病原生物學(xué)雜志，2019，14（6）：731-734.

[57] EMILIANO YS，ALMEIDA-AMARAL EE. Efficacy of apigenin and miltefosine combination therapy against experimental cutaneous leishmaniasis[J]. J Nat Prod，2018，81（8）：1910-1913.

[58] WU T，LI H，CHEN J，et al. Apigenin，a novel candidate involving herb-drug interaction（HDI），interacts with organic anion transporter 1（OAT1）[J]. Pharmacol Rep，2017，65（6）：1254-1262.

[59] SATO M，ANDREW L，BRYANT HU，et al. Raloxifene：a selective estrogen receptor modulator[J]. J Bone Miner Met，1994，12（2）：9-20.

[60] CHEN Y，JIA X，CHEN J，et al. The pharmacokinetics of raloxifene and its interaction with apigenin in rat[J]. Molecules，2010，15（11）：8478-8487.

（收稿日期：2020-10-10 修回日期：2021-01-16）

（編輯：羅 瑞）