四川省綿陽市某肉兔養(yǎng)殖場寄生蟲感染情況調(diào)查

（綿陽市動物疫病預(yù)防控制中心，四川綿陽 621000）

綿陽是四川省畜牧業(yè)大市，也是全省重要的生豬、家禽和奶源生產(chǎn)基地，在全省畜牧業(yè)經(jīng)濟中占據(jù)重要地位。自2018 年以來，受非洲豬瘟疫情影響，豬肉長期短缺，由此產(chǎn)生的肉類缺口急需由其他畜禽補位[1-2]。在此背景下，四川省大力發(fā)展養(yǎng)兔業(yè)，家庭兔場普遍擴欄30%～50%[2]。綿陽作為兔養(yǎng)殖大市，年出欄約1 000 萬只。然而，兔易患寄生蟲病[3]，感染后常表現(xiàn)食欲減退、腹瀉、貧血、消瘦、被毛粗亂等癥狀[4-5]，甚至導(dǎo)致種群數(shù)量急劇減少[6]，嚴重威脅和阻礙兔養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

常見的兔寄生蟲主要有球蟲、線蟲、賈第蟲和隱孢子蟲等[7-9]。其中，賈第蟲和隱孢子蟲是常見的人獸共患寄生蟲，寄生于兔等多種動物的小腸，引起宿主腹瀉[10-11]。球蟲是家兔養(yǎng)殖中最常見的也是危害最嚴重的寄生蟲之一，感染率可高達88%[12]。多數(shù)的兔胃腸道寄生蟲病為慢性經(jīng)過，通過損害兔的腸道組織，導(dǎo)致兔飼料利用率低，嚴重影響兔的生產(chǎn)性能，并給養(yǎng)殖人員帶來潛在感染風(fēng)險[13]。

在防控兔寄生蟲病過程中，需要根據(jù)不同寄生蟲病的流行特點和臨床特征來制定對應(yīng)的防治措施。為了解綿陽市規(guī)?；B(yǎng)兔場的寄生蟲感染情況，以便制定高效的防控策略，本研究選擇綿陽市某大型肉兔養(yǎng)殖場進行寄生蟲流行病學(xué)調(diào)查，以期對類似規(guī)模兔場的寄生蟲病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與處理

本次調(diào)查的某養(yǎng)兔場為規(guī)?；B(yǎng)殖基地，養(yǎng)殖規(guī)模約1.5 萬只，兔舍環(huán)境衛(wèi)生管理較好，平時定期驅(qū)蟲。本次調(diào)查采用簡單隨機抽樣方法，設(shè)預(yù)估流行率50%，可接受絕對誤差10%，置信水平95%，使用Win Episcope 2.0 軟件進行樣本量計算，得出本次隨機抽樣所需最低樣本量為96 份。

2019 年5 月，在兔場內(nèi)隨機采集111 份肉兔新鮮糞便樣品，每份30～50 g。采集樣品時，盡量采集糞板中央的新鮮糞便；每采1 份樣品更換1 次手套，并使用一次性塑封袋；采樣范圍覆蓋全場。采樣時，對肉兔的月齡（＜3 月齡、3～6 月齡、＞6 月齡）和性別進行編號記錄，然后將待檢糞便裝在潔凈的塑封袋中帶回實驗室，置于4 ℃的冰箱中保存，待檢。采樣地點現(xiàn)場情況見圖1。

圖1 采樣地兔舍情況

1.2 主要儀器與耗材

CX23 光學(xué)顯微鏡，OLYMPUS 公司產(chǎn)品；HC-TOLL-1 普通藥物天平，購自上海醫(yī)療器械公司；標準麥氏計數(shù)器（10 mm×10 mm×1.5 mm），河南農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室自制。其他儀器和耗材包括，蓋玻片、15 mL 玻璃試管、鋁杯、80 目不銹鋼糞篩、計數(shù)器、移液管等。

1.3 主要試劑

4%的NaOH 溶液：稱取20 g NaOH 固體，倒入裝有480 mL 蒸餾水的燒杯中攪拌均勻待用；飽和鹽水：把食鹽加入沸水鍋內(nèi)，直到食鹽不再溶解出沉淀為止（即1 000 mL沸水中加入約400 g食鹽），待冷卻后溶液有NaCl 晶體析出，即為飽和[14]。

1.4 檢測方法

1.4.1 飽和鹽水漂浮法 取新鮮糞便2 g 于鋁杯中，倒入約占鋁杯體積1/3 的飽和食鹽水，用竹筷攪碎糞便，充分混合均勻后，經(jīng)80 目銅篩網(wǎng)過濾到另一個鋁杯中；將濾液倒入15 mL 玻璃試管內(nèi)，往試管中加飽和鹽水至滿而不溢，然后在試管口輕輕放置蓋玻片，15 min 后取下蓋玻片，放置于載玻片上，于光學(xué)顯微鏡下觀察并識別蟲卵，主要識別絳蟲卵、線蟲卵和球蟲卵囊。

1.4.2 循序水洗沉淀法 取新鮮糞便2 g 于鋁杯中，倒入約占鋁杯體積1/3 的清水，用竹筷攪碎糞便，充分混勻后，經(jīng)80 目銅篩過濾到另一個干凈鋁杯中內(nèi)，加清水至鋁杯口，靜置20 min。倒掉上清液，保留沉淀物，再加滿清水混勻后靜置15 min；再次棄掉上清液，保留沉淀物。重復(fù)上述過程2～3次，直到上清液透明為止。最后棄上清液，用滴管吸取沉淀物，涂于載玻片上，使其形成薄的長方形寬涂片，再置于顯微鏡下檢查并識別蟲卵，重點識別吸蟲卵。

1.5 蟲卵計數(shù)方法

采用麥克馬斯特計數(shù)法。該方法主要計數(shù)相對密度小的蟲卵或卵囊。稱取檢測到球蟲或線蟲的糞便2 g 于燒杯中，加入10 mL 飽和鹽水?dāng)嚿?，再加?0 mL 飽和鹽水，混勻后經(jīng)80 目的不銹鋼糞篩過濾；用移液管把混勻的濾液加入麥氏計數(shù)板的2 個計數(shù)室中，然后把計數(shù)板放在顯微鏡載物臺上靜置1～2 min，對2 個計數(shù)室內(nèi)的蟲卵或卵囊進行鏡檢計數(shù)[15]。按每克糞便蟲卵或卵囊數(shù)量（EPG/OPG）=2 個計數(shù)室內(nèi)的蟲卵或卵囊數(shù)×100，得到每克被檢糞便中的蟲卵或卵囊數(shù)量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel 2010 軟件進行處理和統(tǒng)計，使用SPSS 25.0 軟件進行常規(guī)卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 總體感染情況

本次調(diào)查共采集111 份新鮮肉兔糞便樣品，其中檢出寄生蟲陽性54 份，平均陽性率為48.65%。共檢測出兩大類胃腸道寄生蟲蟲卵或卵囊，分別是球蟲卵囊（圖2）和線蟲卵（圖3），其中球蟲陽性率為47.75%、線蟲為1.80%，混合陽性率為0.90%（表1）。

圖2 球蟲卵囊（400×）

圖3 線蟲卵（400×）

表1 兔糞便寄生蟲檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.2 不同月齡及性別情況

小于3 月齡肉兔的寄生蟲陽性率為95.45%，3～6 月齡為48.89%，大于6 月齡為25.00%（表2）；公肉兔的寄生蟲陽性率為44.00%，母肉兔為33.33%（表3）。

表2 不同月齡兔的糞便寄生蟲檢測結(jié)果統(tǒng)計

表3 不同性別兔的糞便寄生蟲檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.3 檢測陽性強度

經(jīng)麥克馬斯特計數(shù)法計算，54 份陽性兔糞便樣品中，球蟲每克糞便卵囊數(shù)（OPG）平均值為15 760，最高為98 600，最低為100；線蟲每克糞便蟲卵數(shù)（EPG）平均值為800，最高為1 000，最低為200。

表4 兔糞便寄生蟲陽性強度

3 分析與討論

3.1 抽樣及檢測

本次調(diào)查通過系統(tǒng)采樣設(shè)計、隨時更換一次性手套、使用一次性塑封袋收集糞樣、采集糞板中央新鮮糞便、4 ℃冷藏保存等措施，保證了抽樣樣品的質(zhì)量及調(diào)查抽樣結(jié)果的可信性。采用的飽和鹽水漂浮法和循序水沉淀法是傳統(tǒng)的寄生蟲檢測方法，通過在顯微鏡下觀察蟲卵特征即可辨別所感染的寄生蟲種類，較為簡單、直觀，是目前寄生蟲病診斷中廣泛使用的方法[17-18]。

經(jīng)調(diào)查，綿陽市兔養(yǎng)殖主要以存欄量500 只以上的專業(yè)大戶或規(guī)模場為主。其中多數(shù)規(guī)模場與本次調(diào)查的兔場在飼養(yǎng)管理、籠舍設(shè)置、驅(qū)蟲周期等方面相似。因此，由本養(yǎng)殖場的感染情況，可以推測綿陽市兔規(guī)模場的寄生蟲病感染率在50%左右。而家庭養(yǎng)殖戶由于沒有定期驅(qū)蟲和相對較差的飼養(yǎng)環(huán)境可能有更高的感染率[19]。

3.2 寄生蟲感染種類

本次調(diào)查的兔養(yǎng)殖場糞便寄生蟲平均陽性率為48.65%，其中球蟲和線蟲陽性率分別為47.75%和1.80%。相較而言，球蟲陽性率低于近年報道的四川省兔球蟲感染率（61.00%～71.11%）[20-21]，而線蟲陽性率與金兆慶等[22]和Epe 等[23]報道的線蟲感染率相近。球蟲是造成養(yǎng)殖場大面積寄生蟲感染的主要原因，其屬于胞內(nèi)寄生，種兔感染后難以治愈并長期帶蟲，成為隱性傳染源[24]。環(huán)境中的球蟲卵囊在潮濕陰暗的條件下易孢子化，且球蟲卵囊對化學(xué)消毒劑有較強的抵抗作用，因而會污染環(huán)境并難以清除[25]。

3.3 感染風(fēng)險因素

月齡為兔感染寄生蟲的風(fēng)險因素之一。任志軍等[20]、葉勇剛等[21]報道，四川省1～3 月齡幼兔的球蟲感染率及感染強度都明顯高于 4～6 月齡商品兔和 6 月齡以上種兔；吳平山等[8]也報道，各月齡階段的兔均可感染寄生蟲，且1～3 月齡和4～6月齡集中感染；崔平等[26]報道，隨著兔月齡增長，其寄生蟲感染率會降低。本次調(diào)查顯示，小于3 月齡兔的糞便寄生蟲陽性率（95.45%）顯著高于3～6月齡肉兔（48.89%）和大于6 月齡肉兔（25.00%）；而且小于3 月齡患兔大多為重度感染，而大于3 月齡患兔多數(shù)為低強度感染。這可能與隨著月齡增加，兔個體免疫力提高，對寄生蟲有更強的免疫力有關(guān)。因此，兔養(yǎng)殖場應(yīng)加強幼齡兔的飼養(yǎng)管理，定期驅(qū)蟲，只有這樣才能降低寄生蟲感染率，避免損失。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，公肉兔的寄生蟲陽性率為44.00%，母肉兔為33.33%。經(jīng)過卡方檢驗，得到卡方值為0.956，自由度為1，在95%的置信區(qū)間中，該兔場的寄生蟲陽性率與宿主性別不相關(guān)，說明性別不是影響兔感染寄生蟲的主要風(fēng)險因素。

4 結(jié)論

調(diào)查表明：綿陽市兔場寄生蟲感染率較高，以球蟲感染為主；兔胃腸道寄生蟲感染與其月齡密切相關(guān)，幼齡兔感染最為嚴重。因此，建議兔場重視幼齡兔的飼養(yǎng)管理并提前驅(qū)蟲。