比對固定液對冷凍組織病理切片HE染色的質(zhì)量的影響

江門市中心醫(yī)院病理科 （廣東 江門 529000）

內(nèi)容提要： 目的：比對固定液對冷凍組織病理切片HE染色的質(zhì)量的影響。方法：選擇2018年5月～2019年2月本院臨床科室術中進行送檢的800例新鮮組織展開切片觀察。結果：應用丙酮、95%乙醇的單一固定液實施HE染色的切片，其細胞質(zhì)、細胞核的染色效果不好，同時對組織結構的表現(xiàn)也比較模糊。當采用復合固定液實施HE染色的時候，其整體染色效果較好，AFF液染色后的組織結構是相對較為清晰的，細胞核、細胞質(zhì)的染色效果則不盡人意；改良AFF液染色后，其組織結構、細胞核、細胞質(zhì)染色效果也是清晰的。結論：采用復合型固定液切片的病理組織其染色效果具有更加的優(yōu)異性，特別是經(jīng)過改良之后的AAF液，其應用在病理檢查中的固定效果更加的顯著，不但能夠顯著提升病理組織的染色質(zhì)量，也能夠更加準確地進行疾病診斷，給疾病的后續(xù)治療提供了有利的理論基礎。

臨床上冷凍切片在快速病理診斷中具有非常重要作用，然而實際的檢查中冷凍切片質(zhì)量容易受到影響，較為重要的則是冷凍切片固定液的選擇，為了選擇出最佳的固定液，本文選擇了四種固定液展開分析[1]。詳細情況如下所示。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

選擇本院2018年5月～2019年2月臨床科室術中進行送檢的新鮮病理組織為例，合計為800例，具體有862例的惡性病變病理取樣，有118例良性病變的病理取樣，詳細的病變組織取樣囊括了甲狀腺組織取樣，乳腺組織取樣，肺組織取樣，淋巴結組織取樣等。

1.2 方法

在本次研究中，當采樣了新鮮病理組織之后，不能夠直接進行切片，需要應用專業(yè)的病理切片儀器加以操作，從而最大程度的完成病理組織的有效應用。一般情況下，如果新鮮的病理組織需要切片，其選擇的儀器為：德國生產(chǎn)的LeicaCM1950型號恒冷切片機，根據(jù)相應的切片標準展開操作；隨后應該將病理切片需要的、實驗中的固定液準備好，詳細的4種固定液分析如下：①單獨的丙酮固定液；②95%的乙醇固定液；③AAF液加以固定；④改良后的AAF液加以固定。其中，AAF液中包含的成分為：15mL甲醛液體（40%含量），80mL乙醇（95%）溶液，5mL的冰醋酸溶液；改良后AAF液包含的成分則有些差異，即15mL福爾馬林，40mL乙醇溶液（95%），42mL苦味酸飽溶液，乙醇液（95%），3mL冰醋酸溶液以及0.2mL Triton等溶液。上述所有的操作完成之后，則需要OCT冷凍包埋劑操作，把新鮮病理取樣包埋起來，并放置到冷凍切片機之中，需要注意的是：病理組織切片只有被冷凍到合適的硬度，才能夠更好地實施組織切片操作，也能夠更好地加以固定處理，一般把冰凍機箱體溫度調(diào)節(jié)到-18°C～-20°C；對于切片的厚度而言，其應該維持在8μm左右，且每一個標本均都需要實施四次的切片操作，最后呈現(xiàn)出四張有效病理切片，并使用固定液加以固定和實施HE染色操作，并借助顯微鏡實施觀察，將相應的結果記錄下來，從而提高其診斷效果。

1.3 觀察指標

通過顯微鏡觀察切片標本的組織結構、細胞核收縮以及染色情況。

2.結果

在本次研究之中可以得出以下結果：①通過丙酮固定液進行固定的切片，借助顯微鏡觀察的效果不顯著，組織結構、細胞核等均觀察不清楚，即整體的染色效果均不佳，診斷結果也不夠準確。②對于實施95%乙醇固定液的病理切片而言，其通過顯微鏡觀察后，整體的組織結構相對比較清晰，但是依然有細胞核收縮情況、細胞核染色模糊情況發(fā)生，染色效果依然不佳，對臨床確診存在不良影響。③對于實施AFF液加以固定的病理切片而言，其在顯微鏡表現(xiàn)出組織結構較為清晰，然而其細胞核輪廓顯示則不夠理想，總體的染色效果還是不夠顯著，進行臨床確診的理論依據(jù)不夠充足。④實施改良AFF液固定后，可以很清楚看到病理組織和結構，同時也可以看到清晰的細胞核、細胞質(zhì)，染色的顏色也鮮艷有質(zhì)，具有較為明顯的對比效果，可以提高診斷的效果，幫助患者盡快的展開治療操作[2]。

3.討論

冰凍切片的最關鍵點在于快速冷凍，防止冰晶形成，使組織最接近原始狀態(tài)，其二是不同的組織需要不同的切片溫度，但日常工作中，冰凍機難以在短時間內(nèi)升高或者降低到所需切片溫度，因此一般把冰凍機設置到一個比較適合的范圍，使大部分組織能在該溫度范圍內(nèi)切出滿意的冰凍切片，本文所有冰凍切片均在箱體溫度-18°C～-20°C完成。甲狀腺組織取樣完成后，蛋白質(zhì)和細胞核會出現(xiàn)極速改變，切片后不能及時冷凍的話會影響其觀察，即誤認為毛玻璃核，在展開冷凍的時候，根據(jù)經(jīng)驗，其溫度控制在-18°C，可以切出較為滿意的切片，溫度低于-20°C，組織容易發(fā)脆，切片容易出現(xiàn)裂紋和組織碎成粉末狀，嚴重影響后續(xù)操作[3]。對于肺組織而言，其因有豐富的血供、腔隙，極可能會有大量壞死、炎性分泌物現(xiàn)象存在，需在冷凍的期間進一步控制冷凍時間，切片溫度為-18°C即可，低于-20°C同樣會使腫瘤組織出現(xiàn)裂紋，影響切片的觀察結果。乳腺組織在制成冷凍切片的時，應該確保沒有重疊褶皺的情況，同時檢查切片是否在存在裂隙，一旦存在需更換切片，防止影響檢查結果[4]。對于淋巴結組織而言，速凍尤為關鍵，溫度過低會使組織碎裂，修片過深，由于冰晶的過多，會破壞其正常形態(tài)結構，必須保證淋巴結包膜完整切出并沒有重疊皺褶。

病理組織在經(jīng)過切片操作之后，其實施固定的目的則是幫助組織蛋白發(fā)生質(zhì)變，之后讓病理組織以及細胞等可以呈現(xiàn)其最初的形態(tài)，若是切片固定效果不符合標準，則會導致HE染色的時候無法得到最佳的效果，造成病理切片存在不良情況，無法給予患者確診，耽誤其后續(xù)的治療工作。為此對AAF液進行了一定程度的改良操作，主要的操作便是把苦味酸飽、95%乙醇液、Triton均加入在AFF液之中，而苦味酸屬于酸性固定劑的一種，可以實現(xiàn)蛋白質(zhì)有效沉淀，且收縮效果比較明顯。應用丙酮、95%乙醇的單一固定液實施HE染色的切片，其細胞質(zhì)、細胞核的染色效果不好，同時對組織結構表現(xiàn)也比較模糊，改良AFF液染色后，其組織結構、細胞核、細胞質(zhì)染色效果也是清晰的。

綜上所述，對于冷凍切片檢查工作而言，其中固定液的選擇是非常重要的環(huán)節(jié)，主要是對染色效果會產(chǎn)生直接性的影響，經(jīng)過改良之后的AAF液能夠最大限度的固定冷凍組織病理切片，有助于準確地進行疾病診斷。