酶標儀檢測技術(shù)應(yīng)用分析

張國斌 沈陽市疾病預(yù)防控制中心 （遼寧 沈陽 110032）

內(nèi)容提要：目的：分析酶標儀檢測技術(shù)在血液樣本檢驗中的應(yīng)用價值。方法：依照臨床中化學(xué)檢驗操作規(guī)程，設(shè)計出與之相對應(yīng)的工作程序。創(chuàng)建從采集血液、測定直至打印結(jié)果全部流程，探究酶標儀檢測技術(shù)在血液樣本檢驗中的應(yīng)用價值。結(jié)果：在相關(guān)樣本病毒活性增加到160KU之后，檢測結(jié)果表現(xiàn)出非線性關(guān)系。在此刻應(yīng)用等滲鹽水把樣本稀釋處理再行檢測。在10～90min，穩(wěn)定性較強。在顯色10min之后開展比色工作較為理想。血清樣本批間CV為6.91%、5.62%以及5.11%，批內(nèi)CV具體為4.51%、4.92%以及4.21%。標本回收率為93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值為97.61%。結(jié)論：在開展血液樣本檢驗過程之中，利用酶標儀加以測定，能夠取得滿意成效。此法有著用時短、方便、簡單、精準性高、穩(wěn)定性強、進樣微量等優(yōu)點。可在根本上提升診斷效率，減少檢驗成本。

梅毒以及艾滋病在臨床中較為常見。上述兩類疾病均以性傳播為主要途徑。在患者發(fā)病之后，倘若未能在第一時間為其開展行之有效的治療，不但會誘發(fā)其他種類疾病，如果情況嚴重還會威脅受試者生命安全。

全自動生化分析設(shè)備于臨床檢驗中得以廣泛應(yīng)用[1]。這種檢驗方法效果顯著，能夠?qū)崿F(xiàn)微量、快速分析。但值得注意的是，此類方式針對于設(shè)備的要求偏高，以當前水平來看，其在中國基礎(chǔ)醫(yī)院推廣尚有難度?，F(xiàn)如今，酶標儀于血液檢驗中取得了廣泛應(yīng)用[2]。這種方法有著效果精準、出具結(jié)果快速、微量等優(yōu)點，可在一定程度上提升血液檢驗工作效率，結(jié)合實際情況，本文全面探究酶標儀檢測技術(shù)在血液檢驗中的應(yīng)用價值情況，現(xiàn)報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本實驗所使用的儀器為DG-3022A型酶標儀、規(guī)格為0.2mL聚苯乙烯離心管以及酶標板、RA-XT全自動生化分析設(shè)備、微量加樣器、edp-2自動加樣器與SLT400SF酶標儀。

1.2 方法

1.2.1 實驗準備

工作人員結(jié)合相關(guān)要求，把SLT400SF酶標儀編制為符合要求的程序。利用編制好程序分析光度值以及測定值，對其加以打印。在此同時，DG-3022A型酶標儀設(shè)備應(yīng)當依照實驗測定的具體內(nèi)容有效校準波長，開展比色測定工作。朝向?qū)崿F(xiàn)擇取的酶標儀內(nèi)加入到空白試劑，于酶標儀上實施比色。針對于各個孔的吸光度值進行打印。對于1edp-2自動加樣器以及微量加樣器進行校準處理。在根本上確保加樣器的變異系數(shù)在1%以下，準確度誤差在±1%以下。

1.2.2 血液樣本收集方式

本實驗所需要的血液樣本量較小。通常需要在受試者的手指、耳垂等末梢位置，以常規(guī)方法采血，即可完成血液收集工作。后利用微量吸管吸住血液，并將血樣本放入到規(guī)格為0.2mL離心管之內(nèi)。等到血液樣本完全凝固以后，開展離心工作，時間為5min，速率設(shè)定為3000r/min。將酶標本A1、A2視為空白對照組，A3以及A4視為標準孔。每個標準孔均屬雙控。剩余孔視為測量孔。測定總量設(shè)定為300μL。有關(guān)操作步驟以及程序應(yīng)當嚴格遵守試劑盒以及儀器中的指南予以執(zhí)行。

2.結(jié)果

2.1 線性范圍

利用等滲鹽水，將活性度高的艾滋病與梅毒血清樣本視為試驗標本。對其線性范圍測定。結(jié)果表明：在相關(guān)樣本病毒活性增加到160KU之后，檢測結(jié)果表現(xiàn)出非線性關(guān)系。在此刻應(yīng)用等滲鹽水把樣本稀釋處理再行檢測。

2.2 穩(wěn)定性實驗

選擇一份血清樣本測定艾滋病以及梅毒生成量情況。將其加入到濃度為0.4mmol/L NaOH顯色處理，之后于不同的時間點開展比色工作。具體為5min、10min、15min、30min、60min、90min以及120min。結(jié)果表明：在10～90min，穩(wěn)定性較強。在顯色10min之后開展比色工作較為理想。

2.3 精密度測定

為了在根本上確保設(shè)備于血液檢驗過程中具有針對性。本實驗利用艾滋病以及梅毒視為樣本，抽取共計3份血清。利用該法實施批間以及批內(nèi)重復(fù)試驗。結(jié)果證實：批間CV為6.91%、5.62%以及5.11%，批內(nèi)CV具體為4.51%、4.92%以及4.21%。

2.4 回收率

于共計3個已然被確定為艾滋病以及梅毒單位的血清內(nèi)加入艾滋病病毒以及梅毒病毒。經(jīng)混合之后依照艾滋病以及梅毒的檢驗方法完成測定工作。結(jié)果證實：標本回收率為93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值為97.61%。

3.討論

早在上世紀70年代初，酶聯(lián)吸附免疫實驗就已出臺。這種方法主要以酶免疫組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展而成?，F(xiàn)如今，在我國血站臨床實驗室工作之中酶聯(lián)免疫吸附試驗醫(yī)院成為了重要的免疫測定技術(shù)之一。因為絕大多數(shù)ELISA最終都要實施比色測定，這也令酶標儀成為了ELISA測定的主要工具[3]。

酶標儀和變相光電比色計以及分光光度計差異并不大。酶標儀和其余幾種設(shè)備的運行原理以及構(gòu)造基本相同。其主要經(jīng)過單色器光源燈或者濾光片所發(fā)出的光波生成單色光，就此進入到微孔板內(nèi)待測樣本。在進行測定工作中，有一部分帶色光被樣本完全吸收、而另一部分則透過樣本返回到光電檢測設(shè)備之內(nèi)。酶標儀可以將強度不一的穿透光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，后?jīng)電信號處理錄入到電腦之中，開展數(shù)據(jù)分析計算處理工作[4]。經(jīng)由打印機輸出結(jié)果。于計算機的精力控制之下，酶標儀能夠?qū)崿F(xiàn)自動基因檢測[5]。利用電路控制機械驅(qū)動結(jié)構(gòu)Y方向以及X方向運動，最終實現(xiàn)背孔板移動。其余的酶標儀檢測微孔板則通過手工法完成移動。其在一定程度上節(jié)省了X方向以及Y方向機械驅(qū)動以及控制電路過程，進而令設(shè)備實現(xiàn)簡化。

本組實驗研究結(jié)果證實：以酶標儀精密比色系統(tǒng)和相關(guān)設(shè)備軟件為基礎(chǔ)，加上一些較為簡單的附件。結(jié)合具體的項目檢驗程序，參照中國現(xiàn)行臨床檢驗操作方式，按照相關(guān)比例縮小處理，最終形成了采血檢測直至打印結(jié)果的整體工作流程。

在本次實驗內(nèi)：為了在根本上確保酶標儀與血液樣本檢驗中的針對性，將艾滋病以及梅毒為例子，分別擇取血清利用本法開展批間以及批內(nèi)重復(fù)試驗。在此其中，批間CV為6.91%、5.62%以及5.11%，批內(nèi)CV具體為4.51%、4.92%以及4.21%。

另外，在本實驗中利用了等滲鹽水將活性度高的艾滋病、梅毒血清視為樣本。對具體的線性范圍進行測定分析。結(jié)果表明：在病毒活性提高到160KU之后，檢測結(jié)果表現(xiàn)出非線性關(guān)系。在此刻應(yīng)利用等滲鹽水稀釋樣本以后再行檢測。

值得說明的是：酶標儀能夠?qū)崿F(xiàn)一機多用。其既可以進行多類化學(xué)檢驗、也可以進行免疫學(xué)檢驗。其有著試劑應(yīng)用量少、微量采血、測試穩(wěn)定等特征。在本實驗內(nèi)，針對于已經(jīng)確定為艾滋病、梅毒單位的血清內(nèi)加入了艾滋病和梅毒病毒，后依照具體的方法完成測定。結(jié)果證實：標本回收率為93.41%、97.66%以及102.02%，回收率均值為97.61%。

從酶標儀與比色法于血清三酰甘油以及膽固醇檢測中的應(yīng)用方面來看，主要為：總膽固醇以及血清三酰甘油的診斷方式可以被分為酶法、化學(xué)法以及色譜法。化學(xué)法的技術(shù)含量比較高，這種檢驗方式操作復(fù)雜，針對于儀器設(shè)備要求相當高。從現(xiàn)階段而言，將此類方式在臨床中廣泛應(yīng)用比較困難；色譜法與參照物質(zhì)準確制備過程中有著比較高的應(yīng)用價值。但不容忽視的是，色譜法樣本處理步驟相當復(fù)雜且檢測費用昂貴，這也在一定程度上限制了色譜法的普及?，F(xiàn)如今，臨床對于血清總膽固醇以及血清三酰甘油一般應(yīng)用酶法實現(xiàn)檢測。這種檢測方法的優(yōu)勢在于精準度高、特異性強、簡單方便。酶標儀比色法測定又被分成全自動法、半自動化和手工法三類。相對而言，手工法的檢測成本比較高。且在開展該項實驗過程中，需要使用很多試劑。自動化以及半自動化針對儀器設(shè)備要求較高，其在基層醫(yī)院內(nèi)普及起來比較困難。有文獻證實：酶標儀比色法測定血清內(nèi)總膽固醇以及三酰甘油所取得的精度和全自動生化設(shè)備檢測精度基本相同。應(yīng)用上述方法所取得的結(jié)果都在CLIA'88所允許的范疇之中。

有文獻分析了酶標儀于細菌溶液濃度檢測中的應(yīng)用價值。其指出：細菌溶液濃度測定針對微生物酵解過程之中控制工藝來講意義重大[6]。以往所使用的細菌溶液濃度檢測方式包含平板計數(shù)法、血球計數(shù)法、比濁法等。這些方法的工作量比較重，誤差精度比較低，很難取得實時檢測的根本性要求。而分光光度法測定細菌容易濃度水平有著精準度強、操作簡單等優(yōu)勢。因而其在實際工作中在廣泛應(yīng)用。但不容忽視的是，這種檢測方法也有著耗費時間長、操作繁瑣等不良問題。酶標儀測定細菌溶液濃度水平的原理和分光光度法這原理相差不大。以上方式均有著檢驗結(jié)果精準度高、操作簡單等優(yōu)點。另外值得說明的是：酶標儀檢測法能夠?qū)崿F(xiàn)大批量操作。因而在根本上提升了細菌溶液濃度的檢測效率水平。另有文獻全面分析了大腸桿菌在發(fā)酵時分光光度法與酶標儀分別測定菌液濃度的結(jié)果情況，表明以上兩類方式有著一致的檢測精度水平。但和分光光度法相比，酶標儀法能夠單次處理多個樣本。應(yīng)用此法開展檢測工作，可以在很大程度上提升檢驗人員的工作效率水平[7]。

從酶聯(lián)免疫吸附法應(yīng)用于梅毒檢驗中的情況來看，主要為：現(xiàn)如今在我國臨床中開展梅毒檢驗時，一般應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法完成該項工作。經(jīng)此法開展檢驗可取得滿意效果。有實驗擇取共計500例梅毒樣本視為研究對象。分別為其實施甲苯胺紅非加熱血清實驗以及酶聯(lián)免疫吸附法實驗。結(jié)果表明：相較于甲苯胺紅不加熱血清實驗所得出的結(jié)果，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法所得出的結(jié)果陽性率明顯更高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。且不容忽視的是，酶聯(lián)免疫吸附試驗所出具的結(jié)果陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、特異性以及敏感性均比甲苯胺紅不加熱血清實驗要高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。相關(guān)工作人員在開展梅毒檢驗工作過程之中，使用酶聯(lián)免疫吸附法完成這項工作，能夠?qū)崿F(xiàn)大樣本數(shù)據(jù)篩查[8,9]。

就酶聯(lián)免疫吸附實驗法丙型肝炎病毒抗體檢測中的應(yīng)用方面來看，主要為：當前中國臨床抗丙型肝炎病毒檢測試劑一般使用酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒。而這種試劑盒的質(zhì)量情況直接對丙型肝炎病毒檢出概率和患者的輸血安全造成影響。現(xiàn)如今，隨著中國酶聯(lián)免疫吸附實驗試劑盒生產(chǎn)技術(shù)的不斷提升，使用第三代產(chǎn)品有著比較好的靈敏性以及特異性。有文獻研究證實：針對以往臨床所使用的膠體金快速吸附法來講，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗開展丙型肝炎病毒抗體測定，所出具的陽性率明顯更高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05?？梢赃@樣講，現(xiàn)如今酶標儀已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到檢測細菌溶液濃度水平、血清三酰甘油以及血清總膽固醇、梅毒丙型肝炎病毒抗體檢測之中。且取得了滿意效果。相信隨著日后有關(guān)技術(shù)的不斷進展，酶標儀一定會在更多的領(lǐng)域檢測中體現(xiàn)出良好作用[10]。

總而言之，在開展血液樣本檢驗過程之中，利用酶標儀加以測定，能夠取得滿意成效。此法有著用時短、方便、簡單、精準性高、穩(wěn)定性強、進樣微量等優(yōu)點?？稍诟旧咸嵘\斷效率，減少檢驗成本。