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    羊奶粉生產(chǎn)中金黃色葡萄球菌分離鑒定及其分子特性和耐藥性檢測

    2021-03-31 02:01:28張鵬飛付雪婷趙春花劉心雨寇明瑩葛武鵬
    食品科學(xué) 2021年6期
    關(guān)鍵詞:腸毒素乳粉金黃色

    張鵬飛,付雪婷,趙春花,劉心雨,張 杰,張 萌,寇明瑩,葛武鵬,王 新

    (西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,陜西 楊凌 712100)

    金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種人畜共患的致病菌,可引發(fā)人和動物的中毒和感染。近年來由金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒(S. aureusfood poisoning,SFP)事件屢見不鮮,主要是人們食用了污染金黃色葡萄球菌腸毒素的食物[1]。研究表明腸毒素由一組熱穩(wěn)定性的蛋白質(zhì)組成,在100 ℃煮沸30 min后仍然具有生物活性和免疫活性[2]。目前根據(jù)腸毒素的催吐性,將金黃色葡萄球菌腸毒素劃分為腸毒素和類腸毒素[3-5]。在腸毒素/類腸毒素中,葡萄球菌腸毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)被認(rèn)為是SFP暴發(fā)的主要原因,其次是葡萄球菌腸毒素D(staphylococcal enterotoxin D,SED)、葡萄球菌腸毒素C(staphylococcal enterotoxin C,SEC)、葡萄球菌腸毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)和葡萄球菌腸毒素E(staphylococcal enterotoxin E,SEE)[6]。

    近年來,羊奶粉作為一種新興的奶粉品種,規(guī)模在不斷擴(kuò)大。羊奶是乳制品中最接近母乳、營養(yǎng)成分最全、最易被人體吸收的奶品,常作為嬰幼兒配方奶粉的原料[1,7]。有研究報(bào)道,一些金黃色葡萄球菌存在于嬰幼兒配方奶粉中[1,8]。雖然羊奶粉在加工生產(chǎn)過程中,都會經(jīng)過巴氏殺菌殺死金黃色葡萄球菌等有害微生物,金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素仍可以導(dǎo)致人類食源性疾病[9-10]。目前,對金黃色葡萄球菌在羊乳到乳制品生產(chǎn)鏈上污染情況的研究還比較少。了解羊乳加工到成品這一生產(chǎn)環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌的污染情況,可以有效阻止其對乳制品的污染。

    為了解羊奶粉在不同加工環(huán)節(jié)中受金黃色葡萄球菌的污染情況,實(shí)驗(yàn)室已于2012—2013年對某4 個奶廠的不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行樣本的收集,結(jié)果發(fā)現(xiàn)4 個奶廠不同環(huán)節(jié)都存在一定的污染,且主要集中在罐奶、加工設(shè)備、加工人員和落地粉[10]。為進(jìn)一步探明羊奶廠加工過程中受金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié),本研究于2016年再次對其中一家羊奶粉加工廠不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行金黃色葡萄球菌污染調(diào)查,并對分離菌株進(jìn)行毒素基因、耐藥性及葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)、多位點(diǎn)序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和脈沖場凝膠電泳(pulsed field gel electrophpresis,PFGE)分型檢測。通過了解不同環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌的污染情況和菌株的耐藥性及分子特征,旨在確定金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及菌株特征,從而為有效防治羊奶粉加工過程中金黃色葡萄球菌污染提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 樣本來源

    為了解羊奶粉加工過程中金黃色葡萄球菌的污染情況,隨機(jī)選取了一家羊奶粉加工廠進(jìn)行樣本的收集。其中,樣本的收集包括5 部分,分別為罐奶、加工設(shè)備、落地粉、加工人員以及成品。此次共采集樣本112 份,其中罐奶23 份,加工設(shè)備35 份,加工人員10 份,落地粉29 份和成品15 份。

    1.1.2 試劑

    胰蛋白胨大豆瓊脂(tryptic soy agar,TSA)、胰蛋白胨大豆肉湯(tryptic soy broth,TSB)、甘露醇氯化鈉瓊脂、Baird-Parker(BP)基礎(chǔ)培養(yǎng)基、亞碲酸鹽卵黃增菌液、緩沖蛋白胨水(buffered peptone water,BPW)、7.5%氯化鈉肉湯、Mueller-Hinton瓊脂(Mueller-Hinton agar,MHA) 北京陸橋技術(shù)股份有限責(zé)任公司;Taq酶、Buffer(Mg2+-)、dNTP、MgCl2大連寶生物(TaKaRa)公司;藥敏實(shí)驗(yàn)16 種待測抗生素 北京索萊寶科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    移液槍、高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增儀、凝膠成像儀 美國伯樂公司;超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;恒溫培養(yǎng)振蕩搖床 上海智成分析儀器制造有限公司;超純水機(jī) 四川優(yōu)普超純科技術(shù)有限公司;隔水式恒溫培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;高壓滅菌鍋 上海申安高壓儀器設(shè)備有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品的采集

    1.3.1.1 粉狀及液態(tài)樣本的采集

    參照GB 4789.10—2016《食品微生物檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》方法進(jìn)行。將收集的樣品置于無菌袋中并記錄樣品相關(guān)信息,低溫運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室,其間隔不超過4 h。

    1.3.1.2 加工設(shè)備及加工人員樣本的采集

    涂抹樣品的采集和處理參照王倩寧等[11]方法。用無菌棉簽涂抹加工設(shè)備表面和加工人員手部或鞋子表面,將涂抹樣置于裝有30 mL新鮮BPW培養(yǎng)液的離心管中,并對涂抹區(qū)域進(jìn)行消毒處理,防止微生物滋生。

    1.3.2 菌株的分離與鑒定

    參照Wang Xin等[1]方法對樣本中金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離鑒定。對于液態(tài)或固態(tài)樣本,稱取25 g液體或者粉末樣本于225 mL無菌BPW培養(yǎng)液中;涂抹樣本不做處理,然后將盛有樣本的BPW培養(yǎng)液至于恒溫培養(yǎng)振蕩搖床37 ℃、150 r/min培養(yǎng)18~24 h。將富集后的過夜培養(yǎng)液按照1∶10接種到30 mL 7.5%氯化鈉肉湯中,37 ℃、150 r/min培養(yǎng)24 h。接著將培養(yǎng)后的菌液用接種環(huán)三線劃法接種到BP平板上,37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取可疑菌落接種在甘露醇平板中,做進(jìn)一步鑒定。最后挑取甘露醇變色平板單菌落純化在TSA平板37 ℃培養(yǎng)18~24 h。對純化后的菌落用煮沸法制得DNA模板,并用PCR擴(kuò)增nuc基因進(jìn)行最后一步驗(yàn)證,nuc陽性的菌株被確定為金黃色葡萄球菌。將nuc基因陽性的所有菌株用棉簽涮于50%的TSB-甘油管中,于-80 ℃冰箱保存。

    1.3.3 毒素基因檢測

    運(yùn)用PCR技術(shù)對所有的菌株進(jìn)行23 種毒素基因檢測。其中腸毒素基因21 種,包括:5 種經(jīng)典腸毒素基因(sea、seb、sec、sed和see)和16 種新型腸毒素基因(seg、seh、sei、sej、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、ser、ses、set、seu和sev);殺白細(xì)胞毒素基因(pvl)和中毒休克綜合征毒素基因(tsst-1)。

    1.3.4 耐藥性檢測

    根據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(Clinical and Laboratory Standard Institute,CLSI)推薦的瓊脂稀釋法,對分離到的6 株菌進(jìn)行16 種常用抗菌藥物的耐藥性測定,并在37 ℃培養(yǎng)18~24 h后評估結(jié)果。16 種常用抗生素及最低抑菌濃度為:青霉素(penicillin,PEN,0.25 μg/mL)、氨芐西林(ampicillin,AMP,0.5 μg/mL)、苯唑西林(oxacillin,OXA,4 μg/mL)、紅霉素(erythromycin,ERY,8 μg/mL)、四環(huán)素(tetracyclines,TET,16 μg/mL)、頭孢西?。╟efoxitin,F(xiàn)OX,8 μg/mL)、頭孢哌酮(cefoperazone,F(xiàn)OP,64 μg/mL)、氯霉素(chloramphenicol,CHL,32 μg/mL)、慶大霉素(gentamicin,GEN,16 μg/mL)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin,CIP,4 μg/mL)、利福平(rifampin,RIF,4 μg/mL)、萬古霉素(vancomycin,VAN,16 μg/mL)、阿米卡星(amikacin,AMK,64 μg/mL)、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑(trimethoprim/sulfamethoxazole,T/S,4/76 μg/mL)、阿莫西林/克拉維酸(amoxicillin/clavulanic acid,A/C,8/4 μg/mL)和利奈唑胺(linezolid,LZD,8 μg/mL)。藥敏實(shí)驗(yàn)質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 29213和大腸桿菌ATCC 25922。此外,運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增mecA基因判斷菌株是否為“超級耐藥細(xì)菌”——耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantS. aureus,MRSA)。

    1.3.5 分子分型

    1.3.5.1 SPA分型

    運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增spa基因,并將擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京奧科鼎盛生物科技有限公司進(jìn)行測序。然后將測序結(jié)果進(jìn)行處理,在線提交至分析網(wǎng)站http://spaserver.ridom.de進(jìn)行分析,以此確定SPA類型。

    1.3.5.2 MLST分型

    運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增7 對管家基因,并進(jìn)行測序,將測序結(jié)果提交至MLST數(shù)據(jù)分析網(wǎng)站(http://www.MLST.net)進(jìn)行分析,得到每個管家基因的等位基因譜,再遞交至該網(wǎng)站,最終可獲得每個菌株的ST型。

    1.3.5.3 PFGE分型

    參照王新等[12]方法對分離株進(jìn)行PFGE分型,分型中以Salmonella braenderupH9812為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株,以SmaI和XbaI為內(nèi)切酶分別對金黃色葡萄球菌和H9812進(jìn)行酶切,采用BioMerics-3.00軟件進(jìn)行聚類分析。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及圖表繪制

    所有數(shù)據(jù)采用Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,并運(yùn)用Word 2003繪制三線表。PFGE聚類圖采用BioMerics-3.00軟件進(jìn)行聚類分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 金黃色葡萄球菌分離情況

    對112 份樣品進(jìn)行選擇培養(yǎng)和nuc基因鑒定,發(fā)現(xiàn)6 份樣品被金黃色葡萄球菌污染,污染率為5.4%(6/112)。每份陽性樣品分別分離出1 株金黃色葡萄球菌,其中1 株(4.3%,1/23)分離于罐奶,2 株(5.7%,2/35)分離于加工設(shè)備,2 株(20.0%,2/10)分離于加工人員,1 株(3.4%,1/29)分離于落地粉,結(jié)果如表1所示。

    表 1 不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌的流行情況Table 1 Prevalence of S. aureus in different production stages

    2.2 菌株毒素基因攜帶情況

    表 2 金黃色葡萄球菌毒素基因、耐藥性及mecA檢測情況Table 2 Virulence genes, antimicrobial susceptibility and mecA gene of S. aureus strains

    對23 種毒素基因進(jìn)行檢測,結(jié)果如表2所示。所有的菌株至少攜帶1 種毒素基因,包括sea、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej、sek、sem、seo、seq、ser和pvl基因。其中pvl基因的檢出率最高為100.0%(6/6);其次為sea、sec、see、seh、sek和seq50.0%(3/6),seg、sej和ser33.3%(2/6),sed、sei、sem和seo16.7%(1/6);此外8 個腸毒素基因(seb、sel、sen、sep、ses、set、seu和sev)和中毒休克綜合征毒素基因(tsst-1)沒有檢出。從23 種毒素基因的檢出情況看,菌株攜帶殺白細(xì)胞素基因(pvl)比率較高,為100.0%(6/6),其次攜帶經(jīng)典腸毒素基因的比率為33.3%(10/30)和攜帶新型腸毒素基因的比率為18.8%(18/96)。此外,在本研究中6 株金黃色葡萄球菌共有4 種不同的毒素基因譜,每株菌株攜帶1~7 種毒素基因不等,其中最常見的基因譜是sea-sec-see-seh-sek-seqpvl50.0%(3/6)。綜上結(jié)果表明,此次羊奶廠分離的金黃色葡萄球菌都攜帶較多的毒素基因,且經(jīng)典腸毒素基因的攜帶率較高,不僅增加了羊奶粉加工污染的概率,而且還會加重對嬰幼兒健康的威脅。

    2.3 菌株耐藥情況

    如表2所示,所有的菌株都表現(xiàn)為多重耐藥,都至少耐3 種抗生素。其中,對AMP、FOP、T/S和PEN的耐藥性最為普遍,耐藥率達(dá)100.0%(6/6),其次對ERY和A/C的耐藥率為83.3%(5/6),對TET的耐藥率為50.0%(3/6)和對GEN的耐藥率為16.7%(1/6)。所有菌株均對OXA、FOX、CHL、CIP、RIF、VAN、AMK和LZD敏感。在本研究中6 株分離株共有4 種不同的耐藥譜,其中最常見的耐藥譜是AMP-ERY-TET-FOP-T/S-A/C-PEN,檢出率為50.0%(3/6)。此外,所有的菌株mecA基因檢測都為陰性。

    2.4 分子分型

    圖 1 6 株金黃色葡萄球菌PFGE、SPA、MLST和PT分型Fig. 1 Dendrograms of PFGE, SPA, MLST and PT typing for the six S. aureus strains

    對所有的分離株進(jìn)行SPA、MLST和PFGE分型,結(jié)果如圖1所示。6 株分離株共有4 種SPA分型和3 種MLST分型。對于SPA分型,主導(dǎo)分子型為t127 50.0%(3/6),其次為t002、t548和t189 16.7%(1/6)。對于MLST分型,主導(dǎo)分子型為ST1 50.0%(3/6),其次為ST5 33.3%(2/6)以及ST188為16.7%(1/6)。6 株分離株P(guān)FGE分型結(jié)果發(fā)現(xiàn),所有的菌株均能被SmaI切開,共分為4 個脈沖型(pulsotypes,PT)(A、B、C和D),當(dāng)使用90.01%的相似性聚簇時,可分為3 個不同的簇(I、II和III簇)。其中,2 株來源于加工設(shè)備和1 株來源于落地粉的ST1-t127菌株在相同的簇中且具有相同的PT。此外,來源于加工人員的2 株菌在相同的簇中,但PT不同。

    3 討 論

    隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高,越來越多的人解決溫飽之余,更注重產(chǎn)品的營養(yǎng)價值。羊奶以豐富的營養(yǎng)及不含過敏源,深受人們的喜愛[13]。在奶山羊飼養(yǎng)過程中,乳房炎是奶山羊疾病中發(fā)病率最高、影響范圍最廣的疾病之一,而金黃色葡萄球菌是引起奶山羊乳房感染的主要病原微生物之一[14]。被金黃色葡萄球菌感染引發(fā)乳房炎的奶山羊,在擠奶時很有可能將金黃色葡萄球菌帶入羊奶中,進(jìn)而增加了羊乳制品中金黃色葡萄球菌的污染。目前,對羊乳粉加工環(huán)節(jié)中金黃色葡萄球菌污染狀況鮮有報(bào)道。

    本研究結(jié)果表明羊奶粉加工環(huán)節(jié)受金黃色葡萄球菌污染率較低(5.4%,6/112),這與實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果一致(7.2%,61/848)[10],說明羊奶粉加工過程中長期存在金黃色葡萄球菌污染的情況。雖然分離率較低,不能忽視金黃色葡萄球菌可能通過生產(chǎn)鏈進(jìn)行傳播的可能。此外,本研究從罐奶、加工設(shè)備、加工人員和落地粉樣本中分離到金黃色葡萄球菌,該結(jié)果與Xing Xiaonan[10]和Papadopoulos[15]等報(bào)道比較一致,表明這四大環(huán)節(jié)是國內(nèi)外在乳粉加工過程中被金黃色葡萄球菌污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。眾所周知,乳粉在加工過程中都會采用巴氏殺菌殺死有害微生物,本研究在乳粉成品中也未檢測到金黃色葡萄球菌,表明巴氏殺菌可以有效殺死有害微生物,但不能有效滅活金黃色葡萄球菌分泌的一些耐熱毒素[16]。因此,應(yīng)該加強(qiáng)乳制品中耐熱毒素(如腸毒素等)的檢測,可以減少金黃色葡萄球菌引發(fā)食物中毒的風(fēng)險。

    對分離株進(jìn)行毒素基因檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)較多金黃色葡萄球菌攜帶1 個或多個腸毒素基因(83.3%),這一比例高于實(shí)驗(yàn)室之前的研究(63.2%,38/61)[10]。有研究報(bào)道,sea單獨(dú)或與其他葡萄球菌腸毒素基因一起,是引發(fā)食物中毒的主要原因,其次是sed、sec、seb和see[6]。在本研究中,經(jīng)典腸毒素基因sea、sec和see(50.0%)最常被檢測到,其次是sed(16.7%)。本研究還發(fā)現(xiàn)經(jīng)典腸毒素基因sea、sec和see在同一株菌株中被檢測到,且這些菌株具有相同的分子型(ST1-t127)。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)攜帶sea基因的菌株一般均攜帶see基因[17],本研究結(jié)果與前期研究相似。但不同的是本研究中攜帶sea和see的菌株同時也攜帶sec基因,同時攜帶3 種經(jīng)典腸毒素基因的菌株的報(bào)道還比較少。此外,也有研究報(bào)道稱sec是羊源金黃色葡萄球菌中最常見的腸毒素基因[18-19],本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。在中國,攜帶經(jīng)典腸毒素基因的菌株大多與葡萄球菌食物中毒事件相關(guān),本研究從羊奶粉加工環(huán)節(jié)中分離出的所有菌株中,只有1 株分離株不攜帶任何經(jīng)典腸毒素基因,因此有必要對生產(chǎn)設(shè)備及生產(chǎn)環(huán)境做深度清潔,減少攜帶毒素基因的金黃色葡萄球菌在生產(chǎn)環(huán)境中的長期定植,進(jìn)而減少對乳粉原料的污染。目前,已經(jīng)證明腸毒素和類腸毒素基因可以在移動遺傳元件上編碼和傳播[20]。如sed和sej基因通常同時位于質(zhì)粒pIB485上[21],這與本研究的結(jié)果一致,在加工人員樣本中分離到的ST5-t548菌株同時攜帶這2 種基因。除此之外,在加工人員樣本中還發(fā)現(xiàn)1 株攜帶不完整egc基因簇基因(seg-sei-sem-seo)的菌株。因此,建議不僅要重視產(chǎn)經(jīng)典腸毒素菌株造成的污染,而且要重視新型腸毒素對乳粉的污染[22-24]。加工人員與工廠環(huán)境來源的菌株攜帶毒素基因情況不同,說明工廠環(huán)境的菌株來源比較廣泛,需要進(jìn)一步對工廠環(huán)境來源菌株進(jìn)行溯源研究。在本研究中還發(fā)現(xiàn)所有的分離株均攜帶pvl基因,研究結(jié)果高于其他報(bào)道[12,25]。有報(bào)道稱,pvl與人類感染和山羊乳腺炎有關(guān)[26-27]。因此及時對感染乳房炎的產(chǎn)奶羊進(jìn)行治療或淘汰可以從根源上減少羊奶的污染。大量研究發(fā)現(xiàn),在中國pvl基因與社區(qū)獲得性MRSA(community-associated MRSA,CA-MRSA)相關(guān)性較高,攜帶pvl基因的CAMRSA感染性更強(qiáng)[28]。本研究沒有檢測到mecA陽性的菌株,但要防止耐藥基因的轉(zhuǎn)移,一旦在生產(chǎn)環(huán)節(jié)中檢測出MRSA菌株,將加重對人類健康的威脅尤其是免疫力較低的嬰幼兒。

    據(jù)統(tǒng)計(jì),我國每年約有10萬 t抗菌藥物用于養(yǎng)殖業(yè)[29]。隨著抗生素在動物養(yǎng)殖中的大量使用,細(xì)菌為適應(yīng)新的環(huán)境,耐藥性不斷增強(qiáng)。在本研究中,100.0%的菌株都至少耐受4 種抗生素,都表現(xiàn)為多重耐藥,該結(jié)果高于Xing Xiaonan[10]和Papadopoulos[15]等的報(bào)道。因此,相關(guān)部門要嚴(yán)格控制抗生素的使用,防止濫用現(xiàn)象。本研究從罐奶分離的菌株耐藥性比較單一,除對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥外,對其他抗生素均敏感。該結(jié)果提示在抗生素使用時,要防止同種抗生素的重復(fù)使用,以免長期使用造成細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。除此之外,分離于工廠設(shè)備和落地粉的菌株有相同的耐藥譜,且有相同的分子型。因此懷疑可能由于設(shè)備定植金黃色葡萄球菌,進(jìn)而造成乳粉污染。而這3 株分離株除了對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥外,對ERY和TET抗生素有較強(qiáng)的耐藥性。ERY和TET這2 種抗生素在動物養(yǎng)殖及人類治療中的大量使用[30-31],可能是造成菌株耐藥性的關(guān)鍵。此外,分離于加工人員的2 株菌,有不同的耐藥譜。研究表明,20%的人群是金黃色葡萄球菌的持續(xù)攜帶者,而30%左右的人群是間歇性的攜帶者[32]。因此,加工設(shè)備和加工人員工作服定期的消毒清洗及加工人員的規(guī)范操作是保障乳粉不被污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

    對分離株進(jìn)行SPA、MLST和PFGE分型發(fā)現(xiàn),所有的菌株共表現(xiàn)為4 種分型,主要為ST1-D-t127(50.0%,3/6,ST-PT-SPA分型),其次為ST5-A-t002,ST5-B-t548和ST188-C-t189(16.7%,1/6)。其中3 株ST1-D-t127型菌株,2 株來自加工設(shè)備,1 株來自落地粉,且這3 株菌在同一聚簇中,說明在羊奶粉加工過程中,存在不同操作環(huán)節(jié)的交叉污染。此外,有研究報(bào)道稱ST1-t127型菌株是乳品中最常見的分子型菌株[15],本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。本研究在加工人員樣本中分離到1 株ST5-t002型菌株,根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道ST5-t002型菌株主要定植于醫(yī)院和社區(qū)中[33],很少有在乳粉中分離的報(bào)道,但其高耐藥和攜帶較多的新型腸毒素基因,一旦該類型菌株在乳粉中傳播,將會給嬰幼兒健康造成巨大威脅。本研究在加工人員中也其分離到1 株ST5型菌株,但該菌株SPA型為t548,該類型菌株主要存在動物食品中[34],該結(jié)果也說明在乳粉的加工過程中可能存在動物源菌株的入侵。此外,在罐奶中分離到1 株ST188-t189型菌株,該類型菌株主要分離于食品及食物中毒樣本中[35]。綜上所述,需要注意對人源和動物源菌株的防治。重要的是,有研究顯示一些經(jīng)巴氏殺菌處理的金黃色葡萄球菌在乳粉保質(zhì)期內(nèi)可以恢復(fù)活性[1],這可能會對消費(fèi)者構(gòu)成巨大威脅。因此,羊乳粉在加工過程中,一定要注意加工設(shè)備的清洗以及加工人員的消毒。

    本次檢測結(jié)果顯示,羊乳粉加工過程中的罐奶、加工設(shè)備、落地粉及加工人員依舊是加工鏈條中金黃色葡萄球菌的重要來源。此外,分離到的金黃色葡萄球菌耐藥性較強(qiáng),分子型單一且毒素基因攜帶率較高。雖然在成品中沒有分離到金黃色葡萄球菌,不能忽視其產(chǎn)生的耐熱毒素對乳粉的污染。因此,加強(qiáng)奶源地、加工環(huán)節(jié)及加工人員的規(guī)范管理,有針對地對關(guān)鍵污染環(huán)節(jié)進(jìn)行金黃色葡萄球菌的清除非常必要。

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