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    辣椒紅色素和辣椒堿體內(nèi)抗氧化活性及降血脂功能

    2021-03-31 06:51:04范三紅王嬌嬌李佳妮白寶清
    食品科學(xué) 2021年5期
    關(guān)鍵詞:紅色素高脂辣椒

    范三紅,王嬌嬌,李佳妮,白寶清

    (山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,特色植物資源研究與利用山西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山西 太原 030006)

    據(jù)報(bào)道,長期高脂膳食使得高血脂癥(即血脂代謝異常)發(fā)病率呈逐漸上升趨勢[1]。高血脂癥常常伴有糖尿病、動脈粥樣硬化和肝臟、腎臟等組織沉積過多過氧化脂質(zhì)等并發(fā)癥[2-4],嚴(yán)重影響人體健康。臨床上常用他汀類藥物治療高血脂癥[5],同時,從天然可食資源中探索能調(diào)節(jié)人體血脂代謝水平的成分也已成為研究熱點(diǎn)。辣椒屬茄科草本植物,營養(yǎng)豐富,在我國分布較廣且資源豐富[6]。辣椒紅色素是存在于辣椒中的一類天然色素,包括辣椒紅素、辣椒玉紅素、玉米黃質(zhì)素和β-胡蘿卜素等,被廣泛應(yīng)用于食品添加劑和彩妝領(lǐng)域[7]。辣椒紅色素屬于類胡蘿卜素復(fù)烯同類,是VA的前體,研究發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化活性[8-9]。辣椒堿類物質(zhì)是辣椒中的辛辣成分,包括辣椒堿、二氫辣椒堿、降二氫辣椒堿等一系列物質(zhì),具有抑菌抗炎、減肥、調(diào)節(jié)血糖、血脂等藥理作用[10]。

    當(dāng)前大多數(shù)研究都是針對辣椒堿的降血脂活性,較少有針對辣椒紅色素抗氧化活性的報(bào)道,聶乾忠等[11]發(fā)現(xiàn)辣椒素類物質(zhì)對高脂血癥大鼠有降血脂和膽固醇的作用。Manjunatha等[12]研究表明姜黃素和辣椒堿的協(xié)同作用可以減輕高脂喂養(yǎng)大鼠的血脂代謝紊亂,并能減緩由高脂血癥引起的氧化應(yīng)激損失。陳朝軍等[13]研究花椒麻素和辣椒素對實(shí)驗(yàn)性高血脂癥大鼠血脂水平的協(xié)同作用,結(jié)果顯示,不同質(zhì)量比的花椒麻素和辣椒素有降血脂和延緩體質(zhì)量增加的作用。牟文燕等[14]研究不同水平辣椒紅色素對血鸚鵡生長、體形、體色和抗氧化能力的影響,發(fā)現(xiàn)1%辣椒紅色素組血鸚鵡的過氧化氫酶(catalase,CAT)活力顯著高于對照組(P<0.05)。

    本實(shí)驗(yàn)通過飼喂高脂飼料建立高血脂小鼠模型,探討辣椒紅色素的體內(nèi)抗氧化活性和辣椒堿的降血脂作用,以期為辣椒資源的深層探索提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動物、材料與試劑

    SPF級昆明小鼠64 只,體質(zhì)量(23±2)g,由山西省第三人民醫(yī)院提供,生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2019-0010。

    基礎(chǔ)飼料山西省第三人民醫(yī)院;高脂飼料南京盛民科研動物公司;辣椒粉末(編號s4)山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所。

    乙腈、二氯甲烷、石油醚(沸點(diǎn)60~90 ℃)、K2HPO4(均為分析純),甲醇、乙腈、二氯甲烷(均為色譜純),辣椒紅素(純度98%)、玉米黃質(zhì)素(純度97%)、β-胡蘿卜素(純度97%)、辣椒堿(純度99%)、二氫辣椒堿(純度98%)、降二氫辣椒堿(純度98%)北京百靈威科技有限公司;血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、CAT、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)測定試劑盒南京建成生物工程研究所。

    1.2 儀器與設(shè)備

    WJX-800A型高速多功能粉碎機(jī)上海緣沃工貿(mào)有限公司;AL204電子分析天平梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;SB-5200DT型超聲波清洗器寧波新芝生物科技股份有限公司;1260 Infinity II高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)儀美國安捷倫公司;Synergy H1多功能酶標(biāo)儀美國伯騰儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 辣椒紅色素和辣椒堿的制備

    干辣椒經(jīng)粉碎機(jī)粉碎處理,過45 目篩,得到干辣椒粉末。采用三相鹽析體系萃取分離辣椒紅色素和辣椒堿,具體步驟如下:向20 mL的具塞試管中加入0.5 g辣椒粉末、4 g磷酸氫二鉀、4 g乙腈、3.2 g石油醚和8.8 g蒸餾水,充分混勻,45 ℃下超聲輔助萃取10 min。靜置待三相分離后,辣椒紅色素聚集在上相,辣椒堿類物質(zhì)富集于中相,收集上相和中相萃取液,即為辣椒紅色素和辣椒堿提取液,濃縮后冷凍干燥,備用。

    1.3.2 辣椒紅色素和辣椒堿各組分含量測定

    將上相和中相萃取液過0.4 5 μ m 有機(jī)濾膜,進(jìn)行HPLC分析。辣椒紅色素HPLC條件:辣椒紅色素分析色譜柱ZORBAX RX-SIL(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-乙腈-二氯甲烷體積比5∶10∶85,流速為1 mL/min;柱溫為30 ℃;檢測波長475 nm。辣椒堿HPLC條件:色譜柱ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液,流速為1 mL/min;柱溫為30 ℃;檢測波長280 nm。以峰面積外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品溶液進(jìn)樣量均為10 μL。

    1.3.3 動物分組及給藥處理

    小鼠的給藥劑量由實(shí)驗(yàn)室前期藥效學(xué)動物實(shí)驗(yàn)得出的灌胃劑量確定。SPF級昆明種雄性小鼠64 只,飼養(yǎng)于無毒塑料鼠盒中,每盒8 只,飼喂基礎(chǔ)詞料、蒸餾水,室內(nèi)溫度22~25 ℃、相對濕度40%~60%,適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后,稱體質(zhì)量,剔除體質(zhì)量異常的小鼠后。隨機(jī)分為8 組,每組8 只。每天給辣椒紅色素低、中、高劑量組灌胃辣椒紅色素,辣椒堿低、中、高劑量組灌胃辣椒堿,空白對照組和高脂模型組灌胃生理鹽水,連續(xù)飼養(yǎng)4 周,實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由飲水和進(jìn)食。具體分組及給藥方法見表1。

    表 1 動物分組及飼料、灌胃條件(n=8)Table 1 Animal grouping and feeding and gavage conditions (n= 8)

    1.3.4 指標(biāo)測定

    1.3.4.1 血清和組織樣品制備

    實(shí)驗(yàn)第28天末次給藥后,斷食不斷水12 h,稱量體質(zhì)量后摘眼球取全血,低溫冷凍離心機(jī)4 000 r/min離心15 min,分離血清,于-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?。小鼠取血后,頸椎脫臼處死并摘取肝臟,經(jīng)冷生理鹽水沖洗后用濾紙吸干后稱質(zhì)量,用鋁箔紙包好裝入樣品袋,-80 ℃保存待用。測定時取一定量的組織,按1∶9(m/V)的比例加入預(yù)冷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%生理鹽水,在冰上用玻璃勻漿器迅速研磨成10%的組織勻漿,冷凍離心機(jī)4 000 r/min離心10 min后取上清液,-20 ℃保存待測。

    1.3.4.2 小鼠體質(zhì)量及肝臟指數(shù)測定

    每周固定時間,飼喂前稱量每只小鼠體質(zhì)量并記錄。最后解剖小鼠后稱量各肝臟質(zhì)量,肝臟指數(shù)按照下式計(jì)算。

    式中:m為末次稱取的小鼠體質(zhì)量/g;m1為小鼠肝臟質(zhì)量/g。

    1.3.4.3 小鼠體內(nèi)抗氧化指標(biāo)測定

    取備用的小鼠肝組織勻漿,小鼠肝臟組織中MDA含量和GSH-Px、SOD、CAT活力的測定按試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.3.4.4 小鼠體內(nèi)血脂水平測定

    取適量存放于EP管中處理后的小鼠血清,血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C濃度按試劑盒說明書進(jìn)行測定。

    1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

    2 結(jié)果與分析

    2.1 辣椒紅色素和辣椒堿各組分分析結(jié)果

    表 2 辣椒紅色素和辣椒堿各組分含量Table 2 Composition of capsanthin and capsaicin prepared in this study

    由表2可知,經(jīng)HPLC測定辣椒(編號s4)中辣椒紅色素總含量和辣椒堿總含量分別為0.686 mg/g和3.230 mg/g,辣椒堿含量遠(yuǎn)多于辣椒紅色素。HPLC分析鑒定出辣椒紅色素的3 種組分,分別為β-胡蘿卜素、辣椒紅素和玉米黃質(zhì)素,辣椒堿同樣鑒定出3 種組分,分別為降二氫辣椒堿、辣椒堿和二氫辣椒堿。其中辣椒紅色素中辣椒紅素為主要的色素組分,含量為0.632 mg/g,辣椒堿為總辣椒堿的主要組分,含量為1.852 mg/g,二氫辣椒堿含量也較多,為1.014 mg/g。

    2.2 辣椒紅色素和辣椒堿對小鼠平均攝食量的影響

    表 3 不同階段小鼠平均攝食量Table 3 Average food intake of mice during gavage

    辣椒紅色素和辣椒堿對受試小鼠攝食量的影響如表3所示,在整個實(shí)驗(yàn)周期中,小鼠攝食量稍有波動,整體趨于平穩(wěn)。在同一階段,小鼠平均攝食量在4~5 g,組間攝食量均無顯著性差異,由此可以排除實(shí)驗(yàn)過程中由于攝食量增加或減少而引起的包括體質(zhì)量、血脂水平和抗氧化活性等變化。

    2.3 辣椒紅色素和辣椒堿對小鼠體質(zhì)量及肝臟指數(shù)的影響

    表 4 辣椒紅色素和辣椒堿對小鼠體質(zhì)量、肝臟指數(shù)的影響Table 4 Effects of capsaicin and capsaicin on body mass and liver index in mice

    在整個實(shí)驗(yàn)過程中,各組實(shí)驗(yàn)小鼠生長良好,體質(zhì)量均隨時間延長逐漸增長。由表4可知,實(shí)驗(yàn)前各組小鼠質(zhì)量之間無顯著差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,模型組小鼠的體質(zhì)量極顯著高于空白對照組(P<0.01),說明高脂模型的建立對小鼠體質(zhì)量有極顯著的影響。實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量顯著低于高脂模型組小鼠(P<0.05)。灌胃2 周開始,小鼠體質(zhì)量增長速率減慢。灌胃4 周后,辣椒紅色素低、中劑量組小鼠體質(zhì)量顯著低于高脂模型組小鼠(P<0.05),辣椒紅色素高劑量組小鼠體質(zhì)量與高脂模型組相比,差異極顯著(P<0.01)。灌胃4 周后,辣椒堿各劑量組小鼠體質(zhì)量均極顯著低于高脂模型組(P<0.01),且隨著辣椒堿劑量的增大,對小鼠體質(zhì)量的降低作用越明顯;辣椒紅色素各劑量組體質(zhì)量也有所下降,說明辣椒紅色素和辣椒堿可以一定程度上減緩小鼠體質(zhì)量的增長。同時可以看出,同劑量組下辣椒堿對小鼠體質(zhì)量的影響更顯著。與空白對照組比較,模型組的肝臟指數(shù)極顯著升高(P<0.01);而與高脂模型組比較,辣椒堿中、高劑量組肝臟系數(shù)分別為顯著(P<0.05)和極顯著降低(P<0.01)。

    2.4 辣椒紅色素、辣椒堿對小鼠肝臟抗氧化水平的影響

    圖 1 辣椒紅色素和辣椒堿對小鼠肝臟抗氧化活性的影響Fig. 1 Effects of capsanthin and capsaicin on antioxidant system parameters in the liver of mice

    高血脂癥動物往往組織中的脂質(zhì)過氧化物含量較高,GSH-Px是一種重要的還原脂質(zhì)過氧化物的酶類,能催化過氧化氫分解,可防止細(xì)胞膜與其他生物組織免受過氧化損傷[15]。由圖1A可知,高脂模型組GSH-Px活力與空白對照組相比顯著降低(P<0.05)。辣椒紅色素和辣椒堿各劑量組與高脂模型組相比均有升高。辣椒紅色素低、中劑量組與模型組相比顯著升高(P<0.05),辣椒紅色素高劑量組GSH-Px活力與高脂模型組差異極顯著(P<0.01),其活力與空白對照組相差僅4.21%,同時各實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟GSH-Px活力與辣椒紅色素灌胃劑量呈正相關(guān);辣椒堿各劑量組中僅高劑量組的GSH-Px活力極顯著高于模型組(P<0.01),其活力高于模型組52.12%。這表明辣椒紅色素和辣椒堿提取組分能一定程度幫助氧化損傷機(jī)體的GSH-Px活力恢復(fù)至正常水平,提高機(jī)體的抗氧化能力[16]。

    SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,可以保護(hù)細(xì)胞免受自由基攻擊[17]。如圖1B所示,高脂模型組小鼠SOD活力下降,與空白對照組相比差異極顯著(P<0.01),表明長期飼喂高脂飼料能夠使小鼠肝組織的抗氧化能力降低[18]。辣椒紅色素低、中劑量組小鼠SOD活力相差不大,辣椒紅色素高劑量組小鼠SOD活力較高脂模型組上升了31.87%(P<0.01);辣椒堿中、高劑量組SOD活力與模型組相比分別升高了9.59%和15.61%(P<0.05),這說明一定劑量的辣椒紅色素和辣椒堿組分均可以提高小鼠體內(nèi)SOD的活性,但同劑量組下,辣椒紅色素組效果更好。

    CAT在動物肝臟組織中活力較高,在機(jī)體內(nèi)具有抗氧化作用[19]。從圖1C可以看出,高脂模型組小鼠CAT活力顯著下降(P<0.05),辣椒堿高劑量組較模型組的CAT活力增加了21.86%;辣椒紅色素低、中劑量組差異顯著,其CAT活力分別增加了3.10%、12.11%(P<0.05),辣椒紅色素高劑量組CAT活力則極顯著增加了32.72%(P<0.01),表明辣椒紅色素各劑量組小鼠肝臟組織中SOD活力呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系,這與文獻(xiàn)[20]的結(jié)論一致。

    MDA是膜脂過氧化的主要產(chǎn)物之一,其含量代表肝臟的損傷程度,與細(xì)胞氧化損傷的程度呈正相關(guān)[21]。從圖1D可以得出,與空白對照組相比較,模型組小鼠肝臟組織中MDA含量極顯著升高(P<0.01)。與模型組相比較,辣椒堿中、高劑量組MDA含量分別降低28.98%、35.80%(P<0.05);辣椒紅色素低、中、高劑量組MDA含量分別降低26.70%、34.94%、41.19%,說明辣椒紅色素和辣椒堿各組分能不同程度降低小鼠體內(nèi)MDA含量,減輕機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,從而保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性[23]。并且同為高劑量組,辣椒紅色素降低MDA含量比辣椒堿組分高5.39%,隨辣椒紅色素和辣椒堿劑量的增大,其對機(jī)體的保護(hù)作用增強(qiáng)。

    2.5 辣椒紅色素、辣椒堿對小鼠血脂水平的影響

    高血脂癥是血脂代謝異常所致,其主要表現(xiàn)為血清中TC、TG和LDL-C水平過高或HDL-C水平過低[24]。血清中TC、TG水平的異常增加與心血管疾病的發(fā)生呈正相關(guān)。其中HDL-C可作為逆向轉(zhuǎn)運(yùn)TC的載體,其水平增加可加快血液中TC的分解[23]。

    圖 2 辣椒紅色素和辣椒堿對小鼠血脂水平的影響Fig. 2 Effects of capsanthin and capsaicin on blood lipid levels in mice

    如圖2所示,模型組小鼠與空白對照組小鼠比較,TC、TG、LDL-C濃度極顯著升高(P<0.01),HDL-C濃度極顯著降低(P<0.01),表明高脂模型組小鼠出現(xiàn)明顯的血脂代謝紊亂[25]。

    由圖2A可知,與高脂模型組相比,辣椒紅色素高劑量組和辣椒堿高劑量組小鼠血清中TC濃度分別降低了17.17%(P<0.05)和23.26%(P<0.01)。從圖2B可以看出,辣椒堿各劑量組小鼠與高脂模型組小鼠的TG濃度相比差異顯著(P<0.05),與空白對照組對比無顯著差異(P>0.05),且小鼠血清中TG濃度與辣椒堿劑量呈負(fù)相關(guān),即辣椒堿劑量越高,小鼠血清中TG濃度越低,而對于辣椒紅色素各劑量組TG濃度均有所下降,但僅高劑量組小鼠與模型組比差異顯著(P<0.05)。

    如圖2C所示,辣椒紅色素高劑量組小鼠HDL-C濃度較模型組升高了12.99%,辣椒堿低、中劑量組小鼠與高脂模型組小鼠HDL-C濃度相比顯著升高(P<0.05),辣椒堿高劑量組小鼠HDL-C濃度較模型組極顯著升高

    57.14%(P<0.01)。

    從圖2D可以得出,辣椒堿各劑量組小鼠血清中LDL-C濃度與高脂模型組相比均降低,其中辣椒堿低、中劑量組與模型組相比差異顯著(P<0.05),辣椒堿高劑量組差異極顯著(P<0.01),且隨著辣椒堿劑量的升高,小鼠血清中LDL-C濃度降低;辣椒紅色素中、高劑量組LDL-C濃度與模型組相比顯著下降(P<0.05),辣椒紅色素高劑量組和辣椒堿高劑量組小鼠較模型組相比,其LDL-C濃度分別降低了15.32%和24.77%。綜合來看,辣椒紅色素和辣椒堿各劑量組均有一定降低血脂功效,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但辣椒堿富集組分在調(diào)節(jié)小鼠血脂水平上作用更明顯,這與文獻(xiàn)[26]的結(jié)論一致。

    3 討 論

    以天然植物資源辣椒為原料,以三相萃取分離同步得到的辣椒紅色素和辣椒堿提取物為研究對象,通過飼喂高脂飼料建立高血脂癥小鼠模型,經(jīng)不同劑量的辣椒紅色素和辣椒堿灌胃干預(yù)后,對肝臟組織和血清中相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定。

    GSH-Px、SOD、CAT這3 種酶是體內(nèi)重要的抗氧化酶,其活性高低可間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力,MDA是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一,其含量與機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度成正比[27-28]。結(jié)果顯示,經(jīng)辣椒紅色素和辣椒堿富集組分灌胃干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織中的GSH-Px、SOD和CAT活力均高于高脂模型組小鼠,同時各劑量組小鼠肝臟中的MDA含量降低,可初步表明辣椒紅色素和辣椒堿提取物具有一定的體內(nèi)抗氧化活性,降低脂質(zhì)過氧化程度。但對比來看,辣椒紅色素組分的抗氧化作用更明顯,這可能是由于辣椒紅色素組分均為類胡蘿卜素(VA前體),結(jié)構(gòu)中含有共軛雙鍵,其中辣椒紅素單組分還含有共軛酮基和環(huán)戊烷環(huán),使得辣椒紅色素富集組分的抗氧化功效更加顯著[29]。通過測定辣椒紅色素和辣椒堿各劑量組小鼠血清的血脂水平,結(jié)果表明,經(jīng)辣椒紅色素和辣椒堿富集組分灌胃的實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中的TC、TG和LDL-C濃度明顯低于高脂模型組,HDL-C濃度與模型組相比顯著升高[30-31],表明辣椒紅色素和辣椒堿富集組分具有調(diào)節(jié)高血脂癥小鼠血脂代謝異常的功效,其中辣椒堿類物質(zhì)效果更佳,這是因?yàn)槔苯穳A可以激活瞬時電位香草酸1受體,而瞬時電位香草酸1在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝以及保護(hù)心血管系統(tǒng)等方面具有一定作用[32]。這為開發(fā)天然降脂、抗氧化產(chǎn)品,擴(kuò)大辣椒資源的利用提供了新思路和理論參考。

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