• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    SIRT3多酚激活劑的篩選及其對UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞衰老的修復(fù)作用

    2021-03-31 06:50:36YOSHINORIKatakura扈洪波尹淑濤
    食品科學(xué) 2021年5期
    關(guān)鍵詞:漆樹激活劑白藜蘆醇

    陳 慧,YOSHINORI Katakura,扈洪波,尹淑濤,趙 沖,

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083;2.九州大學(xué)農(nóng)學(xué)院生物科學(xué)與生物技術(shù)系,日本 福岡 8128581)

    在哺乳動物中,Sirtuins家族中有7 個成員,沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶類(silent mating type information regulation 2 homolog,SIRT)1~7,它們分別定位于細(xì)胞的不同位置,而SIRT3是唯一定位于線粒體的去乙酰化酶,它可以通過控制蛋白的乙?;?去乙酰化水平調(diào)節(jié)線粒體中酶的活性,影響線粒體功能及細(xì)胞生理狀態(tài)[1]。SIRT3不僅影響能量代謝過程,包括三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化、脂肪酸氧化及酮體的生成,還參與維持線粒體的氧化還原穩(wěn)態(tài)[2]。線粒體內(nèi)電子傳遞過程中因電子泄漏產(chǎn)生的活性氧可損傷線粒體內(nèi)外的大分子及細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),是目前公認(rèn)的與衰老相關(guān)的病理機制之一[3]。事實上,實驗和基因遺傳研究證據(jù)都表明SIRT3活性與延緩衰老有關(guān)。關(guān)于意大利南部人群的研究表明,蘇格蘭人SIRT3基因的單核苷酸多態(tài)性(G477T)3號位點外顯子和數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列(variable number of tandem repeats,VNTR)5號位點內(nèi)含子序列與壽命延長有關(guān)[4-5]。VNTR具有增強子特性,能夠決定SIRT3基因的轉(zhuǎn)錄活性,而缺乏VNTR增強子活性的老人壽命明顯較短。因此,SIRT3在延緩衰老中具有重要的作用,增強SIRT3的轉(zhuǎn)錄活性有利于延緩衰老的發(fā)生。

    多酚類化合物是一類具有良好抗氧化活性的次生代謝產(chǎn)物,廣泛存在于各種可食用植物中,如葡萄、石榴、茶葉、咖啡豆等。綠茶多酚通過上調(diào)SIRT3蛋白表達水平,降低超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)2的乙?;剑瑥亩鰪奡OD2的抗氧化活性,有效緩解高脂飲食誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激造成的腎臟組織損傷[6]。此外,綠茶多酚可降低正常大鼠腎皮質(zhì)4-羥基壬烯酸水平,其可能的機制與上調(diào)腎皮質(zhì)SIRT3的表達有關(guān)[7]。石榴皮多酚Pomegraniin A可減少細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成,依賴于SIRT3介導(dǎo)的去乙?;饔枚鰪奡OD2的抗氧化活性[8]。所以,多酚類化合物是篩選SIRT3激活劑的重要來源之一。根據(jù)結(jié)構(gòu)特點,本實驗選取了常見的食物原料葡萄、茶葉、石榴、青稞中的7 種代表性多酚類化合物,包括白藜蘆醇、山柰酚、石榴皮鞣素、安石榴苷、矢車菊素、飛燕草素葡萄糖苷、漆樹黃酮,以及咖啡豆中的咖啡醇作為篩選SIRT3激活劑的候選化合物(表1)。

    表 1 具有SIRT3潛在激活作用的多酚類化合物Table 1 Polyphenols with potential effect on SIRT3 activation

    前期研究表明,這8 種化合物在人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco2中對SIRT3的轉(zhuǎn)錄激活作用有不同的影響[8],本實驗將進一步探究這8 種化合物對于人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)中的SIRT3轉(zhuǎn)錄活性的影響,并且以中波紫外線(ultraviolet radiation B,UVB)誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞衰老模型,探究SIRT3多酚激活劑是否可以通過SIRT3介導(dǎo)的抗氧化應(yīng)激途徑減少UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,從而修復(fù)細(xì)胞衰老。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    HaCaT購于日本理研生物資源中心。

    白藜蘆醇、山柰酚、石榴皮鞣素、安石榴苷、漆樹黃酮、咖啡醇、矢車菊素、飛燕草素葡萄糖苷美國Sigma公司。

    DMEM培養(yǎng)基日本Nissui公司;0.25%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))胰蛋白酶消化液、胎牛血清美國Life Technologies公司;總R N A 提取試劑盒 瑞士Roche 公司;pEGFP-C3載體日本Takara公司;BES-H2O2-Ac過氧化氫熒光探針日本W(wǎng)AKO公司;SOD2測定試劑盒、谷胱甘肽(glutathione,GSH)/氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)測定試劑盒、SA-β-gal活性檢測試劑盒日本Dojindo公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    CO2培養(yǎng)箱美國Thermo公司;Thermal Cycler Dice Real Time System TP-800聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase hainreaction,PCR)儀日本Takara 公司;IN Cell Analyzer 1000全自動活細(xì)胞圖像分析系統(tǒng) 美國GE Healthcare公司;CL-1000紫外交聯(lián)儀美國UVP公司。

    1.3 方法

    1.3.1 構(gòu)建SIRT3-EGFP報告基因系統(tǒng)

    SIRT3-EGFP報告基因系統(tǒng)按照先前建立的方法[8]進行構(gòu)建。以人類基因組DNA為模板進行PCR擴增人類SIRT3啟動子(-653—-1),將其裝入無啟動子的pEGFP-C3表達載體中,得到特定的pSIRT3p-EGFP質(zhì)粒。利用構(gòu)建的pSIRT3p-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞,用于評價人類SIRT3啟動子的活性。利用IN Cell Analyzer 1000全自動活細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)監(jiān)測EGFP熒光強度的變化,可定量測定SIRT3啟動子的活性。

    1.3.2SIRT3基因表達水平的測定

    細(xì)胞內(nèi)RNA的提取按照總RNA提取試劑盒說明書進行操作。cDNA的合成參照Fujiki等[9]的方法。利用半定量實時熒光定量PCR(quantitative realtime PCR,qPCR)法監(jiān)測細(xì)胞SIRT3基因的mRNA表達水平。以β-actin為內(nèi)參基因。SIRT3和β-actin基因的PCR引物序列分別為:SIRT3前引物序列為5’-CTGTACAGCAACCTCCAGCA-3’,后引物序列為5’-CTCCTTGGCCAAAGTGAAAA-3’;β-actin前引物序列為5’-TGGCACCCAGCACAATGAA-3’,后引物序列為5’-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3’。實驗重復(fù)3 次。

    1.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞衰老模型的建立

    采用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基,置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞。將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)板上進行實驗。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至剛開始出現(xiàn)融合生長時進行UVB照射。吸出培養(yǎng)基,加入少量磷酸緩沖鹽溶液覆蓋細(xì)胞,利用紫外交聯(lián)儀對細(xì)胞進行紫外線處理,照射劑量為10 mJ/cm2,共照射2 次,每隔24 h照射1 次。

    1.3.4 細(xì)胞內(nèi)活性氧相對含量的測定

    細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量采用過氧化氫特異性熒光探針BES-H2O2-Ac法測定。吸出培養(yǎng)基,用pH 7.4的4-羥乙基哌嗪乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid,HEPES)緩沖液洗滌細(xì)胞2 次,然后加入終濃度為5 μmol/L的 BES-H2O2-Ac和Hoechst 33342染料,37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30 min。消化并收集細(xì)胞,HEPES潤洗2 次后采用IN Cell Analyzer 1000全自動活細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進行檢測。

    1.3.5 細(xì)胞抗氧化活性的測定

    通過測定細(xì)胞SOD2相對活力及GSH/GSSG比值評價細(xì)胞的抗氧化活性。按照相應(yīng)試劑盒說明書的操作進行測定。

    1.3.6 細(xì)胞內(nèi)SA-β-gal相對活力的測定

    采用SA-β-gal相對活力檢測試劑盒,按照說明書的操作進行,采用IN Cell Analyzer 1000全自動活細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進行檢測。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    利用SPSS 19.0數(shù)據(jù)處理軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,采用單因素方差分析進行組間比較,Tukey法進行事后檢驗,結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 多酚類化合物對HaCaT SIRT3轉(zhuǎn)錄活性的影響

    圖 1 SIRT3多酚激活劑篩選系統(tǒng)Fig. 1 Screening system for SIRT3 activators from polyphenols

    通過建立HaCaTSIRT3-EGFP報告基因系統(tǒng)(圖1),本實驗共評價了8 種化合物對SIRT3轉(zhuǎn)錄活性的影響。這些化合物包括白藜蘆醇、山柰酚、石榴皮鞣素、安石榴苷、漆樹黃酮、咖啡醇、矢車菊素、飛燕草素葡萄糖苷。依據(jù)前期的研究結(jié)果[10],安石榴苷等幾種多酚化合物在10 μmol/L時顯著修復(fù)了UVB對HaCaT細(xì)胞活力的損傷,因此本實驗中的所有細(xì)胞實驗也均采用了此濃度。通過對EGEP進行熒光定量分析(圖2),結(jié)果表明,與二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)組(對照組)相比,白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇顯著增強了EGFP熒光強度。石榴皮鞣素、矢車菊素和飛燕草素葡萄糖苷對SIRT3的轉(zhuǎn)錄活性影響不顯著。

    圖 2 多酚類化合物對EGFP相對熒光強度的影響Fig. 2 Effect of polyphenols on relative fluorescence intensity of EGFP

    本研究進一步利用qPCR技術(shù),檢測了白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇對HaCaT內(nèi)源性SIRT3基因表達水平的影響(圖3),發(fā)現(xiàn)SIRT3基因表達水平均有顯著上調(diào),與它們增強EGFP水平的結(jié)果具有一致性。因此,白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇能上調(diào)HaCaT中SIRT3基因的表達。

    圖 3 多酚類化合物對SIRT3 mRNA表達水平的影響Fig. 3 Effect of polyphenols on SIRT3 mRNA expression

    2.2 SIRT3多酚激活劑對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量的影響

    圖 4 SIRT3多酚激活劑對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量的影響Fig. 4 Effect of SIRT3-activating polyphenols on intracellular ROSlevels induced by UVB exposure

    紫外線照射是皮膚損傷的重要因素之一。UVB是波長在280~320 nm的中波紫外線,它可以穿透表皮層進入真皮層,從而引起DNA的損傷或是ROS的產(chǎn)生,引發(fā)基因突變及衰老的發(fā)生[11]。為了確定合適的誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生衰老的UVB照射劑量,實驗中設(shè)置4 個照射劑量組,分別為0、6、8、10 mJ/cm2。

    圖4A結(jié)果顯示,UVB照射劑量為10 mJ/cm2時,與空白組相比,細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量顯著增加(P<0.05),6、8 mJ/cm2的UVB照射劑量對細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量沒有顯著影響。因此,UVB照射劑量為10 mJ/cm2可作為誘導(dǎo)細(xì)胞衰老以及篩選抗自由基多酚化合物的最佳劑量。HaCaT在10 mJ/cm2的UVB照射劑量處理之后,SIRT3多酚激活劑白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮及咖啡醇均以10 μmol/L的濃度干預(yù)48 h,按照1.3.4節(jié)中的方法測定細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量,結(jié)果如圖4C所示。為了排除化合物自身對細(xì)胞內(nèi)ROS的影響,同時也檢測了無UVB照射且其他條件相同的情況下細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量(圖4B)。結(jié)果顯示,當(dāng)無UVB照射時,相比于DMSO組,白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮及咖啡醇處理之后,細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量沒有顯著變化,表明這些化合物不會改變正常細(xì)胞內(nèi)ROS的水平。當(dāng)照射劑量為10 mJ/cm2時,白藜蘆醇、安石榴苷、漆樹黃酮及咖啡醇均顯著降低了UVB誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的ROS相對含量,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),山柰酚處理組與對照組中細(xì)胞內(nèi)ROS相對含量無顯著差異??偠灾?,除山柰酚外,其他SIRT3多酚激活劑均能降低UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激水平。

    2.3 SIRT3多酚激活劑對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞SA-β-gal活性的影響

    SA-β-gal是一種溶酶體水解酶,其最佳酶活性是在pH 4.0的條件下,而衰老細(xì)胞在pH 6.0的條件下此酶活性會顯著增強,因此SA-β-gal活性是作為評價細(xì)胞衰老水平的關(guān)鍵指標(biāo)[12]。通過測定細(xì)胞SA-β-gal活性,可進一步驗證10 mJ/cm2的UVB照射劑量是否成功誘導(dǎo)細(xì)胞衰老模型的形成。

    圖 5 UVB照射誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老Fig. 5 Cellular senescence induced by UVB irradiation

    如圖5所示,細(xì)胞從左往右分布,表明細(xì)胞體積逐漸增大。與未經(jīng)UVB照射處理的細(xì)胞相比,10 mJ/cm2照射劑量處理下的細(xì)胞體積變大,SA-β-gal染色陽性細(xì)胞明顯增多,即處于衰老狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量增多。所以10 mJ/cm2照射劑量的UVB處理可以誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的發(fā)生。本研究分別評價了前期篩選得到的SIRT3多酚激活劑白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮及咖啡醇對細(xì)胞衰老的影響,測定它們對UVB處理之后HaCaT SA-β-gal活性的影響。

    圖 6 激活SIRT3的多酚類化合物對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞SA-β-gal活性的影響Fig. 6 Effect of SIRT3-activating polyphenols on intracellular SA-β-gal activity induced by UVB

    圖6表明,在這5 種化合物中,安石榴苷顯著降低了細(xì)胞SA-β-gal活力(P<0.05),而其他4 種化合物對細(xì)胞SA-β-gal活力均沒有顯著影響。以上研究結(jié)果表明,安石榴苷能有效抑制UVB誘導(dǎo)的皮膚細(xì)胞衰老。

    2.4 SIRT3多酚激活劑對細(xì)胞SOD2相對活力和GSH/GSSG比值的影響

    圖 7 激活SIRT3的多酚類化合物對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞SOD2活性的影響Fig. 7 Effect of SIRT3-activating polyphenols on intracellular SOD2 activity induced by UVB

    SOD與GSH是內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)中重要的抗氧化酶及抗氧化物質(zhì)。SOD2是細(xì)胞線粒體內(nèi)一種重要的抗氧化蛋白,通過催化超氧陰離子形成細(xì)胞毒性較弱的H2O2,H2O2進一步分解,從而降低活性氧對細(xì)胞的損傷作用。研究表明SIRT3的激活有助于增強SOD2的活性,從而降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平,維持細(xì)胞氧化還原平衡[13]。GSH在谷胱甘肽過氧化物酶的作用下,將H2O2轉(zhuǎn)化成對細(xì)胞無毒性作用的H2O,而GSH自身則被氧化成GSSG[14]。因此,GSH/GSSG比值可以反映細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平。GSH/GSSG比值也同樣受到SIRT3的調(diào)控,SIRT3通過直接去乙?;饔茫鰪娋€粒體異檸檬酸脫氫酶2活性,提高線粒體內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)水平,而NADPH可介導(dǎo)谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)的活性來維持氧化還原平衡[15-16]。

    由圖7可知,白藜蘆醇與咖啡醇處理組細(xì)胞的SOD2活力顯著增強,而其他多酚類化合物對SOD2活力沒有顯著性影響。

    圖 8 激活SIRT3的多酚類化合物對UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞GSH/GSSG比值的影響Fig. 8 Effect of SIRT3-activating polyphenols on intracellularGSH/GSSG ratio induced by UVB

    圖8中激活SIRT3的多酚類化合物均提高了細(xì)胞GSH/GSSG比值,且與DMSO組相比有顯著性差異,其中安石榴苷與山柰酚的作用效果最佳,GSH/GSSG比值均提高了4 倍以上。

    3 討 論

    衰老是生命有機體的自然規(guī)律和必然結(jié)果,而皮膚作為人體抵御外界環(huán)境的最外層屏障,容易受到外界因素的直接干擾,如長期紫外線的照射則會促進皮膚老化[17]。紫外線誘導(dǎo)皮膚發(fā)生老化的原因之一是過量ROS的產(chǎn)生,而線粒體是ROS產(chǎn)生的主要部位[18-20]。SIRT3屬于哺乳動物SIR2同源基因,定位于線粒體并調(diào)節(jié)線粒體功能,包括代謝、能量穩(wěn)態(tài)和調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)[13]。多項研究表明SIRT3介導(dǎo)的線粒體內(nèi)ROS穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)有助于緩解衰老以及過度氧化應(yīng)激造成的組織損傷[21-23]。SIRT3作為抗氧化調(diào)節(jié)信號通路的上游靶點,激活SIRT3的活性物質(zhì)則具有潛在的抗衰老作用。

    實驗結(jié)果顯示,8 種多酚化合物中白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇可顯著上調(diào)SIRT3基因表達水平(圖2、3),并進一步評價了這5 種SIRT3多酚激活劑對UVB引起細(xì)胞產(chǎn)生過量ROS的清除作用。顯然,除了山柰酚之外,對SIRT3有激活作用的化合物均顯著減少了UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS水平(圖4C)。Vitale等[24]研究發(fā)現(xiàn)在UVB處理HaCaT之前,經(jīng)過白藜蘆醇預(yù)處理的HaCaT內(nèi)產(chǎn)生的ROS減少。白藜蘆醇不僅可以防止UVB照射引起的皮膚氧化損傷,而且對損傷后的皮膚還具有修復(fù)作用。安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇在多種細(xì)胞模型和體內(nèi)動物實驗中均表現(xiàn)有抗氧化活性[25-28],本實驗中它們均顯著降低了UVB處理后HaCaT內(nèi)ROS水平。由此可見,白藜蘆醇、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇是極具潛力的抗氧化活性物質(zhì)。此外,在10 mJ/cm2UVB照射劑量下,HaCaT氧化應(yīng)激水平增加,細(xì)胞發(fā)生衰老(圖5)。在白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮、咖啡醇的干預(yù)下,安石榴苷處理組細(xì)胞的SA-β-gal活性顯著下降,表明安石榴苷能促進UVB所誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的修復(fù)。激活SIRT3的多酚類化合物對細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的修復(fù)具有不同程度的影響(圖7、8),表明這些多酚類化合物除了依賴于SIRT3-SOD2途徑增強細(xì)胞抗氧化活性外,可能還存在其他的機制,如直接清除自由基、作為氧化還原酶底物以及其他氧化調(diào)節(jié)信號通路如Nrf2/Keap1-ARE、MAPK及PI3K/Akt等[29-31]。自由基的過量產(chǎn)生是導(dǎo)致細(xì)胞衰老的因素之一,安石榴苷的抗衰老作用離不開其抗氧化作用,但也可能存在其他的抗衰老機制,如SIRT1介導(dǎo)的核苷酸切除修復(fù)途徑[10],其他SIRT3多酚激活劑在增強細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)活性的同時并沒有改善細(xì)胞的衰老現(xiàn)象。此外,楊明美等[32]的研究表明安石榴苷對UVB誘導(dǎo)的HaCaT損傷具有預(yù)保護作用,主要是通過抑制UVB誘導(dǎo)的MAPK亞族中ERK、JNK和p38的活化,從而減少細(xì)胞凋亡。安石榴苷不僅可以緩解UVB照射引起的皮膚受損,而且對皮膚的損傷及老化具有一定的修復(fù)作用。

    綜上所述,通過SIRT3-EGFP報告基因系統(tǒng)篩選得到5 種多酚類化合物具有增強SIRT3基因表達的作用,分別是白藜蘆醇、山柰酚、安石榴苷、漆樹黃酮和咖啡醇;白藜蘆醇、安石榴苷、漆樹黃酮以及咖啡醇均能有效降低UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS水平;這5 種多酚均顯著提高了GSH/GSSG比值,白藜蘆醇與咖啡醇顯著增強了SOD2活性;安石榴苷不僅可以激活SIRT3,修復(fù)細(xì)胞的抗氧化系統(tǒng),緩解UVB誘導(dǎo)的HaCaT衰老,其抗衰老機制可能與SIRT3-NADPH-GSH/GSSG抗氧化途徑有關(guān)。本研究更加確證了安石榴苷在抗衰老方面的作用并初步探究了其機制,今后將進一步從動物體內(nèi)水平評價安石榴苷在抗衰老方面的效果,并從分子水平深入闡明其作用機制,為安石榴苷在功能食品、護膚產(chǎn)品等方面的應(yīng)用提供充分的理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    漆樹激活劑白藜蘆醇
    葡萄糖激酶激活劑治療2型糖尿病研究進展
    漆樹
    白藜蘆醇研究進展
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:12
    漆樹的眼淚
    不同種源地漆樹種子生物學(xué)特性研究
    替羅非班與纖溶酶原激活劑治療PCI合并慢血流急性STEMI的臨床療效
    尤瑞克林與組織型纖維蛋白酶原激活劑治療急性腦梗死的療效評價
    溶劑法萃取漆樹籽油工藝技術(shù)研究及應(yīng)用
    白藜蘆醇抑菌作用及抑菌機制研究進展
    白藜蘆醇對紅色毛癬菌和煙曲霉菌抑菌作用比較
    美女福利国产在线| 欧美日韩成人在线一区二区| 成人精品一区二区免费| 久久中文字幕人妻熟女| av在线播放免费不卡| 国产精品1区2区在线观看. | 午夜福利,免费看| 999精品在线视频| 不卡av一区二区三区| 国产精品久久电影中文字幕 | 精品一品国产午夜福利视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av成人一区二区三| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美黄色淫秽网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 一区在线观看完整版| 欧美精品一区二区免费开放| 美女主播在线视频| 老鸭窝网址在线观看| 老司机影院毛片| 国产三级黄色录像| 五月开心婷婷网| 精品乱码久久久久久99久播| 热99久久久久精品小说推荐| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜两性在线视频| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲精品一区二区www | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲成人免费av在线播放| 国产免费视频播放在线视频| 后天国语完整版免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 日韩视频在线欧美| 18禁观看日本| 在线 av 中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久久免费视频了| 性少妇av在线| 中国美女看黄片| 人成视频在线观看免费观看| 极品教师在线免费播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 好男人电影高清在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 精品高清国产在线一区| 精品少妇久久久久久888优播| 美女扒开内裤让男人捅视频| 操出白浆在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 在线看a的网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 国产精品国产av在线观看| 国产xxxxx性猛交| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 美女福利国产在线| 国产精品一区二区免费欧美| av天堂久久9| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久这里只有精品19| 中文欧美无线码| 最近最新中文字幕大全免费视频| 美女高潮到喷水免费观看| 一进一出好大好爽视频| 亚洲第一av免费看| 男女午夜视频在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日本av手机在线免费观看| 香蕉国产在线看| 极品教师在线免费播放| 国产欧美日韩一区二区三| 韩国精品一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| av线在线观看网站| 动漫黄色视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 自线自在国产av| 久热爱精品视频在线9| 亚洲av片天天在线观看| 精品国产国语对白av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产99久久九九免费精品| www.熟女人妻精品国产| 桃花免费在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 操美女的视频在线观看| 热99re8久久精品国产| 精品国产一区二区久久| 午夜老司机福利片| 日韩有码中文字幕| 三级毛片av免费| 国产国语露脸激情在线看| 一区在线观看完整版| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| av有码第一页| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜福利欧美成人| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲伊人色综图| 婷婷成人精品国产| 国产亚洲av高清不卡| 免费日韩欧美在线观看| 黑人操中国人逼视频| 久久热在线av| 国产精品一区二区在线不卡| 色综合欧美亚洲国产小说| 最新在线观看一区二区三区| 一区二区av电影网| 两性夫妻黄色片| 日韩大码丰满熟妇| 麻豆av在线久日| 国产成人精品久久二区二区91| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 黑丝袜美女国产一区| 午夜福利免费观看在线| 国产有黄有色有爽视频| 满18在线观看网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产成人av教育| 久久久国产一区二区| 国产精品一区二区在线不卡| 久久99热这里只频精品6学生| 丁香六月欧美| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 下体分泌物呈黄色| 国产精品国产高清国产av | 精品一区二区三区av网在线观看 | 热99国产精品久久久久久7| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一区二区三区精品91| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 99久久精品国产亚洲精品| 夫妻午夜视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲色图综合在线观看| 多毛熟女@视频| 久久人妻av系列| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 天堂8中文在线网| 亚洲成人手机| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品偷伦视频观看了| 青草久久国产| 两人在一起打扑克的视频| 久久久国产一区二区| www.熟女人妻精品国产| 欧美另类亚洲清纯唯美| 99精品在免费线老司机午夜| 另类精品久久| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品国产高清国产av | 久久久国产精品麻豆| 在线观看免费午夜福利视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲成人免费电影在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 最新在线观看一区二区三区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 99在线人妻在线中文字幕 | 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产男靠女视频免费网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 一进一出好大好爽视频| 久久av网站| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费高清在线观看日韩| 中文字幕人妻丝袜制服| 天堂中文最新版在线下载| 满18在线观看网站| 久久精品91无色码中文字幕| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久午夜亚洲精品久久| 成人手机av| 最黄视频免费看| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美成人免费av一区二区三区 | 99re6热这里在线精品视频| 日本黄色日本黄色录像| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 啪啪无遮挡十八禁网站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产一区二区在线观看av| 免费av中文字幕在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 曰老女人黄片| 十八禁高潮呻吟视频| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色视频,在线免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产亚洲av高清不卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品二区激情视频| 成在线人永久免费视频| 久久九九热精品免费| 黄色丝袜av网址大全| 无限看片的www在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人精品在线电影| 亚洲五月婷婷丁香| www.精华液| 成年人午夜在线观看视频| 久久久国产欧美日韩av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 91国产中文字幕| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲成人手机| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线永久观看黄色视频| 久久中文字幕一级| 亚洲熟女精品中文字幕| 高清在线国产一区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产日韩欧美在线精品| av有码第一页| 成年人黄色毛片网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久影院123| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产av国产精品国产| 悠悠久久av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产成人影院久久av| www.熟女人妻精品国产| 欧美性长视频在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜免费成人在线视频| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精华国产精华精| 国产单亲对白刺激| 日日夜夜操网爽| 天堂俺去俺来也www色官网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜日韩欧美国产| 亚洲熟女毛片儿| 国产淫语在线视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲天堂av无毛| 男女高潮啪啪啪动态图| 老司机亚洲免费影院| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲精品美女久久av网站| 最新的欧美精品一区二区| 国产人伦9x9x在线观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产亚洲一区二区精品| 国产男靠女视频免费网站| 深夜精品福利| 久久久久久久精品吃奶| 成人国语在线视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 飞空精品影院首页| 欧美激情 高清一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品一区二区精品视频观看| 波多野结衣av一区二区av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 两个人看的免费小视频| 久久久久网色| av视频免费观看在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品九九99| 波多野结衣一区麻豆| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产亚洲av高清不卡| kizo精华| 天天操日日干夜夜撸| 成人国语在线视频| av不卡在线播放| 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲全国av大片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜福利影视在线免费观看| 在线观看人妻少妇| 国产男女超爽视频在线观看| 国产av又大| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜视频精品福利| 在线天堂中文资源库| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产在线精品亚洲第一网站| 中文亚洲av片在线观看爽 | 午夜视频精品福利| 十八禁网站网址无遮挡| 后天国语完整版免费观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久国产电影| 老汉色av国产亚洲站长工具| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 老司机福利观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久精品成人免费网站| 91麻豆av在线| 一区二区三区乱码不卡18| 韩国精品一区二区三区| 一夜夜www| 国产高清videossex| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久久久久精品吃奶| 色尼玛亚洲综合影院| 久热爱精品视频在线9| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 老鸭窝网址在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 午夜两性在线视频| 国产一区二区激情短视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 免费在线观看日本一区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成人免费观看视频高清| 视频区图区小说| 精品国产国语对白av| 在线观看人妻少妇| 男女下面插进去视频免费观看| av网站在线播放免费| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 黑人操中国人逼视频| 在线观看一区二区三区激情| 久久亚洲真实| www.精华液| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 黄片小视频在线播放| 成人手机av| 午夜福利影视在线免费观看| 色在线成人网| 欧美精品一区二区大全| 搡老乐熟女国产| 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品久久久久久电影网| 午夜91福利影院| 国产日韩欧美亚洲二区| 老司机影院毛片| 在线av久久热| 99国产精品一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久青草综合色| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产免费现黄频在线看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一本大道久久a久久精品| 精品视频人人做人人爽| 久久精品成人免费网站| 99精品在免费线老司机午夜| av天堂在线播放| 满18在线观看网站| 9色porny在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 国产区一区二久久| 激情在线观看视频在线高清 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产午夜精品久久久久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 丝瓜视频免费看黄片| 90打野战视频偷拍视频| 大片电影免费在线观看免费| 一区二区三区激情视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲自偷自拍图片 自拍| h视频一区二区三区| 久久性视频一级片| 亚洲午夜理论影院| 国产又色又爽无遮挡免费看| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品电影一区二区三区 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 午夜福利在线免费观看网站| 国产精品一区二区在线不卡| 妹子高潮喷水视频| 女人久久www免费人成看片| 在线av久久热| 动漫黄色视频在线观看| 日韩视频一区二区在线观看| 正在播放国产对白刺激| www.自偷自拍.com| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲avbb在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 热99久久久久精品小说推荐| 操出白浆在线播放| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日本黄色日本黄色录像| 在线av久久热| 国产精品98久久久久久宅男小说| 老司机影院毛片| 精品国产一区二区久久| 欧美日韩精品网址| 亚洲av电影在线进入| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品久久久久久精品古装| 99国产综合亚洲精品| av一本久久久久| 日韩免费av在线播放| 一夜夜www| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99re在线观看精品视频| 一进一出抽搐动态| 国产精品98久久久久久宅男小说| 露出奶头的视频| 久久青草综合色| 热99久久久久精品小说推荐| 国产区一区二久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久久久久久免费视频了| 一个人免费看片子| 两性夫妻黄色片| 9热在线视频观看99| 天堂动漫精品| 操美女的视频在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 国产av精品麻豆| 国产精品一区二区在线不卡| 精品人妻1区二区| 亚洲人成电影免费在线| 99国产精品一区二区三区| 天堂动漫精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品 国内视频| 香蕉久久夜色| 国产在线免费精品| 一进一出抽搐动态| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| www.自偷自拍.com| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 人妻久久中文字幕网| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 母亲3免费完整高清在线观看| 色综合婷婷激情| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 777米奇影视久久| 中文字幕制服av| 久久亚洲真实| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲,欧美精品.| 高清av免费在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品成人免费网站| 精品国产国语对白av| 男女床上黄色一级片免费看| 三级毛片av免费| 热re99久久精品国产66热6| 91av网站免费观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 蜜桃在线观看..| 狂野欧美激情性xxxx| 久久久久久久国产电影| 国产黄色免费在线视频| 免费日韩欧美在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 免费少妇av软件| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 欧美精品一区二区免费开放| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲av片天天在线观看| www.999成人在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 色在线成人网| 无人区码免费观看不卡 | 男女边摸边吃奶| 欧美性长视频在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美黄色淫秽网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 欧美激情高清一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲久久久国产精品| 国产高清国产精品国产三级| av在线播放免费不卡| 少妇的丰满在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 香蕉国产在线看| 国产亚洲一区二区精品| 午夜福利在线观看吧| 午夜激情av网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产亚洲av高清不卡| 国产福利在线免费观看视频| 一本综合久久免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 怎么达到女性高潮| 人妻 亚洲 视频| 一级片'在线观看视频| 色在线成人网| 亚洲免费av在线视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| bbb黄色大片| 久久久久久久大尺度免费视频| 91国产中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 在线 av 中文字幕| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 色播在线永久视频| 久久久国产精品麻豆| 9色porny在线观看| av视频免费观看在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费少妇av软件| 亚洲免费av在线视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 美国免费a级毛片| 久久国产精品大桥未久av| 美女福利国产在线| 国产一区二区激情短视频| 久久青草综合色| 国产一区二区三区综合在线观看| av国产精品久久久久影院| 岛国毛片在线播放| 黑人操中国人逼视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品国产高清国产av | 亚洲av电影在线进入| 亚洲午夜理论影院| 国产有黄有色有爽视频| 国产在视频线精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一级片免费观看大全| 亚洲一区中文字幕在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一级a爱视频在线免费观看| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品免费视频内射| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品国产高清国产av | 99国产精品一区二区蜜桃av | av不卡在线播放| 18禁美女被吸乳视频| www日本在线高清视频| 交换朋友夫妻互换小说| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 在线观看免费视频日本深夜| 久久性视频一级片| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜福利免费观看在线| 色播在线永久视频| 久久国产精品大桥未久av| 国产亚洲精品一区二区www | 久久国产精品大桥未久av| 午夜福利影视在线免费观看| 天堂中文最新版在线下载| 老司机深夜福利视频在线观看| 99热网站在线观看| 亚洲精品在线观看二区|