自建微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法定量檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I自身抗體及其初步臨床應(yīng)用

何成山，姚曉陽，蔣秀娣，陸志成

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200137）

心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）是在心肌細(xì)胞損傷時(shí)被釋放入血循環(huán)中的，是診斷心肌損傷的重要血清學(xué)標(biāo)志物。cTnI在生理狀態(tài)下為免疫系統(tǒng)的隱蔽抗原，當(dāng)心肌細(xì)胞損傷時(shí)cTnI被釋放出來，觸發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生心肌肌鈣蛋白I自身抗體（cardiac troponin I autoantibody，cTnIAAb）。1996年，BOHNER等[1]首次在急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者血清中發(fā)現(xiàn)cTnIAAb。隨后的多個(gè)研究均證實(shí)cTnIAAb可與cTnI檢測(cè)試劑盒中的檢測(cè)抗體或捕獲抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合cTnI的抗原表位，對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成負(fù)干擾[2]。近年來的研究結(jié)果顯示，除AMI患者外，還有部分?jǐn)U張性心肌病、心肌炎等患者血清中也存在cTnIAAb，并與患者心肌的慢性炎癥、心臟功能受損、心肌損傷后的左室病理性重構(gòu)和心力衰竭的發(fā)生等密切相關(guān)[3-4]。因此，檢測(cè)血清cTnIAAb有重要的臨床意義。目前，國(guó)內(nèi)外尚無商品化的cTnIAAb檢測(cè)試劑盒。文獻(xiàn)報(bào)道的cTnIAAb檢測(cè)主要使用cTnI-肌鈣蛋白T（troponin T，TnT）-肌鈣蛋白C（troponin C，TnC）融合蛋白或cTnITnC融合蛋白作為檢測(cè)抗原，進(jìn)行間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），并進(jìn)行定性檢測(cè)[3，5-7]。由于ELISA的敏感性和重復(fù)性欠佳，且有較多的人為因素可影響檢測(cè)結(jié)果。因此，本研究擬建立一種基于微陣列蛋白芯片技術(shù)的定量檢測(cè)cTnIAAb的化學(xué)發(fā)光免疫分析法。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年5月—2019年5月上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院門急診或住院急性冠狀動(dòng)脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）患者500例（ACS組），其中男320例、女180例，年齡（58.8±10.8）歲。所有患者均依據(jù)《急性冠脈綜合征急診快速診療指南》[8]確診。入院時(shí)采用ARCHITECT i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國(guó)雅培公司）及配套試劑檢測(cè)血漿或血清cTnI，結(jié)果均＞0.1 ng/mL。排除自身免疫性疾病、肝臟疾病、腎臟疾病、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤患者及近期有手術(shù)、外傷和感染史的患者。隨機(jī)選取同期上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院體檢健康者100名作為正常對(duì)照組，其中男60名、女40名，年齡（53.5±11.2）歲。收集所有對(duì)象檢測(cè)后的剩余血清樣本，置于無菌無酶離心管中，-20 ℃保存?zhèn)溆?。本研究?jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有對(duì)象均知情同意。

1.2 檢測(cè)血清cTnIAAb的微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法的建立

1.2.1 抗原包被芯片的制備 將硬基質(zhì)芯片（江蘇三聯(lián)生物工程有限公司）置于含2% NaOH的預(yù)處理液中浸泡24 h，用純水清洗2～8次，再將芯片置于0.5%硅烷水溶液中浸泡30 min。將浸泡好的硬基質(zhì)芯片置于烤箱中，140 ℃烘烤0.5 h。處理完成的芯片密閉保存。將重組人cTnI-C融合蛋白（上海博陽生物診斷公司饋贈(zèng)）用穩(wěn)定劑（江蘇三聯(lián)生物工程有限公司）梯度稀釋，采用Nano-Plotter 2.1全自動(dòng)點(diǎn)樣儀（德國(guó)GeSim公司）將各種濃度的抗原分別點(diǎn)樣于已預(yù)處理的芯片上，點(diǎn)樣量為20 nL/點(diǎn)。將點(diǎn)樣好的芯片分別浸入封閉液中封閉，然后取出芯片，150×g離心1 min，去除殘余封閉液，4 ℃保存待用。

1.2.2 微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法的建立 采用微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法（間接法）檢測(cè)血清cTnIAAb，檢測(cè)儀器為SLXP-001全自動(dòng)生物芯片閱讀儀（江蘇三聯(lián)生物工程有限公司）。具體步驟：（1）在芯片杯中加入1∶100稀釋的待檢血清，孵育30 min；（2）洗滌芯片，將芯片置于辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的抗人IgG溶液中，37 ℃孵育40 min；（3）沖洗芯片，將芯片置于發(fā)光底物溶液中，由電荷耦合器件（charge coupled device，CCD）相機(jī)讀取灰度值。在玻片上抗原點(diǎn)樣為1行4個(gè)點(diǎn)，以4個(gè)點(diǎn)灰度值的平均值作為最終結(jié)果，由儀器自動(dòng)分析圖片并給出結(jié)果。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化 隨機(jī)選取cTnI＞0.1 ng/mL的ACS患者血清100份，采用稀釋液（江蘇三聯(lián)生物工程有限公司配制）1∶100稀釋，采用SLXP-001全自動(dòng)生物芯片閱讀儀篩選出1份信噪比最高的血清樣本，作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化的樣本。優(yōu)化條件以檢測(cè)結(jié)果反應(yīng)信號(hào)高，本底信號(hào)低，信噪比最大為最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件。（1）抗原（cTnI-C融合蛋白）濃度的選擇。從50.0、25.0、12.5、6.0 μg/mL 4個(gè)濃度中選取最優(yōu)抗原濃度。（2）點(diǎn)樣芯片封閉所用封閉液及封閉時(shí)間的選擇。觀察2%人乳、2%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、2%羊乳、2%乳清蛋白的封閉效果；將芯片在不同的封閉液中分別封閉12、24、48和72 h，取出后離心待檢。（3）抗體的選擇。對(duì)不同的抗體（HRP-兔抗人IgG、HRP-山羊抗人IgG、HRP-驢抗人IgG和HRP-鼠抗人IgG，均購自深圳菲鵬公司）進(jìn)行篩選。（4）自制芯片穩(wěn)定性的驗(yàn)證。采用加速穩(wěn)定性試驗(yàn)驗(yàn)證自制芯片的穩(wěn)定性，取1份高濃度cTnIAAb陽性血清（412.6 AU/mL）；另取20片已制備好的芯片，其中4片即刻點(diǎn)樣檢測(cè)，剩余16片在37 ℃溫箱中保存，于第5天、第10天、第20天各取4片點(diǎn)樣檢測(cè)，觀察反應(yīng)灰度值與即刻檢測(cè)的反應(yīng)灰度值的差異。

1.2.4 血清cTnIAAb參考區(qū)間及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 采用建立的微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)100名健康體檢者的血清cTnIAAb濃度，以樣本反應(yīng)灰度值的第95百分位數(shù)為臨界值，并賦值為20 AU/mL，健康人群的參考區(qū)間＜20 AU/mL。選擇cTnIAAb檢測(cè)結(jié)果信噪比最高的血清，使用血清稀釋液從1∶50開始倍比稀釋至1∶12 800，采用微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)cTnIAAb，獲得樣本各稀釋度的灰度值，找出與健康體檢者樣本臨界值對(duì)應(yīng)的發(fā)光信號(hào)灰度值，并賦值為20 AU/mL，以此計(jì)算不同稀釋倍數(shù)樣本中cTnIAAb反應(yīng)的發(fā)光灰度值，繪制cTnIAAb濃度與發(fā)光灰度值對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。血清cTnIAAb濃度的單位為AU/mL。

1.3 微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法的性能評(píng)價(jià)

1.3.1 精密度 （1）重復(fù)性。取cTnIAAb高值（152 AU/mL）和低值（38 AU/mL）血清樣本各1份，1 d內(nèi)連續(xù)檢測(cè)20次，計(jì)算變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。（2）中間精密度。取上述高值、低值血清樣本連續(xù)檢測(cè)3 d，每天連續(xù)檢測(cè) 5 次，計(jì)算CV。

1.3.2 空白限（limit of blank，LoB）和檢測(cè)限（limit of detection，LoD） 以血清稀釋液為樣本，每天連續(xù)檢測(cè)5次，共檢測(cè)4 d，獲得20個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)，取第95百分位數(shù)所在濃度為L(zhǎng)oB。根據(jù)公式 LoD=LoB+1.645s計(jì)算LoD。

1.3.3 線性范圍 用血清稀釋液將1份高濃度cTnIAAb血清樣本從1∶50開始倍比稀釋至1∶12 800，采用微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)，獲得各稀釋度的發(fā)光灰度值，以各稀釋度的理論發(fā)光灰度值為參比，計(jì)算實(shí)測(cè)值與理論值之間的相關(guān)性。以r≥0.99時(shí)的最高樣本濃度為線性范圍上限，LoD為線性范圍下限。

1.4 免疫印跡法鑒定cTnI自身抗體的特異性

將15 μg cTnI-TnC融合蛋白或心肌肌鈣蛋白C（cardiac troponin C，cTnC）（批號(hào)8T57，芬蘭Hytest公司）與上樣緩沖液混合，95 ℃金屬浴加熱5 min，恢復(fù)至室溫后待用。采用100 g/L聚丙烯酰胺凝膠電泳，110 V電泳60 min[Biorad PowerPac基礎(chǔ)電泳儀（美國(guó)Bio-Rad公司）]，將硝酸纖維素（nitrocellulose，NC）膜先用甲醇浸泡1 min激活，再將NC膜、濾紙、電泳凝膠在轉(zhuǎn)膜液中充分浸泡20 min，制成三明治結(jié)構(gòu)，20 V電壓35 min，將電泳條帶轉(zhuǎn)移至NC膜上。NC膜置于5%脫脂奶粉中4 ℃封閉過夜。將cTnIAAb高濃度血清樣本（1∶50稀釋）、抗cTnI單克隆抗體[批號(hào)4T21（820），芬蘭Hytest公司]或抗cTnC單克隆抗體[批號(hào)4T27（1A2），芬蘭Hytest公司]與NC膜室溫孵育2 h；用磷酸鹽吐溫緩沖液（phosphate-buffered saline Tween-20，PBST）洗滌3次，加HRP-羊抗人IgG（1∶500稀釋）或HRP-羊抗鼠IgG（深圳菲鵬公司），室溫孵育1 h，用PBST洗滌3次。在NC膜表面滴上發(fā)光液混合物（上海翊圣生物科技有限公司），曝光后采用Image Guant LAS4000化學(xué)發(fā)光成像分析儀（美國(guó)GE公司）成像。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)性分析評(píng)估cTnIAAb與cTnI的相關(guān)性。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.1.1 包被抗原 cTnI-TnC融合蛋白濃度的選擇 50 μg/mL cTnI-TnC融合蛋白點(diǎn)樣獲得的信噪比最高，故以此濃度作為芯片點(diǎn)樣濃度。

2.1.2 最佳封閉液和封閉時(shí)間的選擇 2% BSA和2%羊乳本底較高，信噪比降低；2%乳清蛋白本底較低，特異性反應(yīng)信號(hào)值也較低；2%人乳封閉液反應(yīng)信號(hào)強(qiáng)，信噪比最高，且“陰性”樣本信號(hào)最低。因此，最佳封閉液為2%人乳。以2%人乳為封閉液，封閉12 h，陽性信號(hào)的信噪比最高；封閉24 h，反應(yīng)信號(hào)值稍有下降；封閉48 h，芯片反應(yīng)信號(hào)明顯降低。因此，最佳封閉時(shí)間為12 h。見圖1。

圖1 最佳封閉液和封閉時(shí)間的選擇

2.1.3 HRP標(biāo)記抗體的選擇 采用4種HRP-抗人IgG抗體與篩選出的4例cTnIAAb陽性樣本和2例cTnIAAb陰性樣本反應(yīng)。HRP-驢抗人IgG抗體、HRP-兔抗人IgG抗體的反應(yīng)信號(hào)較弱，本底信號(hào)也較低；HRP-鼠抗人IgG抗體和HRP-羊抗人IgG抗體獲得的反應(yīng)信號(hào)強(qiáng)，本底信號(hào)尚可，但HRP-羊抗人IgG抗體的信噪比更大。因此，選擇HRP-羊抗人IgG抗體為作二抗。 見圖2。

圖2 酶標(biāo)記抗人IgG的選擇

2.1.4 自制芯片的穩(wěn)定性 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，7 d內(nèi)cTnIAAb的反應(yīng)信號(hào)值幾乎無明顯改變，7～14 d反應(yīng)信號(hào)值逐步下降。與即刻檢測(cè)相比，第14天反應(yīng)信號(hào)值下降約30%，第21天的反應(yīng)信號(hào)值僅為即刻檢測(cè)的40%。見圖3。

圖3 自制芯片穩(wěn)定性評(píng)價(jià)的結(jié)果

2.2 血清cTnIAAb定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線和參考區(qū)間的建立

以健康人群血清樣本反應(yīng)灰度值的第95百分位數(shù)作為臨界值，其相對(duì)應(yīng)的賦值濃度為20 AU/mL，以≥20 AU/mL為cTnIAAb陽性。系列稀釋樣本的反應(yīng)灰度值與理論反應(yīng)灰度值有很好的相關(guān)性（r2＞0.99）。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

圖4 血清cTnIAAb定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)血清cTnIAAb的性能評(píng)價(jià)

2.3.1 性能評(píng)價(jià) （1）重復(fù)性。高值和低值樣本的CV分別為5.02%和11.26%。（2）中間精密度。高值和低值樣本的CV分別為14.13%和7.83%。（3）LoB和LoD。LoB為0.12 AU/mL，LoD為0.23 AU/mL。（4）線性范圍。線性范圍為0.23～815.00 AU/mL。（5）參考區(qū)間。參考區(qū)間為＜20 AU/mL。

2.3.2 免疫印跡法鑒定血清cTnIAAb的特異性 （1）cTnIAAb的特異性。采用免疫印跡法檢測(cè)6例經(jīng)微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定cTnIAAb為強(qiáng)陽性的血清樣本（標(biāo)記為1～6號(hào)，cTnIAAb濃度分別為103.6、153.9、273.6、368.7、356.8、406.5 AU/mL）和1例cTnIAAb陰性血清樣本（cTnIAAb為12.5 AU/mL）。結(jié)果顯示，cTnI-TnC融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為46 000，6例cTnIAAb陽性樣本在相對(duì)分子質(zhì)量40 000～55 000處出現(xiàn)明顯的反應(yīng)條帶，cTnIAAb陰性血清未見該反應(yīng)條帶，陽性對(duì)照條帶清晰（圖5）。（2）排除抗cTnC抗體對(duì)cTnIAAb檢測(cè)的干擾。因本研究采用的包被抗原為cTnI-TnC融合蛋白，故需先排除cTnIAAb陽性血清中可能存在的抗cTnC抗體與cTnI-TnC融合蛋白中的cTnC抗原反應(yīng)而出現(xiàn)的假陽性。采用免疫印跡法檢測(cè)4例cTnIAAb強(qiáng)陽性血清和1例cTnIAAb陰性血清。結(jié)果顯示，僅抗cTnC單克隆抗體陽性對(duì)照（相對(duì)分子質(zhì)量為18 000）在相對(duì)分子質(zhì)量15 000～25 000處出現(xiàn)明顯的反應(yīng)條帶，4例cTnIAAb陽性血清和1例cTnIAAb陰性血清在此處均未出現(xiàn)明顯的反應(yīng)條帶（圖6）。

圖5 免疫印跡法驗(yàn)證cTnIAAb的特異性

圖6 免疫印跡法檢測(cè)cTnIAAb陽性血清對(duì)抗cTnC單克隆抗體的反應(yīng)性

2.4 臨床標(biāo)本的檢測(cè)

以cTnIAAb≥20 AU/mL為陽性。ACS組血清cTnIAAb陽性率為8.4%（42/500），明顯高于正常對(duì)照組[2%（2/100）]（χ2=5.023，P＜0.05）。在cTnIAAb陽性樣本中，有7例樣本（ACS患者6例、正常對(duì)照者1例）cTnIAAb水平為20～30 AU/mL，有23例樣本（ACS患者22例、正常對(duì)照者1例）為31～50 AU/mL，有30例樣本（均為ACS患者）cTnIAAb水平＞50 AU/mL。

ACS組血清cTnIAAb水平為5.43（3.21～8.35）AU/mL，正常對(duì)照組為5.86（3.49～7.82）AU/mL，2個(gè)組之間血清cTnIAAb水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。有76.2%（32/42）的cTnIAAb陽性患者血清cTnI＜0.5 ng/mL，僅有2例cTnI＞10 ng/mL；所有cTnI＞50 ng/mL的樣本均未檢出cTnIAAb。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，ACS組血清cTnIAAb與cTnI無相關(guān)性（r2=0.1，P＞0.05）。

3 討論

cTnIAAb常在缺血性心肌病、擴(kuò)張性心肌病、圍產(chǎn)期心肌病等各種心肌病患者的血循環(huán)中被檢出。有研究結(jié)果顯示，缺血性心肌病患者血清cTnIAAb的檢出率為9.2%[9]～21.3%[10]，cTnIAAb水平較高的患者左心室射血分?jǐn)?shù)明顯低于cTnIAAb陰性者[11]。在圍產(chǎn)期心肌病[12]、長(zhǎng)期血液透析[13]、缺血性心臟病[14]等患者中均發(fā)現(xiàn)血清cTnIAAb陽性，提示心功能受損。周桑等[3]的研究結(jié)果顯示，在入院時(shí)，cTnIAAb陽性AMI患者的超聲心動(dòng)圖結(jié)果與cTnIAAb陰性AMI患者并無差異；隨訪1.4年后，cTnIAAb陽性AMI患者左心室舒張末期容積和左心室收縮末期容積均顯著升高。提示cTnIAAb陽性與AMI后左心室病理性重構(gòu)密切相關(guān)。WU等[15]的研究結(jié)果顯示，cTnIAAb可上調(diào)心肌細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)，使心肌細(xì)胞凋亡增加。鑒于cTnIAAb具有重要的臨床意義，且目前無商品化試劑盒，因此本研究自建了定量檢測(cè)血清cTnIAAb的微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法，并對(duì)該方法的檢測(cè)性能、特異性和臨床應(yīng)用進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。

心肌細(xì)胞損傷后被釋放到血循環(huán)中的cTnI可以游離形式或復(fù)合形式存在，但游離形式的cTnI非常不穩(wěn)定，半衰期僅5 min，因此血循環(huán)中90%的cTnI以cTnI-TnC的穩(wěn)定形式存在[2]。因此，本研究選擇cTnI-TnC融合蛋白作為檢測(cè)抗原，建立定量檢測(cè)cTnIAAb的微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法，除有較好的穩(wěn)定性外，更與病理狀態(tài)下血循環(huán)中存在的cTnI形式相似。本研究對(duì)自建檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，精密度良好（CV＜15%），標(biāo)準(zhǔn)曲線r2＞0.99，線性范圍為0.23～815.00 AU/mL，敏感性高（LoB為0.12 AU/mL，LoD為0.23 AU/mL）。加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，制備好的芯片在37 ℃條件下可穩(wěn)定7 d，這提示芯片可在4 ℃條件下穩(wěn)定60～100 d，基本滿足了大批量實(shí)驗(yàn)或臨床研究的需求。

為了明確自建微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)cTnIAAb的特異性，本研究采用免疫印跡法進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示，6例cTnIAAb陽性樣本在相對(duì)分子質(zhì)量40 000～55 000處均出現(xiàn)明顯的反應(yīng)條帶，而cTnIAAb陰性樣本在此位置無反應(yīng)條帶。cTnI-TnC融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為46 000，因此該位置出現(xiàn)的反應(yīng)條帶應(yīng)是血清中的cTnIAAb與電泳膜上的cTnI-TnC特異性結(jié)合產(chǎn)生的。由于本研究所用的檢測(cè)抗原為cTnI-TnC融合蛋白，因此有可能會(huì)與血清中的抗cTnI-TnC抗體或抗肌鈣蛋白自身抗體結(jié)合，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性。為了排除這種可能性，本研究采用免疫印跡法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，無論是cTnIAAb陽性血清樣本，還是陰性血清樣本，與轉(zhuǎn)膜的cTnITnC融合蛋白均無結(jié)合反應(yīng)，在相對(duì)分子質(zhì)量15 000～25 000處均未出現(xiàn)反應(yīng)條帶；只有抗cTnC單克隆抗體出現(xiàn)明顯的反應(yīng)條帶。這提示血清中的cTnIAAb僅與cTnI-TnC融合蛋白中的cTnI產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)，具有很好的特異性。

HAGHIKIA等[12]的研究結(jié)果顯示，表觀健康人的cTnIAAb檢出率約為6%。TANG等[5]報(bào)道的正常人的cTnIAAb檢出率僅為0.5%。本研究結(jié)果顯示，正常對(duì)照組cTnIAAb的陽性率為2%。不同研究中cTnIAAb陽性率的差異可能與檢測(cè)方法、使用的檢測(cè)抗原等不同等有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，cTnI均陽性的500例ACS患者中，血清cTnIAAb的陽性率為8.4%，顯著高于正常對(duì)照組[2%（2/100）]（P＜0.05）；但2個(gè)組之間血清cTnIAAb水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可能與ACS組cTnIAAb陽性率不高，陰性樣本較多，導(dǎo)致ACS患者的cTnIAAb平均水平較低有關(guān)。為了研究血清cTnI水平與cTnIAAb之間的關(guān)系，本研究進(jìn)一步分析了cTnIAAb陽性患者的臨床資料，結(jié)果顯示，有76.2%（32/42）的cTnIAAb陽性患者血清cTnI＜0.5 ng/mL，所有cTnI＞50 ng/mL的樣本均未檢出cTnIAAb。由此可見，cTnIAAb主要在cTnI水平較低的患者中檢出，在cTnI水平較高的患者中少見。這是否由cTnIAAb對(duì)cTnI的檢測(cè)造成負(fù)干擾，導(dǎo)致cTnI檢測(cè)結(jié)果假性降低所致，尚需進(jìn)一步研究加以明確。

綜上所述，本研究建立的微陣列化學(xué)發(fā)光免疫分析法可用于定量檢測(cè)血清cTnIAAb，檢測(cè)性能基本達(dá)到臨床應(yīng)用要求，為cTnIAAb的臨床應(yīng)用提供了較好的方法學(xué)基礎(chǔ)。